分子生物學

問答

1.簡述基因工程的原理和過程

原理：將一種生物體（供體）的基因與載體在體外進行拼接重組，再轉入另一種生物（受

體）體內，使之按人們的意愿穩定遺傳，表達出新產物或新性狀。

不同基因具有相同的物質基礎;基因是可切割的;基因是可轉移的;遺傳密碼是通用的；

基因可通過復制把遺傳信息傳遞給下T弋；肽段與基因之間存在對應關系

過程：獲得目的基因，?載體的選擇與制備，?構建基因表達載體；目的基因轉入受體細胞；

目的基因的檢測與鑒定。

2.基因治療的載體有幾種？各有何優缺點？

兩種：病毒載體和非病毒載體；

病毒載體：轉染效率高；但制備困難，容量小，靶向特異性差及自身免疫原性和存在生

物安全問題

非病毒載體：安全，制備簡單，容量大，免疫原性低，但效率不高

3.試述復制和轉錄相同與不同之處

相同遵循堿基互補原則以DNA為模板需要依賴DNA的聚合酶合成方向5'-3';

生成磷酸二酯鍵。

不同：

復制轉錄

模板兩條鏈都復制模板鏈復制

酶DNA聚合酶RNA聚合酶

原料dNTPNTP

配對A-T,C-GA-T,C-G,A-U

引物需RNA引物不需要

產物子代雙鏈DNAtRNA,mRNA,rRNA

4.簡述真核生物mRNA的結構特點及其主要功能

大多數真核生物mRNA會在5'端以7甲基-鳥瞟吟及三磷酸鳥苗為起始分子結構，稱

為帽子結構；帽子結構在翻譯起始時有促進核糖體與mRNA結合，加速翻譯起始的作

用，同時可以增強mRNA穩定性

在真核生物mRNA會在3'末端，大多數有一段長短不一的多聚腺昔酸結構，稱為多

聚A尾，一般有十到幾十個腺甘酸鏈接而成。目前認為是RNA合成后加上去的，會隨

著mRNA存在的時間延長逐漸變短，目前認為這種3'末端結構可能與mRNA從核內

向核質轉位及mRNA穩定性有關

5.簡述基因診斷的研究進展及前景

基因診斷指利用現代分子生物學和分子遺傳學的原理和方法，通過檢測基因的存在、結

構缺陷或表達功能異常，對人體狀態和疾病做出診斷的方法和過程

基因診斷已在臨床遺傳學，腫瘤，法醫等領域有著廣泛的應用，如遺傳病診斷，產前診

斷，DNA指紋鑒定等，目前主要的基因診斷方法有核酸分子雜交，PCR,測序及基因

芯片等方法

前景：分子生物學和分子遺傳學的飛速發展必將極大的促進基因診斷技術的進步，如二

代，三代等測序技術的發展，基因診斷將極大發展，如個體化用藥指導等以基因診斷為

基礎的精準醫療將極大促進醫療進步

6.基因診斷的方式有很多，目前常采用的技術方法有幾種？并簡述其基本原理。

PCR:設計并合成一組跨越突變（缺失或插入）斷裂點的引物，將待測DNA樣本進行

PCR擴增，然后進行瓊脂糖凝膠電泳，從擴增片段的大小判斷是否存在缺失或突變。

基因芯片：采用原位合成或顯微打印手段，將數以萬計的探針固化于支持物表面，產生

二維探針微陣列，然后與標記樣品進行雜交，通過檢測雜交信號對生物樣品進行快速，并行

高效的檢測或診斷

直接測序：通過如高通量測序直接測出基因的序列，最準確

Southern印跡法：又稱DNA印漬術，是將存在于凝膠中的DNA分子轉移(印漬)

于固定化介質上并加以檢測分析的技術。DNA轉移至固相支持體的過程中，各個DNA片

段的相對位置保持不變，用放射性標記的DNA與固著于濾鏡上的DNA雜交，經放射自顯

影鎖定與探針互補的電泳條帶的位置。該技術主要用于基因組DNA的分析。

限制性片段長度多態性分析：該技術利用限制性內切酶能識別DNA分子的特異序列，

并在特定序列處切開DNA分子即產生限制性片段的特性又寸于不同種群的生物個體而言，

他們的DNA序列存在差別。如果這種差別剛好發生在內切酶的酶切位點，并使內切酶識別

序列變成了不能識別序列或是這種差別使本來不是內切酶識別位點的DNA序列變成了內切

酶識別位點。這樣就導致了用限制性內切酶酶切該DNA序列時，就會少一個或多一個酶切

位點，結果產生少一個或多一個的酶切片段。這樣就形成了用同一種限制性內切酶切割不同

物種DNA序列時，產生不同長度大小、不同數量的限制性酶切片段。后將這些片段電泳、

轉膜、變性，與標記過的探針進行雜交，洗膜，即可分析其多態性結果。

單鏈構象多態性診斷法：單鏈構象多態性(signlestrandconformation

polymorphism,SSCP)是指單鏈DNA由于堿基序列的不同可引起構象差異，這種差異

將造成相同或相近長度的單鏈DNA電泳遷移率不同從而可用于DNA中單個堿基的替代、

微小的缺失或手稿的檢測。用SSCP法檢查基因突變時，通常在疑有突變的DNA片段附近

設計一對引物進行PCR擴增，然后將擴增物用甲酰胺等變性，并在聚丙烯酰胺凝膠中電泳，

突變所引起的DNA構象差異將表現為電泳帶位置的差異，從而可據之作出診斷。

寡核昔酸探針診斷法：當基因的突變部位和性質已完全明了時，可以合成等基因特異的

寡核苗酸探針（allele-specificoligonucleotide,ASO）用同位素或^同位素標記進行診

斷。探針通常為長20bp左右的核甘酸。用于探測點突變時一般需要合成兩種探針，一種與

正常基因序列完全一致，能與之穩定地雜交，但不能與突變基因序列雜交，?另一種與突變基

因序列一致，能與突變基因序列穩定雜交，但不能與正常基因序列穩定雜交，這樣，就可以

把只有一個堿基發生了突變的基因區別開來。

7.簡述乳糖操縱子（operon）的正負調節機制

1）乳糖操縱子的組成：大腸桿菌乳糖操縱子含有Z、Y、A三個結構基因，分別編碼

半乳糖苗酶、半乳糖普透性酶和半乳糖乙酰轉移酶，此外還有一個操縱序列0、一個啟動

子P和一個調節基因L

2）阻遏蛋白的負性調節：沒有乳糖存在時，I基因編碼的阻遏雷白結合于操縱序列0

處，乳糖操縱子處于阻遏狀態，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時，乳糖作為誘導

物誘導阻遏蛋白變構不能結合于操縱序列浮LW操縱子被誘導開放合成分解乳糖的三種酶。

所以，乳糖操縱子的這種調控機制為可誘導的負調節。

3）CAP的正性調節：在啟動子上游有CAP結合位點,當大腸桿菌從以葡萄糖為碳源

的環境轉變為以乳糖為碳源的環境時，CAMP濃度升高，與CAP結合，使CAP發生變構，

CAP結合于乳糖操縱子啟動序列附近的CAP結合位點,激活RNA聚合酶活性，促進結構

基因轉錄，調節蛋白結合于操縱子后促進結構基因的轉錄，對乳糖操縱子實行正調節，加速

合成分解乳糖的三種酶。

4）協調調節：乳糖操縱子中I基因編碼的阻遏蛋白的負調節與CAP的正調控兩種機

制，互相協調，互相制約。

8.PCR與細胞內DNA復制兩者有哪些主要的相同點和不同點，各舉出5個。

相同：原料都是dNTR遵循堿基互補配對（A-T,C-G），都需要引物，都需要消耗能量,

都需要酶，都需要模板，都能擴增模板DNA

不同：

PCR體內復制

速度快慢

引物單鏈DNA片段RNA片段

場所體外體內

酶Taq酶DNA聚合酶，DNA解旋

酶，DNA連接酶等酶

能量來源熱能ATP

模板一個DNA目的片段整個DNA分子

9.試比較原核生物與真核生物在蛋白質生物合成中的差異

真核生物原核生物

起始復合物合成所9種左右IF1,IF2,IF3,三種

需蛋白因子

起始復合物形成過43S起始復合物的形成；48s起始70s復合物

程的次序差異復合物的形成和80s起始復合物

的形成

肽鏈延長和終止過因子的種類和名稱不同

程

轉錄轉錄翻譯偶聯轉錄翻譯不偶聯

mRNAmRNA模板只有一個翻譯起始點多順反子

和一個終止點,一條mRNA翻譯

T多肽鏈（單W販子）

對小分子蛋白質合不敏感對小分子蛋白質合成抑制

成抑制劑劑敏感

10.癌基因的激活方式有哪些？舉例說明之。

點突變：膀胱上皮H-ras序列與膀胱癌細胞株h-ras序列差別只是外顯子的一個堿基不

同

基因易位:基因領域效應可抑制原癌基因的表達，使之處于非激活狀態，基因易位使基因

重排，基因領域效應消失；B淋巴細胞癌常由于基因重排是c-myc的表達失控

強啟動子的插入：前病毒基因組中長末端重復序列內啟動子和增強子整合在C-myc,活

化了C-myc

基因擴增：如人的急性粒細胞白血病的HL-60細胞株發現c-myc基因大量擴增

低甲基化轉錄調控區的cpG島甲基化可抑制基因轉錄低甲基化某些癌基因如h-ras.

c-myc將大量表達

11.基因工程中常用a互補來篩選重組質粒，請說明其原理。

a互補是指Lac基因上缺失經操縱基因區段的突變體與帶有完整近操縱基因區段的陰性

的突變體之間形成功能互補。在重組質粒中裝入一個大腸桿菌乳糖操縱子的DNA片段

（LacZ基因）,質粒攜帶的半乳糖苗酶基因將正常表達，與大腸桿菌的半乳糖苗酶基因互

補，產生有活性的半乳糖苗酶，加入人工底物XOgal和誘導劑IPTG后，出現藍色的菌

落。如果在多克隆位點上插入外源基因，將使lacZ基因滅活，不能生成有活性的半乳

糖苗酶，結果出現白色菌落。

12.列出四種天然存在的具有催化活性的RNA:I型內含子、II型內含子、RNaseP、錘頭

型核酶。

13.什么是分子伴侶？其促進蛋白質折疊的機理？

分子伴侶是細胞中的一大類蛋白質，是由不相關的蛋白質組成的一個家系,它們介導其

它蛋白質的正確裝配，但自己不成為最后功能結構中的組分。

1.分子伴侶通過提過一個保護環境從而加速蛋白質折疊成天然構象或形成四級結構；

2.分子伴侶可逆性的與未折疊的肽段的疏水部分結合后又松開，如此反復進行可防止

錯誤的聚集發生，使肽鏈正確折疊；

3.分子伴侶也可與錯誤聚集的肽段結合，使之結局后再誘導其正確折疊；

4.分子伴侶在蛋白質分子折疊過程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用。

14.什么是酮體？酮體的生成和利用有哪些酶類？酮體代謝的特點和意義。

酮體是脂肪氧化的中間產物，即乙酰乙酸，如羥丁酸和丙酮統稱。HMGCoA合成酶是

此途徑的限速酶；還有乙酰乙酸輔酶硫解酶；HMGCoA裂解酶，卜羥丁酸脫氫酶。酮

體在肝臟生成，肝外利用。酮體生成是肝臟輸出能源的一種方式，葡萄糖不足時，可以

提供能量。大腦不能利用脂肪酸，可利用酮體，其可通過毛細血管壁。酮體利用的增加

可減少糖的利用，有利于維持血糖水平恒定，節省蛋白質消耗。

15.簡述PCR的基本原理及其應用

PCR,聚合酶鏈式反應，基本工作原理是以擬擴增的DNA分子為模板，以一對分別與

模板互補的寡核昔酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復制的機制沿

著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。不斷重復這一過程,可使目的DNA片段得到

擴增。因為新合成的DNA也可以作為模板因而PCR可使DNA的合成量呈指數增長。

應用：分子生物學等學科的研究、基因探針的制備、序列分析、法學領域、蛋白質工程

等領域均有應用。

16.分別從DNA水平、轉錄水平、轉錄后水平、翻譯及蛋白水平來說明真核基因表達調控

DNA水平上的調控是通過改變基因組中有關基因的數量、結構）1質序和活性而控制基因

的表達。這一類的調控機制包括基因的擴增、重排或化學修飾；

轉錄水平上，DNA分子上的順式作用元件以及反式作用因子對基因表達有調節活性；

轉錄后水平，真核基因組有內含子和外顯子，所以初轉錄產物hnRNA會經過加帽、加

尾和剪接等步驟的加工才能成為成熟的mRNA分子;

翻譯水平如阻遏蛋白可與mRNA結合,可以阻止蛋白質的翻譯等。

蛋白水平上，翻譯出的多肽鏈還需通過正確的折疊、切割、化學修飾等過程,才能產生

具有生物學活性的蛋白質。

17.試述SNP的概念及其意義，和尋找SNP的研究方法

單核甘酸多態性,即基因組DNA序列中單個核昔酸（AGCT）變異所引起的DNA序列

多態性。是人類可遺傳的變異中最常見的一種。

意義：具有已知性、可遺傳性、可檢測性，用于疾病基因的定位、克隆和鑒定。尋找疾

病相關的突變位點，發展疾病預防策略，發展個性化醫療，可以通過對藥物靶點個體差

異性分析，發展個性化藥物、方法治療。還可以用于法醫領域和器官移植領域。

18.試述原核生物RNA的種類和結構

轉運RNAtRNA轉運氨基酸

核蛋白體RNArRNA核蛋白體組成成

信使RNAmRNA蛋白質合成模板

不均一核RNAhnRNA成熟mRNA的前體

小核RNAsnRNA參與hnRNA的剪接

小胞漿RNASCRNA/7SL-RNA蛋白質內質網定位合成的信號識別體的組成成分

反義RNAanRNA/micRNA對基因的表達起調節作用

核酶RibozymeRNA有酶活性的RNA

19.試述基因轉錄的基本特征

轉錄與復制的相同點都在酶的催化作用下，以DNA為模板，按堿基互補配對的原則，沿5,

-3'方向合成與模板互補的新鏈.

轉錄與復制的差別：1.轉錄只發生在一部分區域.約3%的DNA序列最后被表達成為成

熟的mRNA進入細胞質中，指導蛋白質的合成.

2.轉錄時只有一條鏈為模板，稱為模板鏈或反義鏈，而另一條稱為有意義鏈或編碼鏈.DNA

復制時，兩條鏈都用作模板.

3.轉錄起始不需要引物的參與，而DNA復制一定要引物的存在.

4.轉錄的底物是4種瞬核甘三磷酸(rNTP),即ATP、GTP、CTP和UTP;RNA與模板

DNA的堿基相互配對關系為G-C和A-U.而復制的底物是dNTP,堿基互補配對關系為

G-C和A-T.

5.RNA的合成依賴于RNA聚合酶的催化作用，而DNA復制需要DNA聚合酶，兩種聚合

酶系不同.

6.轉錄時DNA-RNA雜合雙鏈分子是不穩定的,RNA鏈在延伸過程中不斷從模板鏈上游

離出來，模板DNA又恢復雙鏈狀態，?而DNA復制叉形成之后一直打開，不斷向兩側延伸,

新合成的鏈與親本鏈形成子鏈.

7.真核生物基因和rRNA、tRNA基因經轉錄生成的初級轉錄物一般都需經過加工，才能

具有生物功能和成熟的RNA分子.

20.已知一種突變的噬菌體蛋白是由于單個核甘酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質

和突變體蛋白質用胰蛋白酶消化后進行指紋圖分析。結構發現只有一個肽段的差異，測

得其氨基酸順序如下：

正常肽段：Met-Val-Cys-Val-Arg

突變體肽段：Met-Ala-Met-Arg

1）指出此肽段在該蛋白質分子中的位置：前端

2）什么樣的突變（什么核昔酸插入到什么地方）導致了氨基酸順序的改變？

在正常肽段的第一個Vai的密碼GUA的G后插入了一個C

3）推導出編碼正常肽段和突變體肽段的核甘酸序列：

正常:AUGGUAUGCGUXCGX

突變:AUGGCUAUGCGU

提示：有關氨基酸的簡并碼：

VakGUUGUCGUAGUGCys:UGUUGC

Arg:CGUCGCCGACGGAGAAGG

Ala:GCUGCCGCAGCG（Met:AUG）

21.試述真核生物基因組的特點

遠大于原核生物基因組，基因數龐大，結構復雜，含多個復制起始位點；基因組與蛋白

質結合成染色體，儲存于細胞核中；基因為單順反子；多為不連續斷裂基因，由內含子

和外顯子鑲嵌而成；非編碼基因多于編碼基因；含大量重復序列；功能相關基因構成各

種基因家族

22.原核生物基因組的結構特點

1.基因組由一條環狀雙鏈DNA組成；2.只有一個復制起始點；3.大多數結構基因組

成操縱子結構；4.結構基因無重疊現象；5.無內含子，轉錄后不需要剪接；6.基因組

中編碼區大于非編碼區；7.重復基因少，結構基因一般為單拷貝；8.有編碼同工酶的

等基因；9.基因組中存在可移動的DNA序列10.非編碼區主要是調控序列。

23.從高等真核生物基因組中克隆的完整基因為什么在大腸桿菌中不能正常表達？

真核生物和原核生物啟動子不同，且真核生物基因組為斷裂基因，由內含子和外顯子鑲

嵌而成，完整基因組轉入，沒有相應的啟動子，不能啟動mRNA轉錄，且內含子不能

正確剪切，所以不能表達

24.試述基因工程中理想載體的條件，并簡單舉例常用載體的種類

條件：1.必須由自身的復制子；2.載體分子上必須有限制性核酸內切酶的酶切位點，即

多克隆位點，以供外源DNA的插入；3.載體應具有可供選擇的遺傳標志，以區別陽性

重組子和陰性重組子；4.載體分子必須有足夠的容量；5.可通過特定的方法導入細胞；

6.對于表達載體還應具備與宿主細胞相適應的啟動子、前導序列、增強子、加尾信號等

DNA調控元件。

種類：質粒，噬菌體，YAC,BAC

1.簡述基因治療的策略（寫出一些腫瘤基因治療的一些策略。5/7/8）

L基因矯正：對于致病基因中的異常堿基進行精確修復，使其恢復正常功能。

2、基因置換：基因置換就是用正常的基因原位替換病變細胞內的致病基因,使細胞內

的DNA完全恢復正常狀態。這種治療方法最為理想，但目前由于技術原因尚難達到。

3、基因修復：基因修復是指將致病基因的突變堿基序列糾正，而正常部分予以保留。

這種基因治療方式最后也能使致病基因得到完全恢復，操作上要求高，實踐中有一定難

度。

4、基因修飾又稱基因增補，將目的基因導入病變細胞或其它細胞，目的基因的表達產

物能修飾缺陷細胞的功能或使原有的某些功能得以加強。在這種治療方法中，缺陷基因

仍然存在于細胞內，目前基因治療多采用這種方式。

5、基因失活：利用反義技術能特異地封閉基因表達特性，抑制一些有害基因的表達，

已達到治療疾病的目的。用此技術還可封閉腫瘤細胞的耐藥基因的表達增加化療效果。

6、免疫調節：將抗體、抗原或細胞因子的基因導入疾人體內，改變病人免疫狀態,達

到預防和治療疾病的目的。

7、自殺基因治療，導入腫瘤細胞后，會產生一種酶，該酶使低毒藥物前體轉化為能夠

殺死腫瘤細胞而對正常細胞無害的物質

8、耐藥基因治療：在腫瘤化療過程中，把產生抗藥物毒性的基因導入患者體內，從而

使患者能耐受更大劑量的化療。

25.請闡述細菌操縱子模型的基本結構，并舉例說明阻遏型操縱子的基因表達調節機制

在原核生物中，功能相關基因成簇地串聯、密集于染色體上，共同組成一個轉錄單位,

通常由兩個以上的編碼序列與啟動序列、操縱序列以及其他調節序列在基因組中成簇串

聯組成。

色氨酸操縱子為阻遏型操縱子，其基因表達調節機制為：

1.阻遏作用：

1）輔阻遏蛋白（trpR的產物）通過與操縱基因的結合與否來控制基因是否被轉錄；2）

輔阻遏蛋白的活性受到色氨酸水平的控制，色氨酸水平高時，色氨酸與輔阻遏蛋白結合

激活了輔阻遏蛋白，并與色氨酸操縱子緊密結合，因此可以阻止轉錄。當色氨酸水平低

時，阻遏蛋白以一種非活性形式存在，不能結合DNA。在這樣的條件下,trp操縱子被

RNA聚合酶轉錄，同時Trp生物合成途徑被激活。

2.弱化作用：色氨酸操縱子轉錄終止的調控是通過弱化作用實現的。色氨酸操縱子前導

區的堿基序列包括4個分別以1、2、3和4表示的片段，能以兩種不同的方式進行堿基

酉己對,trp濃度高時，2-3不配對，3、4區自由配對形成莖環狀終止結構，轉錄停止；trp

濃度低時，2,3配對，4區片段無配對，結構基因轉錄。

26.什么是反義RNA?請闡述反義RNA參與真核基因表達調控的可能作用位點及其機制

堿基序列正好與有意義的mRNA互補的RNA稱為反義RNA。

真核細胞中有三類反義RNA:I類:這類反義RNA直接作用于其靶mRNA的SD序列

和/或編碼區，引起翻譯的直接抑制（IA類）或與靶mRNA結合后引起該雙鏈RNA分子

對RNA酶m的敏感性增加，使其降解（IB類）。II類:這類反義RNA與mRNA的SD

序列的上游非編碼區結合，從而抑制靶mRNA的翻譯功能。其作用機制尚不完全清楚，

可能是反義RNA與靶mRNA的上游序列結合后會引起核糖體結合位點區域的二級結構

發生改變，因而阻止了核糖體的結合。m類:這類反義RNA可直接抑制靶mRNA的轉

錄。

27.請說明你所了解的檢測基因點突變的二種基于PCR技術的分析方法的技術原理及主要

操作流程（重點描述點突變的分析原理，PCR原理可省略）

SSCP/PCR:通過PCR同時擴增待測基因和野生型對照基因的DNA片段，將擴增的雙

鏈DNA變性成單鏈,用非變性聚丙烯酰胺凝膠進行電泳分離。待測基因的單鏈DNA

上單個堿基的改變可導致構象的改變，其電泳遷移率也會發生改變。通過比較這兩者的

遷移率，即可判斷是否發生基因突變。

RFLP/PCR:通過PCR同時擴增待測基因與正常型對照基因的DNA片段，將擴展后的

DNA進行酶切鑒定，由于個體之間的DNA的核甘酸序列存在差異，若發生點突變而

因此改變了限制性內切酶的酶切位點則可導致相應的限制性片段的長度和數量發生變

化。

變性高效液相色譜:基本原理是利用PCR擴增過程的單鏈DNA產物可以隨機與互補鏈

相結合而成雙鏈的特性，依據最終產物中是否會出現異源雙鏈來判斷待測樣品中是否存

在點突變。若被測DNA片段中不存在點突變，所有PCR產物都具有相同的序列，即只

產生同源雙鏈。若存在點突變，PCR反應體系中會產生4種不同的DNA雙鏈分子，2

種同源、2種異源雙鏈。在特定的部分變性洗脫條件下，不同源的DNA片段的變性程

度將有別于同源雙鏈，由此造成因DNA分子電荷量等的差異而在液相色譜中呈現出不

同的滯留時間。

28.信號肽的結構特征及功能

結構特征L一般帶有10-15個疏水氨基酸，位于蛋白質的N端；2、在靠近N端有

一個或數個帶正電荷的氨基酸；3、C端有一個能被信號肽識別的位點；4、沒有嚴格的

專一性；5、信號肽可能是一種環狀結構，而非是以一種直線通過雙脂層膜；（6、在C

端靠近蛋白酶切點處常有數個極性氨基酸，離切割位點最近的那個氨基酸往往帶有很短

的側鏈；7、廣義上的信號肽是初生蛋白質穿過膜必須的疏水性肽段，它位于蛋白質各

部位。）

功能：L保證蛋白質順利轉運；2、延伸功能；3、能和新生的分泌蛋白的信號肽相結

合；4、能和位于膜上的蛋白受體相結合。

29.簡述CAMP信號轉導途徑？

答：1、組成：胞夕息分子（主要是胰高血糖素、腎上腺素和促腎上腺皮質激素），受

體，G蛋白，腺甘酸環化酶，CAMP,PKA。

2、途徑：

信號分子與受體結合，引起受體構象變化；受體活化G蛋白；活化后的G蛋白激活腺

甘酸環化酶；腺苜酸環化酶催化ATP生成CAMP;CAMP活化PKA,PKA使目標蛋白

磷酸化，調節代謝酶的活性或調節基因的表達

30.簡述IP3-Ca2+信號途徑：

答案要點：信號分子與受體結合，引起受體構象變化，受體活化G蛋白，活化后的G

蛋白激活PLC,PLC水解PIP2生成IP3和DG,IP3使鈣通道打開，細胞內Ca2+升高，

Ca2+與CaM結合，激活Ca2+-CaM依賴的蛋白激酶，Ca2+-CaM依賴的蛋白激酶使

目標蛋白磷酸化。

31.請敘述DNA多態性的基本概念及其分子基礎(序列/長度的多態性)

DNA的多態性指正常人群中,DNA分子或基因的某些位點可以發生中性改變，使DNA

的一級結構各不相同，但并不影響基因的表達；DNA的多態性可以看作是在分子水平

上的個體區別的遺傳標志。

32.人工構建的哺乳動物細胞表達載體應具備哪些條件？

⑴原核DNA序列：為了能在大腸桿菌中增殖,得到大量能轉染哺乳動物細胞的重組

DNA，哺乳動物表達載體中通常有一段原核序列，包括一個能在大腸桿菌中自身復制的復

制子，便于挑選含重組DNA細菌的抗生素抗性基因，以及便于把真核序列插入載體的少

數單一限制性酶切位點。當具備這些序列以后，外源的真核基因序列可由單一酶切位點插

入載體中，形成的重組DNA可在大腸桿菌中增殖，經抗生素篩選后進行DNA提取，即可

得到大量的所需的哺乳動物細胞表達載體。

(2)啟動子：根據宿主細胞類型選擇不同的啟動子。

(3)增強子：增強子是使啟動子的基因轉錄效率顯著提高的一類項式作用元件，有多個

獨立核昔酸序列組成。許多增強子只能在特定的組織或細胞中起作用，即具有組織細胞的特

異性，因此在構建真核表達載體的時候，應根據宿主細胞來選擇增強子。

(4)剪接信號：真核基因由許多內含子和外顯子組成。被轉錄成mRNA前體以后，需

通過剪除內含子、連接外顯子才能成為成熟的mRNAo

(5)終止信號和多聚腺昔化的信號

(6)遺傳標記：從成千上萬個哺乳細胞中檢測出極少數的含DNA重組體的轉染細胞，

并鑒定已導入外源DNA是哺乳動物細胞基因表達系統的一個關鍵內容。

33.DNA的保真性

1,子代DNA鏈以母鏈為模板按嚴格的堿基互補配對規律生成，保證子代DNA與母

代DNA雙鏈在堿基序列上的一致性，從而保留了親代的全部遺傳信息。

2.堿基選擇功能，DNA聚合酶ZI能保證選擇正確配對的堿基合成子鏈。

3.復制中如出現錯配，DNA聚合酶I和IB均由及時校對功能，切除錯配堿基后,重

新連接正確的堿基。

4.原核及真核均存在對DNA分子中的錯誤或損傷進行修復的機制。

5.引物生成的作用還盡量減少DNA復制起始處的突變，因為復制起始最復雜也最容

易出錯,若引物出現錯配，最終會被切除，被序列正確的DNA片段取代。

34.什么是基因表達調控中的順式作用元件和反式作用因子，試舉例說明他們對基因表達調

控的影響。

反式作用因子：是指真核細胞內含有的大量可以通過直接或間接結合順式作用元件而調

節基因轉錄活性的蛋白質因子。

順式作用元件：主要指真核生物中，與結構基因處于同一DNA分子的，可調節基因轉

錄的DNA特殊序列，主要包括啟動子、增強子、沉默子、和可誘導元件等。

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35.蛋白質的延長過程。

1.進位：根據A位上密碼引導，相應的氨基酰-tRNA進入A位，稱為進位。