第一節(jié)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)第二節(jié)急性毒性試驗(yàn)第三節(jié)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)第六章主要內(nèi)容按接觸時(shí)間分類(lèi)：急性毒性試驗(yàn)亞急性毒性試驗(yàn)亞慢性毒性試驗(yàn)慢性毒性試驗(yàn)一般毒性作用及評(píng)價(jià)

毒性參數(shù)和安全限值的劑量軸低高

──┼───┼─┼─┼─────┼─┼─┼───┼──┼─┼──┼→安全限值NOAEL

閾LOAELNOAEL閾LOAELMTDMLDLD50

LD100

或VSD└────┘└────┘LD01

慢性急性

第二節(jié)

急性毒性試驗(yàn)

1概念急性毒性:機(jī)體一次接觸或24小時(shí)內(nèi)多次接觸化學(xué)物后在短期(<14天)內(nèi)所發(fā)生的毒性效應(yīng)。第二節(jié)急性毒性作用及其評(píng)價(jià)2急性毒性試驗(yàn)?zāi)康呐c常用參數(shù)2.1目的：○評(píng)價(jià)化學(xué)物對(duì)機(jī)體的急性毒性的大小（以LD50表示）、毒效應(yīng)的特征和劑量-反應(yīng)關(guān)系，根據(jù)LD50進(jìn)行毒性分級(jí)。○為亞慢性和慢性及其他毒理實(shí)驗(yàn)的接觸劑量提供依據(jù)○為毒作用機(jī)制研究提供線(xiàn)索

2.2急性毒性常用參數(shù)：

毒性上限參數(shù)：死亡為終點(diǎn)毒性下限參數(shù)：非致死性指標(biāo)致死劑量：①絕對(duì)致死量（LD100）

②半數(shù)致死劑量或濃度（LD50或LC50）③最小致死量（MLD，LD01）

③最大耐受劑量（MTD，LD0）2.2.1毒性上限參數(shù)（1）急性毒性（LOAEL）觀察到有害作用的最低劑量（2）有害作用閾（threshold）（3）急性毒性（NOAEL）未觀察到有害作用劑量

2.2.2毒性下限參數(shù)

毒性參數(shù)和安全限值的劑量軸低高

──┼───┼─┼─┼─────┼─┼─┼───┼──┼─┼──┼→安全限值NOAEL

閾LOAELNOAEL閾LOAELMTDMLDLD50

LD100

或VSD└────┘└────┘LD01

慢性急性

3LD50在毒理學(xué)中應(yīng)用概念：LD50化學(xué)毒物引起一半受試對(duì)象死亡的劑量最重要最常用的參數(shù)，毒性分級(jí)的依據(jù)統(tǒng)計(jì)處理得出的數(shù)值較少受實(shí)驗(yàn)個(gè)體易感性差異的影響。高重現(xiàn)性反映群體大多數(shù)的感受性處于劑量反應(yīng)關(guān)系曲線(xiàn)變化最敏感部位。

3.1LD50的意義及應(yīng)用3.2LD50局限性影響因素多只代表一個(gè)劑量界點(diǎn)不能反映中毒特征4.

揮發(fā)性的影響5.接觸途徑的影響6.LD50的波動(dòng)性7.物種差異，性別的差異8.劑量反應(yīng)關(guān)系斜率9.獲得信息有限10.近似值

3.2

LD50的局限性3.3LD50的補(bǔ)充參數(shù)（急性毒作用帶\LD84/LD16\劑量反應(yīng)曲線(xiàn)斜率）1.Zac=LD50/Limac※Zac反映急性域劑量距離LD50的寬窄死亡----最低毒作用劑量的寬窄※Zac值越大，急性死亡危險(xiǎn)性越小2.

LD84/LD16LD50加減一個(gè)S

（累計(jì)死亡率是15.9%和84.1%）3.劑量反應(yīng)曲線(xiàn)斜率3.3LD50的補(bǔ)充參數(shù)

為了評(píng)價(jià)化學(xué)毒物急性毒性的強(qiáng)弱及其對(duì)人類(lèi)的潛在危害程度，當(dāng)前各國(guó)都參照相應(yīng)的急性毒性分級(jí)（acutetoxicityclassification）標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)化學(xué)毒物的急性毒性。4急性毒性評(píng)價(jià)4.1急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)意義：視化學(xué)物毒性評(píng)價(jià)和安全管理的一個(gè)共同尺度。各國(guó)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)不一樣。4.2不同用途的化學(xué)物分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)p79-804急性毒性評(píng)價(jià)微毒＞5000＞5000＞5000

◎

LD50值及急性毒性定級(jí)

◎急性毒作用帶（Zac）

◎劑量-反應(yīng)曲線(xiàn)斜率

◎中毒癥狀及程度

◎出現(xiàn)癥狀的時(shí)間

◎死亡前征兆及死亡時(shí)間

◎存活動(dòng)物的體重變化

◎死亡動(dòng)物的病理變化等

4.3急性毒性評(píng)價(jià)內(nèi)容

5急性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)○實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備○染毒途徑的選擇○染毒劑量的選擇○染毒周期與毒效應(yīng)觀察5.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和處置◎體重：大鼠：180-220g，小鼠：18-22g，◎

性別：♀♂各半◎動(dòng)物檢疫：5-7天◎染毒途徑：模擬人可能接觸途徑◎灌胃、禁食◎試驗(yàn)劑量和方法（視法方法定）◎觀察時(shí)期和內(nèi)容：14天，中毒癥狀，特征◎動(dòng)物常見(jiàn)表現(xiàn)：興奮—抑制—死亡◎死亡動(dòng)物的解剖

5.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和處置1.3.1大鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)：根據(jù)預(yù)試結(jié)果，正式試驗(yàn)雌雄鼠均設(shè)計(jì)為1000mg/kg、2150mg/kg、4640mg/kg和1000mg/kg四個(gè)劑量組。（劑量與分組）每組雌雄性SD大鼠各5只（動(dòng)物數(shù)）。2150mg/kg以下劑量組以1ml/100g.bw于動(dòng)物空腹下一次性灌胃染毒，4640mg/kg以2ml/100g.bw一次灌胃，1000mg/kg劑量組以2ml/100g.bw兩次灌胃，中間間隔2小時(shí)（染毒方法）。灌胃后觀察其中毒癥狀、體征和死亡情況，連續(xù)觀察二周，（試驗(yàn)期限）根據(jù)各組死亡動(dòng)物數(shù)，查Horn’s表求出LD50及95%可信限，判定毒性分類(lèi)。急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)（示例）6LD50的計(jì)算方法6.1經(jīng)典方法

機(jī)率單位法-對(duì)數(shù)圖解法寇氏法

HORN’S法

Bliss法序貫法6.1.1霍恩（Horn）法

是利用劑量對(duì)數(shù)與死亡率（反應(yīng)率）的轉(zhuǎn)換數(shù)（即幾率單位）呈直線(xiàn)關(guān)系而設(shè)計(jì)的方法，又稱(chēng)平均移動(dòng)法或劑量遞增法。優(yōu)點(diǎn)：由于該法使用動(dòng)物數(shù)少，結(jié)果可直接查表求出LD50及其95％可信限，使用甚為簡(jiǎn)便。缺點(diǎn)：LD50的95％可信區(qū)間范圍較大，方法精確度尚不夠。

LD50的經(jīng)典方法霍恩（Horn）法方法要點(diǎn)：＊4個(gè)染毒劑量組，＊每組動(dòng)物數(shù)相等，一般用5只動(dòng)物，＊組距：劑量按等比級(jí)數(shù)排列。

組距=2.15/3.16LD50的經(jīng)典方法依據(jù)每組動(dòng)物數(shù)、組距和每組動(dòng)物死亡數(shù)，查表即可求出受試化學(xué)毒物的LD50及其95％可信限。例如：55

56.1.2改進(jìn)寇氏法

（1）是利用劑量對(duì)數(shù)與死亡率呈S型曲線(xiàn)而設(shè)計(jì)的方法，又稱(chēng)Karber法或平均致死量法。該法計(jì)算簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確率高，是較為常用的方法。（2）本法要求每個(gè)染毒劑量組動(dòng)物數(shù)要相同，各劑量組組距呈等比級(jí)數(shù)，死亡率呈正態(tài)分布，最低劑量組死亡率＜20％，最高劑量組死亡率＞80％。LD50的經(jīng)典方法預(yù)試驗(yàn)：以每組2－3只動(dòng)物找出全死和全不死的劑量。動(dòng)物數(shù)：一般每組不少于10只（大鼠或小鼠），各組動(dòng)物數(shù)量不一定要求相等。劑量及分組：一般在預(yù)試得到的兩個(gè)劑量組之間擬出等比的六個(gè)劑量組或更多的組。此法不要求劑量組間呈等比關(guān)系，但等比可使各點(diǎn)距離相等，有利于作圖計(jì)算。LD50的經(jīng)典方法—幾率單位-圖解法LD50測(cè)定新方法（符合3R）限量試驗(yàn)固定劑量法急性毒性分級(jí)法上下法（up-and-downprocedure)急性系統(tǒng)毒性試驗(yàn)第三節(jié)局部毒作用皮膚原發(fā)性刺激試驗(yàn)（skinprimaryirritationtest)皮膚致敏反應(yīng)試驗(yàn)(skinsensitizationtest光致敏反應(yīng)(photosensitisation)光刺激反應(yīng)(photoirritation)眼刺激反應(yīng)(eyeprimaryirritationtest)替代（體外）試驗(yàn)

局部毒作用常用的評(píng)價(jià)局部刺激作用的試驗(yàn)包括眼刺激試驗(yàn)、皮膚刺激/腐蝕性試驗(yàn)和皮膚致敏試驗(yàn)等，其目的是了解外源化學(xué)物對(duì)皮膚、眼睛的局部刺激性、腐蝕性和致敏性。我國(guó)農(nóng)藥、化妝品和消毒產(chǎn)品的毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序均規(guī)定局部刺激試驗(yàn)為常規(guī)必做項(xiàng)目。眼刺激試驗(yàn)（eyeirritationtest）的觀察終點(diǎn)為化學(xué)物導(dǎo)致的眼刺激和眼腐蝕性。眼刺激性（eyeirritation）指眼球表面接觸受試物后所產(chǎn)生的可逆性炎性變化，而眼腐蝕性（eyecorrosion）指眼球表面接觸受試物后引起的不可逆性組織損傷。眼刺激試驗(yàn)推薦的傳統(tǒng)方法為家兔眼刺激試驗(yàn)，此方法系Draize在1944年提出，故亦稱(chēng)Draize試驗(yàn)試驗(yàn)原則是受試物以一次劑量滴入每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，以未作處理的另一側(cè)眼作為自身對(duì)照。在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)觀察對(duì)兔眼的刺激和腐蝕作用程度并按規(guī)定的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。觀察指標(biāo)主要包括結(jié)膜（發(fā)紅、球結(jié)膜水腫和分泌物）、角膜（混濁程度和范圍）、虹膜（充血、腫脹和角膜周?chē)溲Ｓ^察期限應(yīng)足以評(píng)價(jià)刺激效應(yīng)的可逆性或不可逆性，一般為7天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至21天。Draize法對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的判定以主觀判斷為主，眼刺激試驗(yàn)傳統(tǒng)方法用非實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織替代兔眼，受精雞卵尿囊絨膜試驗(yàn)（hen’seggtest-chorioallantoicmembrane,HET-CAM）檢測(cè)細(xì)胞膜損傷的溶血試驗(yàn)（hemolysistest）：檢測(cè)血紅蛋白變性：細(xì)胞毒性試驗(yàn)生物模型替代法和其他非生物試驗(yàn)法：眼刺激替代方法皮膚刺激試驗(yàn)包括單次和多次皮膚刺激試驗(yàn)、完整皮膚和破損皮膚刺激試驗(yàn)等，其觀察終點(diǎn)為皮膚刺激和皮膚腐蝕性。皮膚刺激性（dermalirritation）指皮膚接觸或涂敷受試物后，局部產(chǎn)生的可逆性炎性變化。皮膚腐蝕性（dermalcorrosion）指皮膚接觸或涂敷受試物后，引起局部的不可逆性組織損傷。皮膚刺激試驗(yàn)（skinirritationtest）動(dòng)物：兔子4只，大鼠10只程序：略動(dòng)物皮膚敏感順序兔〉豚鼠〉大鼠〉人〉豬

皮膚原發(fā)刺激試驗(yàn)接觸某種化學(xué)物質(zhì)后產(chǎn)生的局部可逆性的炎癥變化皮膚表現(xiàn)：水腫、紅斑不適宜做的情況：

=可能有腐蝕性PH〈2或PH〉11.5=經(jīng)皮途徑顯示很強(qiáng)的系統(tǒng)途徑

=經(jīng)皮LD50〉2000mg/kg

皮膚原發(fā)刺激試驗(yàn)增