RNAi(shRNA/miRNA)用于基因功能的鑒定和確證FulenGenGainoffunctionORFexpressionclonesTansfection/TransductionLossoffunctionshRNA/miRNAChemicalgeneticsInhibitorsandactivatorsofbiologicalprocessAutomatedread-outmechanismTherapeuticstrategycellFulenGenGeneFunctionScreeningMechanismofRNAi(shRNA/miRNA)FulenGenshRNA的設計與構建shRNA的驗證miRNA的克隆與檢測miRNA靶標的確證基因沉默后的功能拯救FulenGenFulenGen保證高表達抑制效率和最低的脫靶效應；慢病毒載體和以哺乳動物細胞表達載體；序列已經過測序；每個基因提供4個克隆，至少有1抑制水平達到70%以上提供包含不規則序列的陰性對照克隆來比較研究。OmicsLink?shRNA表達克隆FulenGen經過驗證的人類激酶組shRNA表達克隆

350個人類激酶基因的確證shRNA表達克隆表達抑制效應都經過驗證，達70％以上

低的脫靶效應。FulenGenshRNA克隆用于信號通路研究ExonicNon-codingMicroRNAs由RNAPolymeraseII轉錄IntronicNon-codingandcodingLee,etal.,EMBOJ.23:4051-602004/~-OHmatureandprimarymicroRNA的結構Pri-miRNADroshaCleavagesiteMatureVector-BasedmicroRNAExpressionClonesPromoter5’miRflank3’miRflankPre-miRTerFulenGenOmicsLink?HumanPrecursormiRNAExpressionClonespEZ-MR02650種前體miRNA表達克隆涵蓋了miRBase（11.0版本）中已知的678種miRNA的95%miRNA表達框已完全測序確證基于慢病毒載體系統的表達克隆可轉染未分化細胞和難轉化的細胞，獲得與普通分化細胞類似的轉染效率提供被轉染細胞的存活性的篩選基因，可用于穩定或瞬時表達調控通過應用eGFP可以監測病毒和質粒載體的轉染效率FulenGenmicroRNA

腫瘤發生

miR-9

神經母細胞瘤miR-10b乳腺癌miR-15、miR-15a白血病、垂體腺瘤

miR-16、miR-16-1

白血病、垂體腺瘤

miR-17-5p、miR-17-92肺癌、淋巴瘤miR-20a肺癌、淋巴瘤miR-21乳腺癌、膽管腺癌、頭頸癌、白血病、宮頸癌miR-29、miR-29b白血病，膽管腺癌miR-31結腸直腸癌miR-34a胰腺癌

miR-96結腸直腸癌miR-98頭頸癌

miR-103胰腺癌miR-107

白血病、胰腺癌

miR-125a、miR-125b神經母細胞瘤、乳腺癌miR-128膠質母細胞瘤miR-133b結腸直腸癌miR-135b結腸直腸癌miR-143結腸癌、宮頸癌miR-145乳腺癌、結腸直腸癌miR-146甲狀腺癌miR-155乳腺癌、白血病、胰腺癌miR-181、miR-181a、miR-181b、miR-181c肺癌、白血病、膠質母細胞瘤、甲狀腺癌

miR-183直腸結腸癌miR-184

神經母細胞瘤miR-196a-2

胰腺癌miR-221膠質母細胞瘤、甲狀腺癌、胰腺癌

miR-222甲狀腺癌miR-223

白血病miR-301胰腺癌miR-376

胰腺癌let-7、let-7a、let-7a-1、hsa-let-7a-2、let-7a-3肺癌、結腸癌miRNA與腫瘤miRNA的檢測和定量檢測方法

NothernblotMicroarrayQuantitativeReal-timePCR檢測對象Primary-miRNAPre-miRNAMaturemiRNAFulenGenqPCR檢測miRNA的特異性qPCR檢測miRNA的特異性miRNA

Target的分析研究發現，在哺乳動物中，miRNAs的基因抑制作用是通過其5’一段長為6－8nt的核苷酸與mRNAs3’端非翻譯區域相結合實現的。一般這段核苷酸位于miRNA序列5’的2~8個nt，被稱為seed區。2007年，美國約翰·霍普金斯大學發現miR-29b5’的6個核苷酸與該miRNA的細胞定位有關。FulenGenmiRNA5’的seed區域在miRNA家族中具有很高的保守性，對脊椎動物的miRNAtarget的識別具有重要的作用，尤其是第2-8個堿基。FulenGenRenillaLuciferasedataFireflyLuciferasedatamiRNA的編輯及其靶標的變化seedelment：

A

ImiR376a-5p經過編輯后，其靶標的變化FulenGenOmicsLink?HumanmiRNATargetSequence(3’UTR)ExpressionClonesSV40hLucRLucCMVpolyApolyApUCoriKan/Neo3’UTRSV40GLucsAPCMVpolyApolyApUCoriKan/Neo3’UTRpEZX-MT01pEZX-MT02FulenGenGaussialuciferaseexpressioninCHOcellsFulenGen構建克隆轉染細胞分泌表達Luciferase取上清加入底物讀取熒光值FulenGenmiRNADeliverintocell,tissueoranimalRestorethesilencegenefunctionmRNA

cleavageo