物理因素對細菌遺傳效應的遺傳分析

——紫外誘變與篩選組長：夏波林組員：張至瑋、馬麗娟、高潤東實驗目的了解物理因素對遺傳物質的影響；熟悉紫外線誘變的原理和方法；掌握微生物的紫外線誘變技術。DNA對紫外線（UV）有強烈的吸收作用，尤其是堿基中的嘧啶，它比嘌呤更為敏感。紫外線引起DNA結構變化的形式有DNA鏈斷裂、堿基破壞、胸腺嘧啶二聚體等。因為生物體中具有對損傷DNA的修復機制。經過UV照射，可以通過光復活和暗修復（切除修復）完成修復。為避免修復，獲得更多的突變菌種，誘變處理后的實驗操作在紅光下進行。枯草芽孢桿菌式G＋菌，在增殖過程中能力產生大量的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等胞外酶的能力。但不同菌株產酶量不同。儀器、試劑與材料實驗菌種：枯草芽孢桿菌實驗試劑：牛肉膏蛋白胨培養基、淀粉培養基、碘液實驗儀器：超凈工作臺、微波爐、高壓滅菌鍋、恒溫培養箱、鼓風干燥箱、磁力攪拌器、培養皿、離心管、酒精燈、涂布棒、移液器、接種環、紫外線燈（15W）、玻璃棒、pH試紙等實驗步驟紫外燈：15W，28.7cm，穩定30min。處理強度：以時間為變量30s、60s、120s、240s處理方法：PlanA、PlanB涂布量：0.2ml6＊106cfu/ml第一天（誘變處理PlanA）稀釋之后再處理預實驗第二天（誘變處理PlanB）第三天編號編號一一對應達到預期目標，計算致死率。第三天第四天數據測量與統計對照正突變負突變負突變正突變初篩復篩實驗結果表1致死率

6*1023*1036*1031.5*10430s0.450.80\難以計數60s0.990.98\0.99120s0.98\0.990.99240s1\1.001.00實驗結果編號123456789101112平均值H/mm0.600.601.001.001.001.001.000.500.701.101.000.90

C/mm0.100.100.200.200.200.200.200.100.100.200.200.20

H/C6.006.005.005.005.005.005.005.007.005.505.004.505.33表2正突變初篩結果本組初篩大致選出了80個菌落，經過計算H/C，我們將統計的菌落數據分為正突變、負突變、對照三組，每組12個數據。實驗結果編號123456789101112平均值H/mm1.001.401.501.701.801.401.101.401.301.401.401.50

C/mm0.300.400.400.500.500.400.300.400.400.400.400.40

H/C3.333.503.753.753.603.503.673.503.253.503.503.753.55表3對照組初篩結果實驗結果編號123456789101112均值H/mm0.600.700.800.700.701.001.000.700.800.801.101.10

C/mm0.300.300.300.300.300.400.400.300.300.300.400.40

H/C2.002.342.672.342.342.502.502.342.672.672.752.752.49表4負突變初篩結果T檢驗Sig<0.05具有顯著性差異初篩發生了正突變。表5正突變初篩結果檢驗T檢驗Sig<0.05具有顯著性差異初篩發生了負突變。表6負突變初篩結果檢驗實驗結果編號123456789101112平均值H/C13.002.752.754.003.803.403.503.803.804.004.673.20

24.003.752.754.673.603.754.335.004.004.003.503.50

33.253.503.003.405.334.504.334.334.253.753.503.75

平均值3.423.332.834.024.243.884.054.374.023.923.893.483.79表7正突變復篩結果本組對初篩選出的36個菌落進行復篩，經過一天的培養，從數據中大致可以看出H/C的值均有朝向對照組變化的趨勢，即出現了回復突變。實驗結果編號123456789101112平均值H/C13.333.002.703.333.333.333.253.503.253.203.503.75

23.753.504.003.753.753.753.003.003.003.253.503.50

33.203.503.503.403.603.503.803.753.753.753.754.33

平均值3.433.333.403.493.563.533.353.423.333.403.583.863.47表8對照組復篩結果實驗結果編號123456789101112平均值H/C13.501.253.002.832.432.432.803.003.003.203.003.20

23.003.002.602.573.502.433.503.203.003.003.203.40

33.253.753.753.203.203.203.003.202.803.503.753.50

平均值3.252.673.122.873.042.693.103.132.933.233.323.373.06表9負突變復篩結果T檢驗Sig<0.05，復篩結果和對照組依然具有顯著性差異復篩之后依然存在著正突變效應。表10正突變復篩與對照組T檢驗T檢驗Sig<0.05，復篩結果和對照組依然具有顯著性差異復篩之后依然存在著負突變效應。表11負突變復篩與對照組T檢驗T檢驗Sig<0.05初篩和復篩結果具有顯著性差異從數據可以看出，復篩發生了回復突變。表12初篩和復篩正突變結果T檢驗T檢驗Sig<0.05初篩和復篩結果具有顯著性差異從數據可以看出，復篩發生了回復突變。表13初篩和復篩負突變結果T檢驗T檢驗Sig>0.05，對照