選修一《傳統發酵技術的應用》《微生物的培養和應用》生殖方式：

二分裂細菌的形態球菌弧菌桿菌螺旋菌放線菌單細胞原核生物分支狀的菌絲（基內菌絲、氣生菌絲）如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態結構酵母菌和霉菌孢子—生殖細胞病毒的結構病毒的增殖：專題

微生物專題微生物概念及分類微生物培養微生物分離和計數微生物應用一、微生物概念及分類1、概念：是指自然界中那些形態微小、結構簡單，通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看清楚的生物。第1節微生物的實驗室培養選修一專題2

課題1.微生物的實驗室培養一、基礎知識（一）微生物1、概念：是指自然界中那些形態微小、結構簡單，通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看清楚的生物。2、包括：沒有細胞結構的病毒、原核生物界、真菌界（酵母菌、霉菌、蘑菇等）、原生生物界（草履蟲、變形蟲屬真核生物）生物細胞生物動物植物真菌原生生物非細胞生物真核生物原核生物細菌放線菌支原體衣原體藍藻病毒微生物————酵母菌、霉菌、蘑菇等菌落：單個或少數細菌在固體培養基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態結構的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據。幾種菌落及其形態微生物的菌落特征因種而異.專題2課題1.微生物的實驗室培養一、基礎知識(筆記）(一)微生物：1、微生物包括沒有細胞結構的_______、原核生物、___菌（酵母菌、霉菌、蘑菇等）、原生生物界（草履蟲、變形蟲屬真核生物）2、菌落:（1）概念：單個或少數細菌等在固體培養基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的子細胞群體，叫做菌落。（2）應用：鑒定、分離、計數病毒真思考回憶:*組成細胞的主要元素有哪些?

C、H、O、N、P、S*是否還需要其它元素？

C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg等大量元素；Fe、Mn、Cu、Zn、B、CL、等微量元素*細菌等微生物的細胞也應需要這些元素。C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg、Fe、Mn等碳源水氮源無機鹽（二）培養基1、概念：人們按照微生物對營養物質的不同需要，配制出供其生長繁殖的營養基質。思考：配制培養基的基本原則（確定培養基配方的依據）_________________________2、營養成分（營養要素）多數培養基都含有水、無機鹽、碳源、氮源等四類營養物質，在提供上述幾種營養物質的基礎上，培養基還應滿足微生物對PH、特殊營養物質以及氧氣的需要。根據微生物的營養需要配制CC（二）培養基1、配制培養基的基本原則（確定培養基配方的依據）__________________________(2、多數培養基都含有_____________________等四類營養物質，還應滿足微生物對______、特殊營養物質以及________的需要。3、最常用的碳源是____________；蛋白胨或牛肉膏可以為細菌提供___________類營養物質)根據微生物的營養需要配制水、無機鹽、碳源、氮源葡萄糖氮源和碳源筆記PH氧氣2.微生物所需的營養要素碳源氮源(特殊營養物質)水無機鹽無機碳源：CO2、碳酸鹽—自養型有機碳源：糖類、脂肪等—異養型固氮菌：N2硝化細菌：NH3

其他：銨鹽、硝酸鹽、尿素、蛋白胨維生素、氨基酸、堿基等筆記3、培養基的種類

液體培養基（工業生產）固體培養基（分離計數）（1）根據物理性質

半固體培養基（觀察運動，鑒定菌種）

選擇培養基（2）根據用途

鑒別培養基（3）化學成分學案P1(加大量瓊脂)(加少量瓊脂)合成培養基天然培養基分離菌種鑒別菌種成分已知成分未知劃分標準培養基種類特點用途物理性質化學成分天然培養基合成培養基用途鑒別培養基3、培養基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業生產觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質工業生產培養基成分明確分類、鑒定在培養基中加入某種化學物質,以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養、分離出特定微生物在培養基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養基液體培養基半固體培養基固體培養基選擇培養基1）加入青霉素的培養基分離酵母菌、霉菌等真菌2）不加氮源的無氮培養基分離固氮菌3）不加含碳有機物的無碳培養基分離自養型微生物4）加入青霉素等抗生素的培養基（依據標記基因）篩選導入了重組DNA的受體細胞單克隆抗體的制備選擇培養基（筆記）選擇培養基篩選、分離的細胞加入青霉素無氮培養基無碳培養基依標記基因，加入某種抗生素等酵母菌、霉菌等真菌固氮菌自養型細菌導入了重組DNA的受體細胞思考：1、所有的培養基都必須含碳源、氮源、水、無機鹽嗎？2、培養基中的營養要素，除了水以外的無機物只能是無機鹽？3、CO2既是自養型生物的碳源也是能源物質？4、利用動物細胞培養液培養病毒，行嗎？否；可以無碳源，也可無氮源否；碳源和氮源也可能是無機物否；光能或化學能病毒無細胞結構，只能寄生在活細胞中生存。所以，要利用活細胞培養病毒。（三）無菌技術防止外來雜菌入侵。方法：消毒(溫和)滅菌(強烈)煮沸:巴氏：80℃下煮15min化學藥劑:

75%酒精、氯氣紫外線消毒：灼燒滅菌：干熱滅菌：。高壓蒸氣滅菌：獲得純凈培養物的關鍵：

無菌技術1、獲取純化培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵。2、無菌措施：1)對實驗操作空間、操作者衣著和手進行清潔和消毒；對將培養用的器皿、接種工具和培養基進行滅菌2)實驗操作時已滅菌材料等應避免與周圍物品接觸；實驗操作應在酒精燈火焰附近進行；接種工具等應在酒精等火焰上灼燒后使用1、獲得純凈培養物的關鍵是什么？2、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面?(15頁）3、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？防止雜菌污染消毒：指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌：指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有微生物，包括芽孢和孢子。芽孢有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發，形成一個細菌消毒的方法：1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或

80℃下煮15min3、化學藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線或化學藥物消毒滅菌的方法：1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.干熱滅菌箱高壓蒸汽滅菌鍋1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養細菌用的培養基與培養皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手

答：無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）滅菌；（3）消毒。旁欄思考（三）無菌技術1、獲得純凈培養物的關鍵是？

防止外來雜菌的入侵2、消毒與滅菌的區別？消毒是殺死部分對人體有害的微生物；滅菌是殺死所有微生物。3、最常用的滅菌方法是？

高壓蒸汽滅菌。筆記1）、科學家們用脈胞霉（一種真菌）為材料，進行科學研究，用基本培養基來培養脈胞霉。基本培養基中所含的營養要素一般包括：

_______________________________2）、酵母菌可用于食品工業的廢水處理，廢水中的淀粉或廢糖可為酵母菌的生長提供________類營養物質。3）、用乳酸菌制酸奶，加入的蔗糖是作為______類營養物質加入到牛奶中的。4）、硝化細菌的碳源、氮源、能源依次為__________________________________。碳源、氮源、水、無機鹽碳源碳源CO2、NH3、NH3氧化釋放的化學能練習：二、實驗操作1.制備牛肉膏蛋白胨培養基（用于培養細菌）1、計算2、稱量操作步驟3．溶化

4．滅菌：高壓蒸汽滅菌

5．倒平板:

待培養基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。

閱讀:P16(一)制備牛肉膏蛋白胨固體培養基目的：______滅菌平板冷凝后，為什么要將平板倒置？防止冷卻后形成的水珠滴落到培養基上，造成污染1、在液體培養基中加入_____________而制成固體培養基.2、制備培養基的操作排序①溶化（使各種原料、瓊脂等加熱溶化）②滅菌③調PH值④計算（各成分用量）⑤稱量⑥倒平板（冷卻至50℃，將平板倒過來放置）正確的操作順序：_____________3、平板倒置的目的_____________________________________________________瓊脂（凝固劑）④⑤①③②⑥防止冷卻后形成的水珠滴落到培養基上，造成污染6．無菌檢查：

將滅菌的培養基放入37℃的恒溫箱中培養24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。

二、實驗操作1、在液體培養基中加入______________而制成固體培養基.3、平板倒置的目的___________________________________________________瓊脂（凝固劑）

滴落到培養基上，造成污染筆記2、制備培養基的操作排序：___________________________________________________________（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養基防止冷卻后形成的水珠計算——稱量——溶化——調PH值——滅菌—倒平板（二）純化大腸桿菌1、接種：將要培養的菌種接入到培養基上的過程叫接種。微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。思考討論:1、在接種前如何檢測培養基是否被污染？2、調查湖水中細菌污染情況，要使實驗結果更可靠，對照組如何處理？3、使用過的培養基（物），在遺棄前應如何處理？將未接種的培養基在無菌條件下放置一段時間，觀察培養基上是否有菌落產生。在另一平板上接種等量的無菌水滅菌；防止培養物污染環境。

平板劃線法:通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面.在數次劃線后,可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,這就是菌落.微生物的恒溫培養思考討論：1、平板劃線法接種的目的是什么？2、平板劃線法接種的用途？3、平板劃線法能不能調查某種微生物的種群密度（計數）？獲得單一菌落。微生物的分離、鑒定、篩選。不能；一是不知道接種菌液的量，其次也沒有全部形成單一菌落。思考討論：1、稀釋涂布平板法接種的目的是什么？2、稀釋涂布平板法接種的用途？3、平板劃線法能不能調查某種微生物的種群密度（計數）？獲得單一菌落。微生物的分離、鑒定、篩選、計數。不能；一是不知道接種菌液的量，其次也沒有全部形成單一菌落。10-110-410-510-6平板劃線法稀釋涂布平板法相同點：分散出單細菌形成單菌落來分離菌種不同點：分別通過劃線和稀釋分散出單細菌，稀釋涂布平板法除分離菌種外還可以對微生物計數（二）純化大腸桿菌1、將準備培養的菌種放到培養基中的過程叫做__________。2、微生物接種的最常用方法是________________和_________________3、能夠獲得單一菌落的(分離）接種方法有_______________和________________4、能夠測定樣品中活菌數的接種方法是_______________平板劃線法稀