選修１１、在果酒、果醋的制作過程中，所用的重要菌種分別是:酵母菌、醋酸菌。２、在果酒、果醋、的制作過程中，它們所需的溫度分別是１8-25℃、３0~35℃3、酵母菌是高中階段的明星生物，必修一：關于真核生物原核生物的問題，酵母菌是單細胞真核生物；關于酶本質的探索中,酶的本質是蛋白質或ＲNA;在探究酵母菌的呼吸方式中，酵母菌異化作用的方式是兼性厭氧菌。必修三：培養液中酵母菌的計數可以采用抽樣檢測的方法,用固體培養基培養的酵母菌可用活菌計數法(菌落)計數。選修一：運用酵母菌制作果酒的反映式是:C6Ｈ１２O６→２C2H５OH(酒精)＋２ＣＯ２，固定酵母細胞的方式是包埋法。4、微生物培養基由于加瓊脂而分為固體培養基和液體培養基等。5、培養基的化學成分涉及水、無機鹽、碳源、氮源四類營養成分。6、無菌技術涉及:（1)對實驗操作空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒;(２）將培養器皿、接種用品和培養基等器具進行滅菌；(3）為避免周邊微生物污染,實驗操作應在酒精燈火焰附近旁進行；7、制備牛肉膏蛋白胨培養基的環節:計算→稱量→溶化(調PH）→滅菌→倒平板)8、常見的4種消毒方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線消毒法、酒精進行消毒）９、常見的3種滅菌方法:（灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法)1０、高壓蒸汽滅菌法規定氣壓升至（100)kＰa,溫度為（121）℃，并維持（1５~30）mｉｎ才干達成滅菌的規定。１1、微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。1２、在微生物培養中,培養基有“三倒”,具體是倒放、倒拿、倒培養。１3、平板劃線法接種微生物過程中最后的灼燒接種環的目的是防止細菌污染環境和操作者;稀釋涂布平板接種微生物過程中移液管吹吸三次的目的是：使菌種均勻混合。14、實驗室中微生物的篩選原理:當培養基中唯一氮源為尿素時,就可以分離出分解尿素的細菌。培養基中唯一碳源為纖維素時，可以分離出分解纖維素的微生物；15、微生物計數常有兩種方法:活菌計數法和顯微鏡直接計數。活菌計數法一般選擇菌落數在30-300的平板進行計數，在同一稀釋度下，至少對3個平板進行反復計數，然后求出平均值。1６、寫出每克樣品中菌株數公式？１7、纖維素酶由微生物分泌的一種復合酶，涉及C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,剛果紅能與纖維素形成紅色復合物，當纖維素水解后培養基中出現以菌落為中心的透明圈。18、寫出植物組織培養的基本流程:離體器官、組織或細胞→愈傷組織→根芽→植物體19、生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵激素。20、植物組織培養最常用的培養基是MS培養基。21、菊花的組織培養的材料一般選擇未開花植物莖上部新萌生的側枝;２2、果膠酶是分解果膠的一類酶的總稱,涉及多半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠酯酶等三種。23、舉例說明酶的活性測定方法有兩種方法?(1）相對直接測定的方法如單位時間內、單位體積中反映物的減少量或增長量；(2）間接測定的方法如產生果汁的量、果汁的澄清度、果汁的透光率２4、高中生物實驗多次用到紅細胞，人的紅細胞來源于造血干細胞；蛙的紅細胞進行的分裂方式是無絲分裂;動物細胞膜的制備所用的細胞材料是哺乳動物成熟的紅細胞;DNA的粗提取所用血液是雞血紅細胞;血紅蛋白的提取材料是哺乳動物的紅細胞。25、在凝膠柱中分離蛋白質的有效方法叫凝膠色譜法，分子量大的在凝膠柱中運動速度快,運動途徑較短，先從凝膠柱洗脫出來。２6、許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等還可以用電泳的方法分開,根據待分離樣品中分子帶電性質的差異以及分子自身的大小,形狀的不同，使帶電分子產生不同的遷移速度，從而實現樣品中各種分子的分離。在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，只根據分子的帶電荷的大小就可待分離物質分開。2７、蛋白質的提取和分離一般分為四步:樣品解決→粗分離→純化→純度鑒定，透析除去分子較小的雜質。專題一傳統發酵技術的應用課題一果酒和果醋的制作1、發酵：通過微生物技術的培養來生產大量代謝產物的過程。２、有氧發酵:醋酸發酵谷氨酸發酵·無氧發酵:酒精發酵乳酸發酵3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌·酵母菌的生殖方式:出芽生殖(重要）分裂生殖孢子生殖4、在有氧條件下,酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖。

C6Ｈ1２Ｏ６＋6O2+6H2O→6ＣO2+12Ｈ2Ｏ+能量5、在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發酵。

Ｃ６H12O6→２C2H５OH＋２CＯ２+能量６、2０℃左右最適宜酵母菌繁殖酒精發酵時一般將溫度控制在1８℃-25℃7、在葡萄酒自然發酵的過程中,起重要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在發酵過程中，隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進入發酵液,使葡萄酒呈現深紅色.在缺氧呈酸性的發酵液中,酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數其他微生物都因無法適應這一環境而受到制約。8、醋酸菌是單細胞細菌(原核生物),代謝類型是異養需氧型,生殖方式為二分裂９、當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸;當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變為乙醛，再將乙醛變為醋酸。

C6Ｈ1２O6+２O２→2ＣH3ＣOＯH＋2CO２＋2H２Ｏ

Ｃ2Ｈ5OH+O2→CH３CＯＯH＋Ｈ2O10、控制發酵條件的作用①醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當進行深層發酵時,即使只是短時間中斷通入氧氣,也會引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長溫度為３２℃,控制好發酵溫度，使發酵時間縮短，又減少雜菌污染的機會。③有兩條途徑生成醋酸:直接氧化和以酒精為底物的氧化。１1、實驗流程:挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發酵→果酒(→醋酸發酵→果醋）12、酒精檢查：果汁發酵后是否有酒精產生,可以用重鉻酸鉀來檢查。在酸性條件下,重鉻酸鉀與酒精反映呈現灰綠色。先在試管中加入發酵液2mL，再滴入物質的量濃度為3mol／L的H2ＳO43滴,振蕩混勻,最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴,振蕩試管，觀測顏色13、充氣口是在醋酸發酵時連接充氣泵進行充氣用的；排氣口是在酒精發酵時用來排出二氧化碳的;出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身相連接,其目的是防止空氣中微生物的污染。開口向下的目的是有助于二氧化碳的排出。使用該裝置制酒時,應當關閉充氣口;制醋時，應當充氣口連接氣泵，輸入氧氣。

疑難解答（1）你認為應當先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？應當先沖洗，然后再除去枝梗,以避免去去枝梗時引起葡萄破損，增長被雜菌污染的機會。（2）你認為應當從哪些方面防止發酵液被污染？如：要先沖洗葡萄,再除去枝梗；榨汁機、發酵裝置要清洗干凈,并進行酒精消毒;每次排氣時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。(３)制葡萄酒時，為什么要將溫度控制在1８~２5℃?制葡萄醋時，為什么要將溫度控制在30～35℃?溫度是酵母菌生長和發酵的重要條件。20℃左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長溫度為32℃，因此要將溫度控制在30～３5℃。

專題二微生物的培養與應用課題一微生物的實驗室培養·培養基:人們按照微生物對營養物質的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養基質，是進行微生物培養的物質基礎。·培養基按照物理性質可分為液體培養基半固體培養基和固體培養基。在液體培養基中加入凝固劑瓊脂（是從紅藻中提取的一種多糖,在配制培養基中用作凝固劑)后,制成瓊脂固體培養基。微生物在固體培養基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。根據菌落的特性可以判斷是哪一種菌。液體培養基應用于工業或生活生產,固體培養基應用于微生物的分離和鑒定，半固體培養基則常用于觀測微生物的運動及菌種保藏等。·按照成分培養基可分為人工合成培養基和天然培養基。合成培養基是用成分已知的化學物質配制而成，其中成分的種類比例明確,常用于微生物的分離鑒定。天然培養基是用化學成分不明的天然物質配制而成,常用于實際工業生產。·按照培養基的用途，可將培養基分為選擇培養基和鑒定培養基。選擇培養基是指在培養基中加入某種化學物質，以克制不需要的微生物生長，促進所需要的微生物的生長。鑒別培養基是根據微生物的特點，在培養基中加入某種指示劑或化學藥品配制而成的,用以鑒別不同類別的微生物。·培養基的化學成分涉及水、無機鹽、碳源、氮源(生長因子)等。·碳源:能為微生物的代謝提供碳元素的物質。如CO2、NaHCO3等無機碳源;糖類、石油、花生粉餅等有機碳源。異養微生物只能運用有機碳源。單質碳不能作為碳源。·氮源:能為微生物的代謝提供氮元素的物質。如N2、NH3、NO3-、NH4＋（無機氮源）蛋白質、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機氮源)等。只有固氮微生物才干運用N2。·培養基還要滿足微生物生長對PＨ、特殊營養物質以及氧氣的規定。例如,培養乳酸桿菌時需要在培養基中添加維生素，培養霉菌時須將培養基的pH調至酸性，培養細菌是需要將pH調至中性或微堿性，培養厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件·無菌技術·獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手,進行清潔和消毒。②將用于微生物培養的器皿、接種用品和培養基等器具進行滅菌。③為避免周邊環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。④實驗操作時應避免已經滅菌解決的材料用品與周邊的物品相接觸。無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，尚有什么目的？答：無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。·消毒與滅菌的區別消毒指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物(不涉及芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法(對于一些不耐高溫的液體)尚有化學藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物,涉及芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法：

①接種環、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；

②玻璃器皿、金屬用品等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；

③培養基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。

④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈。

比較項理化因素的作用強度消滅微生物的數量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態的微生物不能滅菌強烈所有微生物能制作牛肉膏蛋白胨固體培養基(1）方法環節:計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。（2）倒平板操作的環節：①將滅過菌的培養皿放在火焰旁的桌面上,右手拿裝有培養基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶,將瓶口迅速通過火焰。③用左手的拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養基（約１0～20mL）倒入培養皿，左手立即蓋上培養皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固,大約需5～10ｍin。然后，將平板倒過來放置,使培養皿蓋在下、皿底在上。·倒平板操作的討論1.培養基滅菌后，需要冷卻到５0℃左右時，才干用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度?提醒:可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進行倒平板了。２.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。３．平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后,皿蓋上會凝結水珠，將平板倒置,既可以防止培養基表面的水分過度地揮發,又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基,導致污染。4.在倒平板的過程中,假如不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物也許在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生,因此最佳不要用這個平板培養微生物。純化大腸桿菌(１)微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)平板劃線法是通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。在數次劃線后培養,可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,這就是菌落。(3)稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。（4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個細胞,從而能在培養基表面形成單個的菌落,以便于純化菌種。(5）平板劃線法操作環節：①將接種環放在火焰上灼燒,直到接種環燒紅。②在火焰旁冷卻接種環,并打開棉塞。③將試管口通過火焰。④將已冷卻的接種環伸入菌液中蘸取一環菌液。⑤將試管通過火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開一條縫隙,右手將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內,劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養皿。⑦灼燒接種環，待其冷卻后，從第一區域劃線的末端開始往第二區域內劃線。反復以上操作，在三、四、五區域內劃線。注意不要將最后一區的劃線與第一區相連。⑧將平板倒置放入培養箱中培養。·平板劃線操作的討論１.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環?在劃線操作結束時,仍然需要灼燒接種環嗎?為什么?答：操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上也許存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后,接種環上殘留的菌種,使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增長，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少,以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。２．在灼燒接種環之后,為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環溫度太高,殺死菌種。３．在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答:劃線后,線條末端細菌的數目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增長而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。(6)涂布平板操作的環節:①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。②取少量菌液，滴加到培養基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃盡后，冷卻8～10ｓ。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養基表面。涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作規定，想一想,第2步應如何進行無菌操作？提醒:應從操作的各個細節保證“無菌”。例如,酒精燈與培養皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周邊;等等。菌種的保存(1)對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。①臨時保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培養基上，在合適的溫度下培養。當菌落長成后,將試管放入４℃的冰箱中保藏。以后每３~6個月，都要重新將菌種從舊的培養基上轉移到新鮮的培養基上。②缺陷:這種方法保存的時間不長,菌種容易被污染或產生變異。（2）對于需要長期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中,裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養的菌液轉移到甘油瓶中,與甘油充足混勻后,放在－２0℃的冷凍箱中保存。疑難解答（1)生物的營養營養是指生物攝取、運用營養物質的過程。營養物質是指維持機體生命活動,保證發育、生殖所需的外源物質。人及動物的營養物質：水、無機鹽、糖類、脂質、蛋白質、維生素六類。植物的營養物質：礦質元素、水、二氧化碳等三類。微生物的營養物質:水、無機鹽、碳源、氮源及特殊營養物質五類。(2)擬定培養基制作是否合格的方法將未接種的培養基在恒溫箱中保溫1~2天,無菌落生長，說明培養基的制備是成功的,否則需要重新制備。

課題二土壤中分解尿素的細菌的分離與計數尿素

是一種重要的農業氮肥,尿素并不能直接被農作物吸取。只有當土壤中的細菌將尿素分解成氨之后，才干被植物運用。土壤中的細菌之所以能分解尿素,是由于他們能合成脲酶

尿素最初是從人的尿液中發現的

篩選菌株（1）實驗室中微生物的篩選應用的原理人為提供有助于目的菌株生長的條件（涉及營養、溫度、pH等)，同時克制或阻止其他微生物生長。（２）選擇性培養基在微生物學中,將允許特定種類的微生物生長,同時克制或阻止其他種類微生物生長的培養基,稱作選擇培養基。（3)配制選擇培養基的依據根據選擇培養的菌種的生理代謝特點加入某種物質以達成選擇的目的。例如,培養基中不加入有機物可以選擇培養自養微生物;培養基中不加入氮元素，可以選擇培養能固氮的微生物;加入高濃度的食鹽可選擇培養金黃色葡萄球菌等。記錄菌落數目（１）測定微生物數量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數。（2）稀釋涂布平板法記錄樣品中活菌的數目的原理當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過記錄平板上的菌落數,就能推測出樣品中大約具有多少活細菌。為了保證結果準確,一般設立３～５個平板，選擇菌落數在３０～300的平板進行計數,并取平均值。記錄的菌落數往往比活菌的實際數目低,因此，記錄結果一般用菌落數而不是活菌數來表達。采用此方法的注意事項：1．一般選取菌落數在３０~3０0之間的平板進行計數2．為了防止菌落蔓延,影響計數,可在培養基中加入TTC(在計數瓊脂中加入適量的TTC（0.５%TＴC1MＬ加到100ML瓊脂中），細菌菌落長成紅顏色,對去除食品本底顆粒物干擾非常故意義).3.本法僅限于形成菌落的微生物設立對照設立對照的重要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。對照實驗是指除了被測試的條件以外,其他條件都相同的實驗，其作用是比照實驗組，排除任何其他也許因素的干擾，證明的確是所測試的條件引起相應的結果。實驗設計實驗設計涉及實驗方案,所需儀器、材料、用品和藥品，具體的實行環節以及時間安排等的綜合考慮和安排。（1）土壤取樣:同其他生物環境相比,土壤中的微生物,數量最大,種類最多。在富具有機質的土壤表層,有更多的微生物生長。從富具有機物、潮濕、pH≈７的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約3~８cｍ的土壤層取樣。（2)樣品的稀釋：樣品的稀釋限度將直接影響平板上生長的菌落數目。在實際操作中,通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養,以保證獲得菌落數在3０~30０之間、適于計數的平板。測定土壤中細菌的數量，一般選用１04

105

10６測定放線菌的數量，一般選用1０３

1０4

１0５

測定真菌的數量,一般選用102

１０3

1０4（3)微生物的培養與觀測不同種類的微生物，往往需要不同的培養溫度和培養時間。細菌30~37℃1~2天放線菌25~28℃5~７天霉菌25~２8℃3~４天每隔24小時記錄一次菌落數目，選取菌落數目穩定期的記錄作為結果，這樣可以防止因培養時間局限性而導致一樓菌落的數目。一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度及培養時間),同種微生物表現出穩定的菌落特性。形狀、大小、隆起限度、顏色疑難解答（１）如何從平板上的菌落數推測出每克樣品中的菌落數?記錄某一稀釋度下平板上的菌落數，最佳能記錄3個平板，計算出平板菌落數的平均值每克樣品中的菌落數=(Ｃ/V)＊M其中,Ｃ代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數,V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mｌ），M代表稀釋倍數

植物細胞工程具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細胞,都具有發育成完整個體的能力,即每個生物細胞都具有全能性。但在生物體的生長發育過程中并不表現出來，這是由于在特定的時間和空間條件下,通過基因的選擇性表達,構成不同組織和器官。植物組織培養技術的應用有：實現優良品種的快速繁殖；哺育脫毒作物；制作人工種子;哺育作物新品種以及細胞產物的工廠化生產等。·細胞分化是一種持久性的變化,它有什么生理意義？使多細胞生物體中細胞結構和功能趨向專門化，有助于提高各種生理功能的效率。比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類型細胞來源細胞形態細胞結構細胞排列細胞去向根尖分生組織受精卵正方形無液泡緊密分化成多種細胞組織愈傷組織高度分化細胞無定形高度液泡化疏松再分化成新個體相同點都通過有絲分裂進行細胞增殖

影響植物組織培養的條件材料：不同的植物組織,培養的難易限度差別很大。植物材料的選擇直接關系到實驗的成敗。植物的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實驗結果。菊花組織培養一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側枝作材料。一般來說，容易進行無性繁殖的植物容易進行組織培養。選取生長旺盛嫩枝進行組培的是嫩枝生理狀態好，容易誘導脫分化和再分化。營養：離體的植物組織和細胞，對營養、環境等條件的規定相對特殊,需要配制適宜的培養基。常用的培養基是ＭS培養基，其中具有的大量元素是N、Ｐ、S、K、Ca、Ｍg，微量元素是Fｅ、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有機物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。激素:植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素。在生長素存在的情況下,細胞分裂素的作用呈現加強趨勢。在培養基中需要添加生長素和細胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結果。使用順序實驗結果先生長素，后細胞分裂素有助于分裂但不分化先細胞分裂素，后生長素細胞既分裂也分化同時使用分化頻率提高生長素/細胞分裂素比值與結果比值高時促根分化，抑芽形成比值低時促芽分化,抑根形成比值適中促進愈傷組織生長

＋

環境條件:PH、溫度、光等環境條件。不同的植物對各種條件的規定往往不同。進行菊花的組織培養，一般將pH控制在5.8左右，溫度控制在1８~2２℃，并且每日用日光燈照射12ｈ.

4、操作流程配制MＳ固體培養基：配制各種母液:將各種成分按配方比例配制成的濃縮液(培養基母液)。·使用時根據母液的濃縮倍數,計算用量，并加蒸餾水稀釋。·配制培養基：應加入的物質有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到１0０0毫升。·在菊花組織培養中,可以不添加植物激素因素是菊花莖段組織培養比較容易。·滅菌：采用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。·MS培養基中各種營養物質的作用是什么？與肉湯培養基相比,MS培養基有哪些特點？大量元素和微量元素提供植物細胞所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，維持細胞滲透壓；甘氨酸、維生素等物質重要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產生的特殊營養需求。微生物培養基以有機營養為主，MS培養基則需提供大量無機營養。外植體的消毒外植體：用于離體培養的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時，要取生長旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉,用軟刷輕輕刷洗,刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數為70%的酒精中搖動2~3次,連續6~7s，立即將外植體取出,在無菌水中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分,放入質量分數為0．1%的氯化汞溶液中1~2ｍin。取出后,在無菌水中至少清洗3次,漂洗消毒液。注意:對外植體進行表面消毒時,就要考慮藥劑的消毒效果,又要考慮植物的耐受能力。接種:接種過程中插入外植體時形態學上端朝上,每個錐形瓶接種7～8個外植體。外植體接種與細菌接種相似,操作環節相同,并且都規定無菌操作。培養:應當放在無菌箱中進行，并定期進行消毒，保持適宜的溫度（18~２2℃)和光照（12h）移栽:栽前應先打開培養瓶的封口膜,讓其在培養間生長幾日，然后用流水清洗根部培養基。然后將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環境中生活一段時間,進行壯苗。最后進行露天栽培。栽培外植體在培養過程中也許會被污染，因素有外植體消毒不徹底；培養基滅菌不徹底;接種中被雜菌污染;錐形瓶密封性差等。專題4酶的研究與應用知識點課題1

果膠酶在果汁生產中的作用由水果制作果汁要解決兩個重要問題：一是果肉的出汁率低,耗時長;二是榨取的果汁渾濁、黏度高，容易發生沉淀。

1、植物細胞壁以及胞間層的重要組成成分有纖維素和＿果膠_。并且兩者不溶于水,在果汁加工中，既影響出汁率，又使果汁渾濁。

2、果膠是植物細胞壁以及胞間層的重要組成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成的一種高分子化合物，不溶于水。在果汁加工中,果膠不僅會影響出汁率,還會使果汁渾濁。果膠酶的作用是可以將果膠＿分解成可溶性的_半乳醛酸，崩潰植物的細胞壁及胞間層，并且使果汁變得澄清。

３、果膠酶是一類酶總稱,涉及＿果膠分解酶、多聚半乳糖醛酸酶、果膠酯酶_等。

4、酶的活性是指酶催化一定化學反映的的能力。酶活性的高低可以用在一定條件下，酶所催化的某一化學反映的反映速度來表達。在科學研究與工業生產中，酶反映速度用單位時間內、單位體積中反映物的減小量或產物的增長量來表達。5、影響酶活性的因素涉及：溫度、ＰＨ、酶的克制劑等。（二）．實驗設計

〔設計一〕探究溫度對酶活性的影響

當酶處在最適溫度或最適pH時,酶的活性最高;若溫度過高、過酸或過堿,則導致酶變性失活。在一定范圍內,果肉的出汁率和果汁的澄清度與果膠酶的活性成正比。

此實驗的自變量是溫度_；根據單一變量原則,你應保證各實驗組相同的變量有＿PＨ底物濃度底物量實驗器材酶的用量等等_。

〔設計二〕探究PH對酶活性的影響探究pＨ對果膠酶活性的影響,只須將溫度梯度改成pH梯度，并選定一個適宜的溫度進行水浴加熱。反映液中的pH可以通過體積分數為0．1%的氫氧化鈉或鹽酸溶液進行調節。〔設計三〕探究果膠酶的用量探究果膠酶的用量是建立在探究最適溫度和pH對果膠酶活性影響的基礎之上的。此時,研究的變量是果膠酶的用量,其他因素都應保持不變。實驗時可以配制不同濃度的果膠酶溶液，也可以只配制一種濃度的果膠酶溶液,然后使用不同的體積即可。需要注意的是，反映液的pH必須相同，否則將影響實驗結果的準旁欄思考題1．為什么在混合蘋果泥和果膠酶之前，要將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫解決？提醒:將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫解決,可以保證底物和酶在混合時的溫度是相同的,避免了果泥和果膠酶混合時影響混合物的溫度,從而影響果膠酶活性的問題。2.在探究溫度或pH的影響時,是否需要設立對照？假如需要，又應當如何設立?為什么?提醒：需要設立對照實驗，不同的溫度梯度之間或不同的pH梯度之間就可以作為對照,這種對照稱為互相對照。3．Ａ同學將哪個因素作為變量，控制哪些因素不變？為什么要作這樣的解決?Ｂ同學呢?提醒:A同學將溫度或ｐＨ作為變量,控制不變的量有蘋果泥的用量、果膠酶的用量、反映的時間和過濾的時間等。只有在實驗中保證一個自變量,實驗結果才干說明問題。B同學對于變量的解決應當與Ａ同學相同，只是觀測因變量的角度不同。4.想一想，為什么可以通過測定濾出的蘋果汁的體積大小來判斷果膠酶活性的高低?提醒:果膠酶將果膠分解為小分子物質，小分子物質可以通過濾紙,因此蘋果汁的體積大小反映了果膠酶的催化分解果膠的能力。在不同的溫度和ｐH下，果膠酶的活性越大，蘋果汁的體積就越大。5．當探究溫度對果膠酶活性的影響時，哪個因素是變量，哪些因素應當保持不變?提醒:溫度是變量,應控制果泥量、果膠酶的濃度和用量、水浴時間和混合物的pH等所有其他條件不變。只有這樣才干保證只有溫度一個變量對果膠酶的活性產生影響。實驗變量與反映變量(如表)

實驗變量(自變量)反映變量(因變量)含義實驗中實驗者所操縱的因素或條件由于實驗變量改變而引