標準解讀

《GB/T 38485-2021 微生物痕量基因殘留測定 微滴數(shù)字PCR法》是一項國家標準，旨在規(guī)范使用微滴數(shù)字PCR技術進行微生物痕量基因殘留檢測的方法。該標準適用于食品、環(huán)境樣本等中微生物DNA的定量分析，特別是當目標DNA濃度極低時的應用場景。

標準詳細規(guī)定了從樣品處理到結果報告整個過程的操作步驟和技術要求。首先，在樣品制備階段，強調了正確采集和保存樣本的重要性，以避免外源性污染或降解導致的數(shù)據(jù)偏差。接下來是核酸提取部分，推薦采用高效且特異性強的方法來獲取高質量的DNA模板。

對于微滴數(shù)字PCR反應體系構建，標準提供了具體的試劑配比建議以及溫度循環(huán)參數(shù)設置指導，確保每次實驗條件一致，從而提高數(shù)據(jù)重復性和準確性。此外，還特別指明了如何通過內參物質校正可能存在的抑制效應，保證定量結果的真實可靠。

在數(shù)據(jù)分析環(huán)節(jié)，《GB/T 38485-2021》明確了陽性判定標準及陰性對照的作用，并提出了基于泊松分布原理計算目標序列拷貝數(shù)的方法論框架。同時，也給出了質量控制措施，比如定期進行性能驗證實驗，以監(jiān)控系統(tǒng)穩(wěn)定性并及時發(fā)現(xiàn)潛在問題。


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....

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  • 2021-12-31 頒布
  • 2022-07-01 實施
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GB/T 38485-2021微生物痕量基因殘留測定微滴數(shù)字PCR法_第1頁
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文檔簡介

ICS07080

CCSA.21

中華人民共和國國家標準

GB/T38485—2021

微生物痕量基因殘留測定

微滴數(shù)字PCR法

Determinationfortracegeneresiduesofmicroorganisms—

MicrodropletdigitalPCR

2021-12-31發(fā)布2022-07-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標準化管理委員會

GB/T38485—2021

前言

本文件按照標準化工作導則第部分標準化文件的結構和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任

。。

本文件由中國標準化研究院提出并歸口

。

本文件起草單位清華大學中國科學院微生物研究所河北省食品檢驗研究院中國標準化研

:、、、

究院

。

本文件主要起草人張翀邢新會杜文斌周巍郭永剪興金汪海燕鄭蒙蔡東洋馬愛進

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T38485—2021

微生物痕量基因殘留測定

微滴數(shù)字PCR法

1范圍

本文件規(guī)定了用微滴數(shù)字法測定微生物痕量基因殘留以下的方法

PCR(100pg/mL)。

本文件適用于加工產品中釀酒酵母和植物乳桿菌痕量特征基因殘留以下的測定

(100pg/mL)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文

。,

件僅該日期對應的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于

,;,()

本文件

。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

31

.

痕量基因殘留tracegeneresidue

微生物加工產品在后續(xù)分離純化中很難去除的痕量含量在以下核酸

(100pg/mL)。

4原理

利用液滴微流控技術將待測生物樣品所殘留的目標核酸擴增體系分割成幾十份到幾萬份包

,PCR

含一個拷貝的核酸分子微升級油包水微滴按照常規(guī)體系對其進行擴增通過熒光探針實現(xiàn)信號

。PCR,

讀出所產生微滴陽性信號的數(shù)目即代表了原始樣本中目標核酸分子的拷貝數(shù)從而直接數(shù)出目標核

。,

酸分子的個數(shù)對起始樣品的痕量基因殘留進行定量

,。

5試劑或材料

除非另有規(guī)定僅使用分析純試劑

,。

51水為規(guī)定的一級水將一級水在下高壓加熱滅菌制備得到無菌水

.GB/T6682。121℃15min。

52提取試劑盒

.DNA。

53微滴數(shù)字反應試劑盒

.PCR。

54引物和探針

.

541釀酒酵母引物和探針

..:

SC-F:5'-GGACTCTGGACA

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