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文檔簡介

微生物雜交育種

微生物雜交育種的一般程序：選擇原始親本誘變篩選直接親本直接親本之間親和力的鑒定雜交分離到基本培養基或選擇性培養基篩選重組體重組體分析鑒定放線菌的雜交育種

玻璃紙法

平板雜交法

放線菌的雜交育種

雜交技術【一】——玻璃紙法原理介紹：用于雜交實驗的兩個直接親本都攜帶營養缺陷型標記。另外，其中一個親本帶某藥物的抗性標記，而另一親本則是對同種藥物具有敏感性。eg：

A親本帶met-和strB親本帶his-和ura-，但對str敏感。所用培養基：完全培養基選擇培養基（即在基本培養基中加入同一種藥物的補充培養基）

首先是將兩親本孢子接種到覆蓋于固體完全培養基上的玻璃紙表面將玻璃紙轉移到含有某藥物的補充培養基上繼續培養。一定時間培養①因為B親本對該藥物有敏感性，則在異核體中帶有對該藥物敏感的等位基因。②B對該藥物敏感，且所在的培養基中又缺乏所需his，ura營養成分。③培養基上缺乏所需要的met成分

所謂異核體：即放線菌雜交過程的兩直接親本不發生染色體交換，兩親本的染色體獨立存在在同一細胞內。菌落表型是原養型。基因型分別與親本之一相同，無重組體出現，沒有發生遺傳信息交換。玻璃紙平板雜交的具體方法：①制孢子懸浮液②混合液接種到完全培養基上的半透性玻璃紙表面③移取長有基質菌絲的玻璃紙到添加有某藥物的補充培養基上④分離子的檢出和鑒別

雜交技術【二】——平板雜交法

該方法適合于大量菌落與一個共同實驗菌株配對測定致育能力優點：適于在短時間內進行大量配對菌株的雜交。

具體方法：①將多株親本A菌株的菌落以點種法分別接種到各個完全培養基平板上，培養備用。②將一株共同配對的親本菌株B產生的孢子作成孢子懸液，取一定量加入到另一個有限培養基瓊脂平板上，培養備用。③待A孢子成熟后，采用影印法復印到B菌株平板上培養。形成部分結合子。④兩親本染色體進行一次單交換而形成雜合系。進一步培養、繁殖、雜合系形成孢子，采用影印法將雜合系孢子復印到各種選擇性培養基平板上，從而從中檢出重組體分離子。重組體。

有限培養基：是專供異核體菌株生長使用的培養基。通常在基本培養基

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