免疫診斷P241（一）抗原抗體反應(yīng)的基本原理1.特異性：

2.可逆性：非共價(jià)可逆結(jié)合

反應(yīng)條件：親和力;溫度、PH、離子濃度3.可見性：抗原抗體比例適當(dāng)?shù)谝还?jié)抗原或抗體的檢測1

2(二)抗原或抗體的檢測方法：1.凝集反應(yīng)：顆粒性抗原(細(xì)菌、紅細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有電解質(zhì)存在時(shí)，比例適當(dāng)，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊。凝集沉淀標(biāo)記技術(shù)3直接凝集反應(yīng)（1）直接凝集：

玻片法：定性檢測未知抗原

如ABO血型鑒定、細(xì)菌鑒定

試管法：定量檢測未知抗體如肥達(dá)氏反應(yīng)4（2）間接凝集：載體顆粒（RBC、乳膠等）間接凝集：包被已知抗原，如Coombstest反向間接凝集：包被已知抗體已知5間接凝集抑制反應(yīng)：妊娠乳膠試驗(yàn)(HCG)標(biāo)本62.沉淀反應(yīng)：可溶性抗原（血清蛋白、細(xì)胞裂解液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在有電解質(zhì)存在時(shí)，比例適當(dāng)，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)。7原理:檢測抗原⑴單向免疫擴(kuò)散：Ab+瓊脂制板打孔AgNSAgAg加樣觀察（含量）8沉淀環(huán)Ag擴(kuò)散Ab固定于瓊脂單向免疫擴(kuò)散9（2）雙向免疫擴(kuò)散：瓊脂AbNS10(3)對流免疫電泳：方法和原理：雙擴(kuò)＋電泳NSAgAb11（4）免疫電泳原理：電泳后雙擴(kuò)應(yīng)用：血清蛋白種類分析123.免疫標(biāo)記技術(shù)：標(biāo)記物：熒光素、酶、放射性核素等特點(diǎn)：敏感性高，定性、定位、定量13（1）免疫熒光法：

FITC、PE應(yīng)用：檢測CD分子；傳染病和自身免疫病診斷。14FITC標(biāo)記15（2）酶免疫測定：HRP、AP

*酶免疫組化法：

測定組織中或細(xì)胞表面抗原

*酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：測定可溶性抗原或抗體16ELISA原理：

將已知抗原或抗體吸附于固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌液將游離成分洗去。17方法：*雙抗體夾心法：檢測抗原Ag底物包被標(biāo)本洗滌酶標(biāo)抗體18*間接法：檢測抗體洗滌洗滌洗滌標(biāo)本觀察結(jié)果19*生物素-親和素系統(tǒng)（BAS）ELISA：生物素標(biāo)記抗體，酶標(biāo)記親和素*抗原競爭抑制法：標(biāo)本20（3）放射免疫測定法（RIA）：

131I、125I標(biāo)記，微量物質(zhì)測定或放射自顯影21（4）免疫印跡WesternBlot覆蓋轉(zhuǎn)印→硝酸纖維素膜（去垢劑）將分子大小不同的蛋白質(zhì)分開412412022稀釋的抗凝血淋巴細(xì)胞分離液淋巴細(xì)胞分離液第二節(jié)淋巴細(xì)胞的測定外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）分離：

密度梯度分離法血漿血小板PBMC紅細(xì)胞粒細(xì)胞單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞90%23淋巴細(xì)胞亞群的分離與鑒定：尼龍毛分離法：E花結(jié)實(shí)驗(yàn)：CD2/LFA-224利用表面標(biāo)志分離淋巴細(xì)胞亞群免疫熒光25流式細(xì)胞術(shù)：樣品進(jìn)入孔待分離單細(xì)胞懸液＋熒光標(biāo)記抗體產(chǎn)生散射光光電倍增管發(fā)射熒光根據(jù)細(xì)胞表面電荷26Lc功能測定：1.淋巴細(xì)胞增殖/轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：原理：

有絲分裂原等非特異刺激T、B細(xì)胞向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖。方法：

MTT法：線粒體琥珀脫氫酶MTT（噻唑鹽）甲臜顆粒（紫藍(lán)色）27氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷放射能絲裂原淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)3H-TdR摻入法MTT用酶標(biāo)儀測定細(xì)胞培養(yǎng)OD值282.T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)：CTL待檢殺傷靶細(xì)胞標(biāo)記293.

B細(xì)胞溶血空斑實(shí)驗(yàn)：RBC表面AgAb溶血空斑補(bǔ)體1～3小時(shí)檢測：B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生功能

30溶血空斑溶血空斑實(shí)驗(yàn)31免疫預(yù)防

特異性免疫的獲得方式：

1.自然免疫：

2.人工免疫：主動、被動免疫自然主動免疫自然被動免疫32一、人工主動免疫概念：用具有免疫原性的物質(zhì)接種機(jī)體，使之產(chǎn)生特異性免疫，從而預(yù)防感染的措施。疫苗（一）傳統(tǒng)疫苗：1．滅活疫苗（死疫苗）：2．減毒活疫苗：3．類毒素：33滅活疫苗和減毒活疫苗的特性比較

死疫苗活疫苗性狀死活接種次數(shù)和劑量多（2-3次）、大少（1次）、小途徑皮下皮下、自然感染途徑等效果弱、維持時(shí)間短強(qiáng)、維持時(shí)間長穩(wěn)定性穩(wěn)定、易保存不穩(wěn)定、不易保存安全性安全毒力“返祖”機(jī)制體液免疫體液、細(xì)胞、局部免疫常用疫苗霍亂、傷寒、狂犬卡介苗、麻疹、脊灰34（二）新型疫苗：1．亞單位疫苗：保留有效免疫原成分2．結(jié)合疫苗：TI-Ag+載體→TD-Ag3．合成肽疫苗：4．基因工程疫苗：

重組抗原疫苗：重組載體疫苗：

DNA疫苗:轉(zhuǎn)基因植物疫苗：編碼有效免疫原的基因35二、人工被動免疫

概念：給人體注射含有特異性抗體的免疫血清或細(xì)胞因子等制劑，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。常用制劑：（一）動物免疫血清:外毒素抗毒素類毒素脫毒刺激中和刺激36（二）人免疫球蛋白制劑1.丙種球蛋白：緊急預(yù)防甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎2.人特異性免疫球蛋白：如抗乙肝病毒免疫球蛋白（三）細(xì)胞因子制劑：IL-2、IFN等（四）單克隆抗體制劑：人血清丙種球蛋白胎盤丙種球蛋白恢復(fù)期病人血清免疫志愿者的血清37

38免疫治療免疫增強(qiáng)療法：免疫抑制療法：

特異性免疫治療：非特異性免疫治療：

主動免疫治療：被動免疫治療：39（一）抗原類制劑：疫苗、瘤苗、自身抗原（二）抗體類制劑1.免疫血清：2.抗淋巴細(xì)胞丙種球蛋白：3.抗腫瘤抗體制劑：靶向治療常用細(xì)胞毒物質(zhì)：放射性核素、化療藥物、毒素存在問題：鼠源性抗體；對實(shí)體腫瘤穿透力差；特異性不高。4.抗細(xì)胞因子抗體：如用抗IL-1治療RA。40（三）免疫細(xì)胞類制劑：1．造血干細(xì)胞移植：骨髓移植、臍血轉(zhuǎn)輸2．過繼免疫療法：CIK：cytokineinduceskillercells.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞。主要源于NK（外周血淋巴細(xì)胞）。TIL：tumorinfiltratinglymphocytes,腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞。源于實(shí)體瘤組織，更強(qiáng)的殺傷活性。41（四）生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑：BRM，具有促進(jìn)或調(diào)節(jié)免疫功能的制劑，通常對免疫功能正常者無影響，對免疫功能異常尤其是免疫功能低下者有促進(jìn)和調(diào)節(jié)作用。1.BCG、短小棒桿菌、細(xì)菌或真菌的多糖成分2.胸腺肽：3.轉(zhuǎn)移因子：4.免疫核糖核酸：42（五）免疫抑制劑：化學(xué)合成：環(huán)磷酰胺，硫唑嘌呤微生物制劑：環(huán)孢素或環(huán)孢菌素CsA；FK-506；雷公藤制劑43抗原補(bǔ)體免疫細(xì)胞MHCCK、CD等抗體免疫應(yīng)答B(yǎng)細(xì)胞T細(xì)胞體液免疫細(xì)胞免疫復(fù)習(xí):

生理：病理的免疫應(yīng)答：超敏、腫瘤、移植免疫診斷、防治：APC44APCT細(xì)胞LFA-1CD2LFA-3TCRCD28B7CD4MHC－Ⅱ肽CD40LCD40ICAM-1122作用：以IgG為代表:結(jié)合抗原的部位遺傳標(biāo)記所在部位結(jié)合補(bǔ)體、結(jié)合胎盤部位結(jié)合細(xì)胞部位46復(fù)習(xí)思考題一、名解：凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、ELISA、（凝集