實驗一

光學顯微鏡的使用與標本片觀察一、目的要求1、掌握光學顯微鏡的使用方法；重要微生物的典型形態。2、了解光學顯微鏡的原理。二、光學顯微鏡的基本結構1.鏡座；2.載物臺；3.鏡臂；4.棱鏡套；5.鏡筒；6.接目鏡；7.轉換器；8.接物鏡；9.聚光器；10.虹彩光圈；11.光圈固定器；12.聚光器升降螺旋；13.反光鏡；14.細調節器；15.粗調節器；16.標本夾光學顯微鏡基本結構：1.

照明燈2.

聚光器3.

載物臺和切片夾4.

推進器5.

物鏡6.

粗細螺旋7.

目鏡8.

照相機等接口1、增加照明亮度油鏡的放大倍數可達100×，放大倍數這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大。*油鏡

從承載標本的玻片透過來的光線，因介質密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用油鏡時會因射入的光線較少，物像顯現不清。所以為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時需在油鏡和玻片之間加入與玻璃的折射率（n=1.55）相仿的鏡油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52）。2、增加顯微鏡的分辨率

油鏡的分辨率卻可達到0.2μm左右。三、實驗器材1、微生物標本片

2、香柏油、二甲苯。3、光學顯微鏡、擦鏡紙。四、實驗步驟1、觀察前的準備（1）顯微鏡的安置

置顯微鏡于平整的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊緣約3～4㎝。鏡檢時姿勢要端正。

取、放顯微鏡時應一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或記錄。（2）光源調節

安裝在鏡座內的光源燈可通過調節電壓以獲得適當的照明亮度，而使用反光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時，應根據光源的強度及所用物鏡的放大倍數選用凹面或凸面反光鏡并調節其角度，使視野內的光線均勻，亮度適宜。

2、顯微觀察在目鏡保持不變的情況下，使用不同放大倍數的物鏡所能達到的分辨率及放大率都是不同的。一般情況下，特別是初學者，進行顯微觀察時應遵從由低倍鏡到高倍鏡再到油鏡的觀察程序，因為低倍數物鏡視野相對大，易發現目標及確定檢查的位置。（1）低倍鏡觀察

將染色標本玻片置于載物臺上，用標本夾夾住，移動推進器使觀察對象處在物鏡的正下方。將10×物鏡置于光路中，用粗調節器慢慢升起載物臺，使標本在視野中初步聚焦，再使用細調節器調節圖像清晰。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片，認真觀察標本各部位，找到合適的目的物，仔細觀察并記錄觀察到的結果。

（2）高倍鏡觀察

在低倍鏡下找到合適的觀察目標并將其移至視野中心后，輕輕轉動物鏡轉換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調節后，微調細調節器使物像清晰，利用推進器移動標本仔細觀察并記錄所觀察到的結果。

（3）油鏡觀察

在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區域后，用粗調節器將載物臺降低，然后將油鏡轉到工作位置。在待觀察的樣品區域加滴香柏油，從側面注視，用粗調節器將載物臺小心地上升，使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標本相接。調節照明使視野的亮度合適，用粗調節器將載物臺徐徐下降，直至視野中出現物像并用細調節器使其清晰準焦為止。

3、顯微鏡用畢后的處理（1）下降載物臺，取下載玻片。（2）用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。切忌用手或其他紙擦拭鏡頭，以免使鏡頭沾上污漬或產生劃痕，影響觀察。

（3）用擦鏡紙清潔其他物鏡及目鏡，用稠布清潔顯微鏡的金屬部件。（4）將各部分還原，將物鏡轉成“八”字形，再向下旋。

4、微生物