1維生素B12注射液的定性鑒別及定量分析

1、導入新課

先強調維生素B12的重要性——常用于治療貧血癥，還可對神經炎有一定的療效。那么我們如何檢測某種藥物含有維生素B12？若有，含量是多少呢？這節課我們就利用紫外-可見分光光度計對維生素B12注射液進行定性鑒別和定量分析。實驗原理

定性鑒別定量分析3、課堂小結注意事項結果討論⑴

掌握定性鑒別的方法和吸光系數法的定量方法。⑵

熟悉紫外-可見分光光度計的操作方法。⑶了解含量測定、標示量的百分含量的計算方法。一、實驗目的二、實驗原理結構特點：含鈷的卟啉類化合物臨床用途：控制貧血、輔助治療神經炎二、實驗原理361nm550nm278nm維生素B12的水溶液在278±1nm、361±1nm與550±1nm三波長處有吸收峰。A361

/A550=3.15~3.45A361/A278=1.70~1.88吸光系數法1、以蒸餾水作為空白參比，測定待測溶液的吸光度Ax；2、計算待測溶液的吸收系數；3、計算標示量（含量）二、實驗原理【儀器與試劑】

1.儀器：

紫外-可見分光光度計

2.試劑：

40ug/ml維生素B12溶液三、實驗過程1、維生素B12樣品溶液的配制：2、以蒸餾水為參比，測定樣品溶液的吸光度3、計算樣品標示量紫外-可見分光光度計基本結構光源單色器吸收池檢測器信號顯示系統按材料可分為玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外區。可見光區常用光源是鎢燈或碘鎢燈，波長范圍是350-1000nm。紫外區常為氫燈或氘燈，波長范圍是180-360nm。UV-2000紫外-可見分光光度計的使用方法1.接通電源，開機預熱30分鐘UV-2000紫外-可見分光光度計的使用2.調節波長UV-2000紫外-可見分光光度計的使用注意：手拿比色皿毛面，高度為比色皿的2/3。3.比色皿加樣，依次放入比色槽中UV-2000紫外-可見分光光度計的使用4.調“100%”：光標調到T,將參比溶液對準光路，按“100%”，儀器自動校正；完畢后顯示“100.0”，即T=100%。UV-2000紫外-可見分光光度計的使用UV-2000紫外-可見分光光度計的使用5.測定吸光度：將樣品溶液對準光路，儀器數值變動；完畢后顯示即樣品溶液的吸光度。1、每調整一次波長均需要用空白重新調整100%透光率。2、調整波長時，最好朝一個方向旋轉。3、開關比色皿暗箱時，動作要輕。4、若吸光度值大于0.8，需把待測試液稀釋，使吸光度值在0.2~0.7范圍內。5、比色皿的光面只可能用擦鏡紙擦拭，并只能順一個方向擦拭。6、不要在儀器上方傾倒測試樣品，以免樣品污染儀器表面，損壞儀器。7、一定要將比色皿外部所沾樣品擦干凈，才能放進比色皿架進行測定。注意事項波長（nm）A峰32770.4212780.4232790.403峰23600.7613610.7783620.756峰15490.2455500.2465510.2431、定性鑒別A361

/A550=3.15~3.45A361/A278=1.70~1.88數據記錄2、定量分析樣品名稱檢驗日期所用儀器型號檢測波長測定序號123吸光度A吸光度平均值結果：含量=計算樣品標示量（含量）

對照樣品標示量%=90%-110%，合格數據處理結果討