源興基因藥物研發中心腺病毒載體工藝平臺介紹2023/1/131基因藥物研發中心

研發中心廠房及設備源興基因藥物研發中心建筑面積1900多平方米，其中符合國家GMP要求的潔凈廠房面積1600多平方米，包括原液生產車間、制劑生產車間、質量控制實驗室以及研發實驗室。研發中心配置了NBS細胞罐、AKTA純化系統、高速冷凍離心機、切向流超濾系統、二氧化碳培養箱、生物安全柜、分析型HPLC系統、PCR儀、電泳儀、酶標儀、超聲波破碎儀、超聲波西林瓶清洗機、隧道式滅菌烘箱、液體灌裝加塞機、軋蓋機、凝膠掃描成像系統、超純水儀、多效蒸餾水機等儀器設備。

能夠滿足腺病毒載體藥物研發、生產和質量控制的要求。

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研發中心生產系統組織圖總經理生產總監工藝開發部（10人）質控部（5人）設備工程部（4人）物控部（3人）細胞病毒培養純化制劑分裝清潔輔助2023/1/1310基因藥物研發中心

研發隊伍打造了一支技術過硬的研發隊伍，能夠保證工藝水平及產品質量穩定。歷經多次新藥申報，比較熟悉新藥審評程序和規定，積累了較豐富的申報經驗，能夠比較順利的解決有關問題。2023/1/1311基因藥物研發中心

管理制度建立了300多個SOP、SMP等標準程序和規章管理制度，按照GMP要求嚴格規范管理。2023/1/1312基因藥物研發中心

研發中心工藝平臺研發中心工藝產業化平臺是通用型腺病毒載體藥物生產工藝和質量標準研究的藥學技術平臺，中試生產工藝水平達到了國內同行業先進水平，可以在產量及質量上滿足腺病毒載體藥物臨床前和臨床用樣品制備的要求。本工藝擁有自主知識產權，可作為腺病毒載體新藥研發及生產的技術基礎。5L細胞罐收獲物經純化后產量能達到E15VP/批，注射液制劑工藝達到了小容量水針1萬支/批的生產能力。產品純度大于98%，比滴度大于3.3%，各項質檢結果都能達到FDA對腺病毒類生物制品的質量標準要求。2023/1/1313基因藥物研發中心

研發中心已完成申報臨床所需藥學研究的品種品種代號研究單位研究時間治療性重組HBV腺病毒疫苗CHB3源興2004年3月至2005年11月治療性HIV腺病毒載體疫苗H30源興2005年12月至2007年8月治療性重組腺病毒EB病毒潛伏膜抗原疫苗LMP2CDC病毒病所委托源興承擔藥學研究2007年9月至2008年10月2023/1/1314基因藥物研發中心

新藥申報三方面研究內容

藥學研究藥效研究安全評價2023/1/1315基因藥物研發中心

藥學研究主要內容上游構建及鑒定細胞/毒種研究及三級庫建立原液工藝研究制劑工藝研究檢測方法及質量標準研究穩定性研究試制三批樣品2023/1/1316基因藥物研發中心

細胞及毒種研究細胞檢定、傳代穩定性研究毒種檢定、代次及遺傳穩定性研究2023/1/1317基因藥物研發中心

建細胞庫原始細胞細胞來源于ATCC主細胞庫質量控制工作細胞庫質量控制細胞擴增細胞擴增

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建毒種庫工作種子批病毒擴增原始種子批主種子批鑒定檢測質量控制質量控制病毒擴增2023/1/1319基因藥物研發中心

原液工藝流程、參數及技術指標Sepharose6FastFlow分子篩層析回收率（3批平均）

重組腺病毒種子罐收獲物超濾濃縮液SOURCE30Q陰離子交換柱層析層析收集液原液6000RPM離心20min500K膜超濾濃縮10倍細胞種子細胞罐擴增5L罐細胞培養，病毒擴增：DO60%,37℃,pH7.2,耗糖40g/d接種病毒，MOI為20

H30產量（3批平均）

53%460ml1.1×1015VP2023/1/1320基因藥物研發中心

細胞罐工藝細胞復蘇培養毒種制備罐細胞培養罐細胞染毒罐病毒培養純化2023/1/1321基因藥物研發中心

細胞罐葡萄糖消耗監控曲線圖2023/1/1322基因藥物研發中心

細胞罐產毒濃度曲線2023/1/1323基因藥物研發中心

細胞罐病毒收獲曲線2023/1/1324基因藥物研發中心

純化工藝罐病毒收獲液離心超濾濃縮離子交換層析酶切分子篩層析原液2023/1/1325基因藥物研發中心

純化圖譜2023/1/1326基因藥物研發中心

制劑工藝流程圖病毒保存液原液半成品配制除菌分裝軋蓋燈檢貼簽包裝、貯存鋁蓋清洗、烘干膠塞滅菌西林瓶清洗、干烤檢測檢測

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制劑處方篩選結果從以上結果可以看出，處方Ⅰ為最優，處方Ⅱ次之，處方Ⅲ最差，處方Ⅳ較差。于是將處方確定為處方Ⅰ。

不同處方貯存情況比較圖0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+09012345678貯存時間（周）滴度（IU/ml）處方1處方2處方3處方42023/1/1328基因藥物研發中心

質量標準及檢測方法檢測項目注射液方法外觀（含可見異物）符合藥典相應規定中國藥典三部附錄ⅤBpH值7.0－8.0中國藥典三部附錄ⅤA裝量≥1.0ml中國藥典三部附錄ⅠA鑒別試驗符合相應的規定PCR法病毒顆粒數1.0×1011VP/ml(80-150%)UV法比滴度（IU/Vp）≥3.3%TCID50法HPLC純度≥95%HPLC法小鼠效力試驗陽性率≥60%ELISPOT法293細胞DNA殘留量≤10ng/劑量用地高辛試劑盒方法（固相斑點雜交法）牛血清白蛋白殘留量≤100ng/劑量ELISA法RCA＜1RCA/3×1010VPA549細胞檢測法（空斑法）AAV檢測不得檢出PCR法293細胞蛋白殘留量≤100ng/劑量ELISA法無菌試驗（含支原體）陰性中國藥典三部附錄ⅫA和ⅫB細菌內毒素＜10EU/劑量中國藥典三部附錄ⅫE小鼠異常毒性試驗符合規定中國藥典三部附錄ⅫF2023/1/1329基因藥物研發中心

HPLC純度2023/1/1330基因藥物研發中心

免疫熒光檢測2023/1/1331基因藥物研發中心

穩定性研究試驗結果

穩定性試驗結果表明，在-80℃、-20℃和2-8℃存放9個月，本品質量都保持穩定，而在37℃其質量有顯著下降。

不同溫度貯存情況圖0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+090周1周2周3周4周5周6周2月3月6月9月貯存時間滴度（IU/ml）-80℃-20℃2－8℃37℃2023/1/1332基因藥物研發中心

生物制品藥學研究申報資料《藥品注冊管理辦法》藥學研究資料

7.藥學研究資料綜述。

8.生產用原材料研究資料：（1）生產用動物、生物組織或細胞、原料血漿的來源、收集及質量控制等研究資料；（2）生產用細胞的來源、構建（或篩選）過程及鑒定等研究資料；（3）種子庫的建立、檢定、保存及傳代穩定性資料；（4）生產用其它原材料的來源及質量標準。

9.原液或原料生產工藝的研究資料，確定的理論和實驗依據及驗證資料。

10.制劑處方及工藝的研究資料，輔料的來源和質量標準，及有關文獻資料。

11.質量研究資料及有關文獻，包括參考品或者對照品的制備及標定,以及與國內外已上市銷售的同類產品比較的資料。

12.臨床試驗申請用樣品的制造和檢定記錄（連續3批）。

13.制造和檢定規程草案，附起草說明及檢定方法驗證資料。

14.初步穩定性研究資料。

15.直接接觸制品的包裝材料和容器的選擇依據及質量標準。2023/1/1333基因藥物研發中心

樣品試制條件要求《藥品注冊現場核查管理規定》☆臨床試驗用藥物應當在符合《藥品生產質量管理規范》的車間制備。制備過程應當嚴格執行《藥品生產質量管理規范》的要求。☆樣品的原始批生產記錄與申報資料工藝一致。☆必須通過藥監局現場核查。2023/1/1334基因藥物研發中心

腺病毒產品藥學研究的核心生產工藝的可放大性及穩定性樣品必須用具有規模放大性、可穩定批量生產的工藝制備檢驗方法經過驗證產品質量必須通過中檢所復核2023/1/1335基因藥物研發中心

腺病毒產品藥學研究的關鍵點★建立毒種產業化應用標準和評估方法比滴度

SFDA要求腺病毒制品比滴度≥3.3%。