生物技術(shù)實驗BiotechnologyExperiments教學(xué)大綱學(xué)分?jǐn)?shù)4適用專業(yè)生物技術(shù)使用教材（按作者、教材名稱、出版社、出版年月順序填寫）自編實驗教材教學(xué)參考資料（按作者、參考資料名稱、出版者、出版年月順序填寫；填寫的教學(xué)參考資料應(yīng)不少于三種）1.《分子克隆實驗指南》，J.薩姆布魯克主編、著，科學(xué)出版社，19992.《分子生物學(xué)實驗技術(shù)》，郝福英主編、著，北京大學(xué)出版社，1999《遺傳學(xué)實驗》，喬守怡主編、著，北京：高等教育出版社，20154.《生物工程技術(shù)實驗指導(dǎo)》魏群編，北京：高等教育版社，20025.《微生物工程實驗》首都師范大學(xué)網(wǎng)絡(luò)版；/syjx/jiangyi/index.htm6.《細(xì)胞工程模塊實驗教程》，詹亞光等，科學(xué)出版社，20127.《細(xì)胞工程實驗教程》，王蒂，中國農(nóng)業(yè)出版社，2007一、概述1、課程定位與性質(zhì)生物技術(shù)實驗是現(xiàn)代生物技術(shù)的重要組成部分。該課程在生物技術(shù)專業(yè)的課程體系中處于核心地位，是生物技術(shù)本科專業(yè)的專業(yè)必修課程，對于培養(yǎng)現(xiàn)代生物技術(shù)的高級應(yīng)用型人才至關(guān)重要。2、課程教學(xué)目標(biāo)通過生物技術(shù)類實驗課程的學(xué)習(xí)，使學(xué)生獲得微生物工程、酶工程、細(xì)胞工程、基因工程基本實驗方法和技能、技巧，培養(yǎng)學(xué)生的動手能力、分析問題和解決問題的能力，并在科學(xué)態(tài)度、科學(xué)思想觀，以及獨立開展有關(guān)科研和實踐工作能力方面獲得初步訓(xùn)練。（1）微生物工程是一門年輕的學(xué)科，是自然科學(xué)中發(fā)展最迅速的學(xué)科之一，它是一門應(yīng)用實驗科學(xué)，內(nèi)容包括菌種選育、培養(yǎng)基的配置、滅菌、種子擴(kuò)大培養(yǎng)和接種、發(fā)酵過程和產(chǎn)品的分離提純（生物分離工程）等方面。（2）酶工程是生物技術(shù)的基礎(chǔ)和重要組成部分，是生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的重要環(huán)節(jié)，具有非常強(qiáng)的實踐操作性。通過實驗操作，使學(xué)生初步了解酶的生產(chǎn)工藝以及條件控制，掌握酶活性的測定方法，初步掌握酶的分離、純化的方法過程，為后續(xù)課程乃至將來從事科學(xué)研究工作打下堅實的基礎(chǔ)。（3）基因工程是在分子水平上對基因進(jìn)行操作的復(fù)雜技術(shù)，是將外源基因通過體外重組后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)，使這個基因能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)的操作。本門課程實驗包括根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)、GUS染色檢測外源基因的時空特異性表達(dá)、擬南芥T-DNA插入突變體插入與純合檢測、外源基因在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)與檢測等內(nèi)容，使學(xué)生較系統(tǒng)地了解、掌握對植物轉(zhuǎn)基因操作的原理、技術(shù)和要點，為從事相關(guān)研究打下基礎(chǔ)。（4）細(xì)胞工程是生物工程的一個重要方面，本門課程實驗以植物細(xì)胞培養(yǎng)、繁殖為主，包括在細(xì)胞水平進(jìn)行特殊基因型的篩選、無性繁殖、原生質(zhì)體制備、培養(yǎng)與融合等。3、課程適用專業(yè)、年級、開課時間本課程適用于生物技術(shù)本科專業(yè)三年級學(xué)生；開課時間為秋季、春季學(xué)期。二、教學(xué)內(nèi)容與學(xué)時分配1、各章課時分配表。序號項目名稱類別學(xué)時性質(zhì)1α-淀粉酶的發(fā)酵生產(chǎn)必做6設(shè)計性2α-淀粉酶的分離、純化、濃縮、干燥必做6綜合性3α-淀粉酶酶活力的測定及提取收率的計算必做6綜合性4α-淀粉酶的酶學(xué)性質(zhì)必做4綜合性5固定化淀粉酶的制備及其應(yīng)用必做6綜合性6雙酶法制備淀粉糖必做4綜合性7藥用真菌菌種分離與制備必做6綜合性8藥用真菌液體發(fā)酵動態(tài)變化必做6設(shè)計性9液體培養(yǎng)藥用真菌發(fā)酵液多糖的提取與純化必做6設(shè)計性10產(chǎn)抗生素菌液發(fā)酵及性能鑒定必做6設(shè)計性11紅霉素的提取和純化必做6綜合性12小型發(fā)酵罐的操作和維護(hù)必做2綜合性13根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)必做6綜合性14GUS染色檢測外源基因的時空特異性表達(dá)必做4綜合性15T-DNA插入突變體插入與純合鑒定必做6綜合性16外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)必做6綜合性17外源基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測分析——SDS必做6綜合性18分子雜交技術(shù)必做4綜合性19培養(yǎng)基的制備和無菌苗的培養(yǎng)必做6綜合性20植物脫毒與快繁技術(shù)必做6設(shè)計性21植物原生質(zhì)體的分離、純化與培養(yǎng)必做6設(shè)計性22細(xì)胞融合技術(shù)必做5設(shè)計性23小鼠細(xì)胞原代培養(yǎng)必做6綜合性24小鼠細(xì)胞的傳代培養(yǎng)必做3綜合性實驗一實驗編號：07210084-1實驗名稱：α-淀粉酶的發(fā)酵生產(chǎn)實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：設(shè)計性實驗?zāi)康模赫莆盏矸勖傅让钢苿┑陌l(fā)酵生產(chǎn)過程及相關(guān)技術(shù)參數(shù)。實驗內(nèi)容：1．微生物培養(yǎng)的固體和液體培養(yǎng)基的制備；2．微生物培養(yǎng)過程中pH、密度和酶活力的動態(tài)變化；3．高壓滅菌和搖床培養(yǎng)；4．固液分離技術(shù)。主要儀器：儀器類：高壓鍋、搖床、離心機(jī)（50ml×4,5000RPM）、離心機(jī)（1.5ml×12,16000RPM）、超凈工作臺、紫外分光光度計、錐形瓶、脫脂棉、紗布、細(xì)繩、試管、平皿、燒杯、量筒、移液管、電子天秤（精確度±0.0001g）、可調(diào)溫帶搖床式空氣浴培養(yǎng)箱、大型培養(yǎng)箱、大型干燥箱、冰箱、pH測定儀、酒精燈、鑷子、剪刀、標(biāo)簽、離心管、接種環(huán)、磁力攪拌器、粗細(xì)玻璃棒、稱量紙、微波爐或電爐等。化學(xué)試劑類：牛肉膏、胰蛋白胨、可溶性淀粉、瓊脂、麥芽糖、水楊酸、NaCl。微生物類：產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌。實驗二實驗編號：07210084-2實驗名稱：α-淀粉酶的分離、純化、濃縮、干燥實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模赫莆盏矸勖傅姆蛛x方法、純化方法、濃縮方法和干燥方法。實驗內(nèi)容：1．淀粉酶的鹽析純化；2．淀粉酶的透析純化；3．淀粉酶溶液的蒸發(fā)濃縮和凍干濃縮；4．淀粉酶的冷凍干燥主要儀器：儀器類：燒杯、量筒、電子天秤（精確度±0.0001g）、磁力攪拌器、離心機(jī)（50ml×4,5000RPM）、透析膜、水浴鍋、烘箱、冷凍干燥機(jī)等。化學(xué)試劑類：硫酸銨、氯化鋇、氯化鈉、硫酸鎂實驗三實驗編號：07210084-3實驗名稱：α-淀粉酶酶活力的測定及提取收率的計算實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模?．掌握淀粉酶活力的測定方法；2．掌握測定酶的提取收率的計算方法。實驗內(nèi)容：1．淀粉酶活力的測定；2．淀粉酶的提取收率的測定及其計算。主要儀器：儀器類：紫外分光光度計、燒杯、量筒、移液管、電子天秤（精確度±0.0001g）、恒溫水浴鍋、刻度試管、琥珀色容量瓶和試劑瓶等。化學(xué)試劑類：無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、氯化鈉(NaCl)、苯甲酸、可溶性淀粉、碘酸鉀(KIO3)、碘化鉀(KI)、12mol/L濃鹽酸（HCl）。實驗四實驗編號：07210084-4實驗名稱：α-淀粉酶的酶學(xué)性質(zhì)實驗學(xué)時：4實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模?．掌握金屬離子存在時酶活力測定的原理及方法。實驗內(nèi)容：1．不同金屬離子溶液的配制；2．金屬離子對淀粉酶活力的影響。主要儀器：儀器類：紫外分光光度計、燒杯、量筒、移液管、電子天秤（精確度±0.0001g）、恒溫水浴鍋、刻度試管、琥珀色容量瓶和試劑瓶等。化學(xué)試劑類：無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、氯化鈉(NaCl)、苯甲酸、可溶性淀粉、碘酸鉀(KIO3)、碘化鉀(KI)、12mol/L濃鹽酸（HCl）、硫酸銅、氯化鐵、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸鋅、硫酸錳、硝酸鉛。實驗五實驗編號：07210084-5實驗名稱：固定化淀粉酶的制備及其應(yīng)用實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模?．掌握凝膠包埋法制備固定化淀粉酶的方法；2．了解固定化淀粉酶的應(yīng)用。實驗內(nèi)容：1．海藻酸鈣凝膠包埋法制備固定化淀粉酶；2．用固定化淀粉酶在攪拌罐式反應(yīng)器模型中水解淀粉。主要儀器：儀器類：電子天平、分光光度計、水浴鍋、電磁爐、磁力攪拌器、燒杯、玻棒、量筒、試管、量筒、移液管、注射器（帶7號針頭）、紗布等。化學(xué)試劑類：海藻酸鈉、無水氯化鈣、無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、氯化鈉(NaCl)、苯甲酸、可溶性淀粉、碘酸鉀(KIO3)、碘化鉀(KI)、12mol/L濃鹽酸（HCl）。實驗六實驗編號：07210084-6實驗名稱：雙酶法制備淀粉糖實驗學(xué)時：4實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模赫莆针p酶法（淀粉酶和葡萄糖淀粉酶）制備淀粉糖的工藝流程。實驗內(nèi)容：1．淀粉的液化；2．淀粉的糖化。3．淀粉糖漿的脫色；4．淀粉糖漿含糖量的測定。主要儀器：儀器類：電子天平、水浴鍋、烘箱、電磁爐、磁力攪拌器、燒杯、玻棒、量筒、量筒、移液管等。化學(xué)試劑類：淀粉、α-淀粉酶、糖化酶、0.1mol?L-1HCl、無水CaCl2、碘液、活性炭實驗七實驗編號：07210084-7實驗名稱：藥用真菌菌種分離與制備實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模?.學(xué)會食藥用菌菌絲體分離菌種的原理和方法2.掌握菌絲和孢子作為菌種的區(qū)別。實驗內(nèi)容：1.配制PDA固體培養(yǎng)基2.選擇合適的平菇菌絲體3.無菌操作分離菌絲體。主要儀器：無菌操作臺、霉菌培養(yǎng)箱、解剖刀實驗八實驗編號：07210084-8實驗名稱：藥用真菌液體發(fā)酵動態(tài)變化實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：設(shè)計性實驗?zāi)康模?.學(xué)會液體培養(yǎng)平菇的原理和方法2.掌握液體培養(yǎng)條件下的無菌技術(shù)3.掌握液體培養(yǎng)條件下各因子的動態(tài)變化4.掌握發(fā)酵終點的判斷及污染處理。實驗內(nèi)容：1.配制PDA液體培養(yǎng)基2.學(xué)習(xí)液體菌種的制備3.無菌操作取樣4.測定發(fā)酵液還原糖、總糖、多糖、蛋白質(zhì)、氨基氮等指標(biāo)的含量變化5.探討引起指標(biāo)變化的原因。主要儀器：無菌操作臺、振蕩培養(yǎng)箱、紫外分光光度計、凱氏定氮儀、控溫消煮爐實驗九實驗編號：07210084-9實驗名稱：液體培養(yǎng)藥用真菌發(fā)酵液多糖的提取與純化實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：設(shè)計性實驗?zāi)康模?.通過液體深層發(fā)酵獲得發(fā)酵液，學(xué)會固液分離的一般方法2.醇沉的原理及影響條件3.掌握多糖提取的最佳工藝。實驗內(nèi)容：1.液體深層培養(yǎng)阿魏側(cè)耳、選擇最佳培養(yǎng)時間、培養(yǎng)條件進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)2.正確判斷發(fā)酵終點3.固液分離的方法4.醇沉條件的選擇和優(yōu)化5.多糖提取率的獲得主要儀器：振蕩培養(yǎng)箱、紫外分光光度計、水浴鍋，離心機(jī)實驗十實驗編號：07210084-10實驗名稱：產(chǎn)抗生素菌液發(fā)酵及性能鑒定實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：設(shè)計性實驗?zāi)康模?.通過液體深層發(fā)酵進(jìn)行抗生素發(fā)酵，獲得發(fā)酵液2.學(xué)會抗生素效價的測定的一般方法3.正確判斷發(fā)酵終點和發(fā)酵污染等內(nèi)容。實驗內(nèi)容：1.液體深層培養(yǎng)抗生素產(chǎn)生菌2.選擇最佳培養(yǎng)時間、培養(yǎng)條件進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)3.正確判斷發(fā)酵終點4.利用發(fā)酵上清液進(jìn)行效價測定。主要儀器：振蕩培養(yǎng)箱、紫外分光光度計、水浴鍋，離心機(jī)實驗十一實驗編號：07210084-11實驗名稱：紅霉素的提取和純化實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模?.掌握紅霉素發(fā)酵的特點2.正確判斷發(fā)酵終點3.學(xué)會利用相似相容原理進(jìn)行分離紅霉素的方法4.學(xué)會紅霉素洗滌純化的原理和方法。實驗內(nèi)容：1.正確培養(yǎng)紅霉素產(chǎn)生菌2.正確判斷發(fā)酵終點3.固液分離4.相似相容原理5.紅霉素洗滌，紅霉素干燥等等。主要儀器：振蕩培養(yǎng)箱、紫外分光光度計、水浴鍋，離心機(jī)實驗十二實驗編號：07210084-11實驗名稱：小型發(fā)酵罐的操作和維護(hù)試驗學(xué)時：2學(xué)時實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模喊l(fā)酵罐的操作原理無菌空氣的制備實罐滅菌的原理和方法無菌接種的方法發(fā)酵培養(yǎng)的操作。實驗內(nèi)容：培養(yǎng)大腸肝菌菌種，高壓蒸汽的制備，各管道的連接與發(fā)酵罐的安裝，實罐滅菌，冷卻，接種，發(fā)酵培養(yǎng)，無菌空氣進(jìn)入等等。主要儀器：小型發(fā)酵罐，蒸汽發(fā)生器，無菌操作臺、振蕩培養(yǎng)箱。實驗十三實驗編號：07210084-13實驗名稱：根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模?.學(xué)習(xí)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的基本原理；2.掌握農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的基本操作技術(shù)，了解葉盤轉(zhuǎn)化法的原理及基本操作技術(shù)。實驗內(nèi)容：1.根癌農(nóng)桿菌菌種活化及檢測。2.擬南芥打頂和已開花夾全部去除。3.擬南芥浸花法進(jìn)行農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化。主要儀器：臺式離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、剪刀、鑷子、Enpendorf管、微量移液器、光照培養(yǎng)箱等。實驗十四實驗編號：07210084-14實驗名稱：GUS染色檢測外源基因的時空特異性表達(dá)實驗學(xué)時：4實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模和ㄟ^GUS(β-葡萄糖苷酸酶)染色原理，了解報告基因在基因工程中的應(yīng)用。實驗內(nèi)容：1.浸染。2.脫色。3.觀察。主要儀器：恒溫培養(yǎng)箱、剪刀、鑷子、離心管、體式鏡、培養(yǎng)皿等。實驗十五實驗編號：07210084-15實驗名稱：T-DNA插入突變體插入與純合鑒定實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模?.了解T-DNA插入突變體對于研究基因功能的意義2.掌握擬南芥葉片DNA快速提取的方法；3.掌握利用PCR方法鑒定擬南芥T-DNA插入突變體插入與純合的方法。實驗內(nèi)容：1.基因組DNA的快速分離2.PCR反應(yīng)3.PCR產(chǎn)物的電泳分離。主要儀器：移液器、臺式離心機(jī)、Enpendorf管、PCR儀、電泳系統(tǒng)、凝膠成像系統(tǒng)等。實驗十六實驗編號：07210084-16實驗名稱：外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：設(shè)計性實驗?zāi)康模毫私馔庠椿虮磉_(dá)常用的載體及其特點，掌握原核基因表達(dá)產(chǎn)物分離的方法。實驗內(nèi)容：1.大腸桿菌的培養(yǎng)2.

融合蛋白在不同溫度、不同誘導(dǎo)時間及不同IPTG濃度下小規(guī)模誘導(dǎo)表達(dá)、3.菌體收集4.蛋白的抽提主要儀器：儀器類：高速冷凍離心機(jī)、Enpendorf管、微量移液器、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、聚丙烯酰胺凝膠電泳裝置、電磁爐、水浴鍋、注射器等；實驗十七實驗編號：07210084-17實驗名稱：外源基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測分析——SDS實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性實驗?zāi)康模赫莆胀庠椿虮磉_(dá)產(chǎn)物的活性檢測的分析方法。實驗內(nèi)容：1.蛋白質(zhì)樣品的制備；2.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測；3.凝膠的染色、脫色與分析。主要儀器：儀器類：高速冷凍離心機(jī)、Enpendorf管、微量移液器、垂直板電泳槽及配套的玻璃板，制膠器，膠條，梳子，恒壓恒流電泳儀，脫色搖床，大培養(yǎng)皿，燒杯，白磁盤等。試劑類：丙烯酰胺（Acryl

amide,

Acr），N，N’-亞甲基雙丙烯酰胺，三羥甲基氨基甲烷（Tris），鹽酸（HCl），甘氨酸（Gly），十二烷基硫磺酸鈉（SDS），過硫酸銨（Aps），四甲基乙二胺（TEMED），預(yù)染標(biāo)準(zhǔn)蛋白，溴酚藍(lán)，甘油，冰醋酸，無水乙醇，巰基乙醇，考馬斯亮藍(lán)R250，NaOH，K2HPO4。實驗十八實驗編號：07210084-18實驗名稱：分子雜交技術(shù)實驗學(xué)時：4實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合性（演示性）實驗?zāi)康模赫莆誅NA、RNA、蛋白質(zhì)印記雜交技術(shù)。實驗內(nèi)容：1.DNA、RNA、蛋白質(zhì)的處理；2.雜交；3.結(jié)果分析。主要儀器：儀器類：分子雜交儀，演示系統(tǒng)等。試劑類：略。實驗十九實驗編號：07210084-19實驗名稱：培養(yǎng)基的制備和無菌苗的培養(yǎng)實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合實驗?zāi)康模?、學(xué)習(xí)和掌握常用培養(yǎng)基母液的配制方法；2、掌握配制MS培養(yǎng)基的原理和方法；3、掌握對植物組織進(jìn)行表面消毒的方法；4、了解培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)劑使用的一般原則；5、掌握離體培養(yǎng)技術(shù)。實驗內(nèi)容：1、MS基本培養(yǎng)基不同濃縮倍數(shù)母液的配制。2、設(shè)計不同方法對種子進(jìn)行表面消毒，獲得無菌苗。3、將外植體接種到添加不同生長調(diào)節(jié)劑的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。4、培養(yǎng)、觀察。主要儀器：剪刀、燒杯、量筒、容量瓶、鑷子、解剖刀、超凈工作臺、光照培養(yǎng)箱、顯微鏡、錐形瓶、電磁爐等。實驗二十實驗編號：07210084-20實驗名稱：植物脫毒與快繁技術(shù)實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：設(shè)計實驗?zāi)康模?、掌握利用莖尖進(jìn)行脫毒培養(yǎng)的方法。2、掌握脫毒效果的檢測技術(shù)。3、掌握脫毒苗的微體快繁技術(shù)。實驗內(nèi)容：1、幼苗的培育；2、材料的選擇和滅菌；3、莖尖的剝離和接種；4、培養(yǎng)、觀察、記錄；5、進(jìn)行病毒檢測；6、快繁。主要儀器：剪刀、燒杯、鑷子、解剖刀、解剖鏡、花盆、超凈工作臺、光照培養(yǎng)箱、顯微鏡、錐形瓶等。實驗二十一實驗編號：07210084-21實驗名稱：植物原生質(zhì)體的分離、純化與培養(yǎng)實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：設(shè)計實驗?zāi)康模?、掌握NT培養(yǎng)基母液及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的配制方法；2、理解和掌握酶解法分離原生質(zhì)體的原理及方法；3、理解和掌握原生質(zhì)體純化的方法；4、植物去壁細(xì)胞離體培養(yǎng)的形態(tài)觀察；5、了解影響原生質(zhì)體產(chǎn)量、活力和離體培養(yǎng)的因素。實驗內(nèi)容：1、配制NT培養(yǎng)基母液及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的；2、酶貯液、洗液的配制和分裝、滅菌；無菌苗的培育；3、選取外植體進(jìn)行無菌操作；不同消毒方法效果的比較；4、設(shè)計不同酶的組合及濃度進(jìn)行原生質(zhì)體的分離、純化；5、植物去壁細(xì)胞離體培養(yǎng)的形態(tài)觀察；6、考察滲透壓、酶液組成、pH值的影響作用；7、應(yīng)用生物統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行結(jié)果分析。主要儀器：量筒、萬分之一天平、容量瓶、滅菌鍋、超凈工作臺、倒置顯微鏡、顯微攝影系統(tǒng)、剪刀、鑷子、光照培養(yǎng)箱、搖床等。實驗二十二實驗編號：07210084-22實驗名稱：細(xì)胞融合技術(shù)實驗學(xué)時：5實驗類別：必做實驗性質(zhì)：設(shè)計實驗?zāi)康模?、理解融合的原理和意義。2、學(xué)習(xí)原生質(zhì)體的化學(xué)誘導(dǎo)融合方法。實驗內(nèi)容：1、親本原生質(zhì)體的制備；2、融合處理；3、融合劑的洗滌；4、顯微觀察；5、培養(yǎng)。主要儀器：剪刀、燒杯、鑷子、解剖刀、解剖鏡、超凈工作臺、光照培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、錐形瓶、培養(yǎng)皿等。實驗二十三實驗編號：07210084-23實驗名稱：小鼠細(xì)胞原代培養(yǎng)實驗學(xué)時：6實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)并掌握小鼠細(xì)胞在原代培養(yǎng)前的消毒方法，掌握小鼠細(xì)胞的機(jī)械切割和組織塊原代培養(yǎng)的方法。學(xué)習(xí)并能夠判定小鼠細(xì)胞生長好壞以及是否污染。實驗內(nèi)容：1、培養(yǎng)器皿的清洗與滅菌；2、原代培養(yǎng)前的小鼠消毒處理；3、細(xì)胞組織塊原代培養(yǎng)方法；4、原代培養(yǎng)細(xì)胞的觀察。主要儀器：儀器用品類：生化培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、試管、酒精燈、培養(yǎng)皿、青霉素小瓶、燒杯、培養(yǎng)瓶化學(xué)試劑類：無菌PBS培養(yǎng)液（加100單位/mL青霉素）、MEM+20%小牛血清培養(yǎng)液、75%酒精微生物類：20g左右小鼠的心、肝臟、腎、脾臟和性腺。實驗二十四實驗編號：07210084-24實驗名稱：小鼠細(xì)胞的傳代培養(yǎng)實驗學(xué)時：3實驗類別：必做實驗性質(zhì)：綜合實驗?zāi)康模赫莆找让赶?xì)胞傳代培養(yǎng)的原理；學(xué)習(xí)細(xì)胞傳代培養(yǎng)的實驗操作。實驗內(nèi)容：1、超凈工作臺和無菌室紫外殺菌處理；2、超凈工作臺中消毒處理所需用品；3、棄培養(yǎng)上清、緩沖溶液漂洗、酶解法消化細(xì)胞；4、加入細(xì)胞完全培