鍵合硅膠1409第1頁鍵合硅膠是借助化學(xué)反應(yīng)方法將不一樣有機(jī)基團(tuán)以共價(jià)鍵形式連接到硅膠表面硅醇基上。它含有良好色譜熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)性能。鍵合硅膠顆粒形狀依據(jù)基質(zhì)硅膠不一樣分球形和無定形。無定形含有更高柱效，但穩(wěn)定性和重現(xiàn)性不如球形填料，通常需更高操作壓力第2頁鍵合相分類極性鍵合硅膠，鍵合某種極性有機(jī)基團(tuán)。常見極性鍵合相有：氰基(-CN)、氨基(-NH2)和二醇基(DIOL)鍵合相非極性鍵合硅膠，在硅膠表面鍵合非極性或極性很小烴基。是最主要反相色譜固定相。主要有各種烷基(C1~C18)和苯基、多環(huán)芳烴等。第3頁分離中等極性和極性較強(qiáng)化合物可選擇極性鍵合相。分離非極性和極性較弱化合物可選擇非極性鍵合相短鏈烷基鍵合相能用于極性化合物分離，而苯基鍵合相適合用于分離芳香化合物。

第4頁極性鍵合相為永久性去活硅膠，是一個(gè)弱吸附劑含有均勻表面低化學(xué)吸附和催化活性。對各種化合物分離與硅膠相同，但保留值比硅膠低。極性鍵合相多采取非極性或弱極性溶劑形成正相色譜，保留值隨溶質(zhì)極性增加而增加，隨溶劑極性增加而降低?；旌衔镌跇O性鍵合相上分離主要是基于極性鍵合基團(tuán)與溶質(zhì)分子間氫鍵作用，極性強(qiáng)組分保留值較大。第5頁對于強(qiáng)極性化合物，極性鍵合相也能用于反相色譜。如，采取乙腈-水作為流動(dòng)相分離糖類或多肽類化合物。極性鍵合相分離選擇性決定于鍵合相種類、溶劑強(qiáng)度和樣品性質(zhì)。溶質(zhì)與固定相上極性基團(tuán)間作用力是決定色譜保留和分離選擇性首要原因。第6頁氰基鍵合相對雙鍵異構(gòu)體或含雙鍵數(shù)不等環(huán)狀化合物分離有很好選擇性。氨基鍵合相含有較強(qiáng)氫鍵結(jié)合能力，對一些多官能團(tuán)化合物如甾體、強(qiáng)心甙等有很好分離能力；氨基鍵合相上氨基能與糖類分子中羥基產(chǎn)生選擇性相互作用，故被廣泛用于糖類分析，但它不能用于分離羰基化合物，如甾酮、還原糖等，因?yàn)樗鼈冎g會(huì)發(fā)生反應(yīng)生成Schiff堿。二醇基鍵合相適合用于分離有機(jī)酸、甾體和蛋白質(zhì)。

第7頁正向色譜流動(dòng)相正相色譜慣用流動(dòng)相及其沖洗強(qiáng)度次序是：正己烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜異丙醇其中最慣用是正已烷，即使其價(jià)格較貴，但80％順、反和鄰位、對位異構(gòu)體依然要用正相色譜來進(jìn)行分離。第8頁反相鍵合相鍵合相烷基鏈長和鍵合量是影響色譜性能主要原因。如固定相樣品容量、柱效和分離選擇性等。普通認(rèn)為含有較長烷基鏈和較高鍵合量固定相對較大非極性溶質(zhì)分離選擇性比小分子溶質(zhì)選擇性好。鍵合烷基C6-C12之間，對小分子溶質(zhì)選擇性隨碳鏈增加而增加，C12以后選擇性趨于常數(shù)。第9頁短鏈烷基（C6、C8）硅烷因?yàn)轶w積小與比長鏈烷基覆蓋度高和較少殘余硅羥基，適于極性和離子性樣品分離。能使用酸性較強(qiáng)流動(dòng)相長鏈烷基（C16、C18、C22）等有較高碳含量和更加好疏水性，對各種類型分子機(jī)構(gòu)樣品有更強(qiáng)適應(yīng)能力非極性鍵合相樣品容量隨碳鏈增加而增加，從C4-C18柱容量增加近一倍。ODS鍵合相樣品容量約2mg/g與裸體硅膠相同。第10頁ODS(octadecylsilane)即十八烷基健合硅膠，因?yàn)楣潭ㄏ酁槭送榛?ODS)鍵合相，所以稱為ODS柱。這種填料在反相色譜中發(fā)揮著極為主要作用，它可完成高效液相色譜70～80％分析任務(wù)。是應(yīng)用最為廣泛非極性鍵合相，它對各種類型化合物都有很強(qiáng)適應(yīng)能力。一個(gè)慣用反相色譜柱。當(dāng)鍵合相表面濃度相同時(shí)，烷基鏈長增加，碳含量成百分比增加，溶質(zhì)保留值增加，固定相穩(wěn)定性也提升，對各種類型生物大分子有更強(qiáng)適應(yīng)能力，這是ODS固定相比其它烷基鍵合對應(yīng)用更普遍原因第11頁反相色譜采取極性溶劑及其混合物作為流動(dòng)相，溶劑極性越低洗脫能力越強(qiáng)，溶劑強(qiáng)度越高。水是反相色譜中強(qiáng)度最弱溶劑，也是使用最廣泛流動(dòng)相。反相色譜中，溶質(zhì)按其疏水性大小進(jìn)行分離，極性越大疏水性越小溶質(zhì)，越不易與非極性固定相結(jié)合，所以先被洗脫下來。反相色譜最慣用流動(dòng)相及其沖洗強(qiáng)度以下：H2O＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜丙醇＜異丙醇＜四氫呋喃最慣用流動(dòng)相組成是：“甲醇-H2O”和“乙腈-H2O”，因?yàn)橐译鎰《拘裕ǔ?yōu)先考慮“甲醇-H2O”流動(dòng)相。第12頁流動(dòng)相選擇流動(dòng)相選擇標(biāo)準(zhǔn)是：①樣品易溶，且溶解度盡可能大。②化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不損壞柱子。③不妨礙檢測器檢測，紫外波優(yōu)點(diǎn)無吸收。④粘度低，流動(dòng)性好。⑤易于從其中回收樣品。⑥無毒或低毒，易于操作。⑦易于制成高純度，即色譜純。⑧廢液易處理，不污染環(huán)境。第13頁HILIC親水色譜（HILIC）是一個(gè)用來改進(jìn)在反相色譜中保留較差強(qiáng)極性物質(zhì)保留行為色譜技術(shù)。它經(jīng)過采取強(qiáng)極性固定性，而且結(jié)合高百分比有機(jī)相/低百分比水相組成流動(dòng)相來實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)。第14頁HILIC分離機(jī)制

HILIC分離機(jī)理在當(dāng)前還存在著爭議，主要包含以下三個(gè)方面（1）分配機(jī)理（2）離子交換（3）偶極-偶極相互作用。更多試驗(yàn)現(xiàn)象則表明HILIC保留機(jī)理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等各種次級(jí)效應(yīng)，極難將其區(qū)分開第15頁HILIC色譜柱應(yīng)用范圍

普通反向色譜難以保留物質(zhì)。

HILIC對化合物保留原理：