1、流式細胞儀在臨床檢驗中的應用流式細胞儀在臨床檢驗中的應用1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用邁瑞流式介紹專家對邁瑞流式的評價目錄2流式細胞儀在臨床檢驗中的應用1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用邁瑞流式介紹專家對1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用邁瑞流式介紹專家對邁瑞流式的評價目錄3流式細胞儀在臨床檢驗中的應用1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用邁瑞流式介紹專家對流式細胞術的定義流式細胞術是以高能量激光照射高速流動狀態下經熒光標記的單細胞（生物顆粒），通過檢測產生的散射光和熒光素發射熒光的強度，從而對細胞進行定性或者定量檢測，實現對目的細胞分析或分選的技術。4流式細胞

2、儀在臨床檢驗中的應用流式細胞術的定義流式細胞術是以高能量激光照射高速流動狀態下經傳統流式檢測流程圖Nat Rev Immunol. ; 12(3): 191200.5流式細胞儀在臨床檢驗中的應用傳統流式檢測流程圖Nat Rev Immunol. ; 12FL4FL6FL5(PE-cy7)FL3(PerCP)FL2(PE)FL1(FITC)SS488/10530/30FS488/10585/40670LP785/60491/LP550LP645LP660/20785/60740LP488/10反光鏡tvFL6(APC-cy7)FL4(APC)反光鏡tvtvtvtvtvtvtvFSCSSCFL1F

3、L2FL3FL5流式細胞儀工作原理模擬圖6流式細胞儀在臨床檢驗中的應用FL4FL6FL5FL3FL2FL1SS488/10530/流式細胞儀與常用檢驗儀器的比較項目流式細胞儀血球儀生化分析儀免疫分析儀測試對象細胞，血清細胞(測量設置全部固定化）血清血清測試目標物理或化學性質（如細胞大小、內部復雜程度、DNA含量）；小分子物質（如抗原，抗體）物理或化學性質（如細胞大小、內部復雜程度、DNA含量）化學成分和一些小分子物質（如鉀、鈉、鈣、酶）小分子物質（如抗原、抗體、激素）測試原理流式細胞術+抗原抗體反應流式細胞術化學比色法抗原抗體反應計量百分比或絕對計數（如 %、*個/uL）；物質的量或定性判定（

4、L、UI/L、 陰性、陽pmol/m性）百分比和絕對計數（如 %、*個/L）物質的量（mol/L）物質的量或定性判定（L、UI/L、 陰性、陽pmol/m性）宏觀和微觀測量宏觀對象（細胞）上的微觀物質（抗原、看不見、摸不到）測定宏觀對象（細胞）上的宏觀物質（物理、復雜度、含量，看得見、摸得到）測量微觀物質（可溶性成分和一些小分子物質，看不見、摸不到）測量微觀物質（小分子物質，看不見、摸不到）輸出7流式細胞儀在臨床檢驗中的應用流式細胞儀與常用檢驗儀器的比較項目流式細胞儀血球儀生化分析儀生命科學領域的應用制藥工業藥物篩選，疫苗研究生物學研究遺傳，生殖，微生物，細胞生物，毒理，分子生物環境研究湖泊、

5、海洋生態研究臨床診斷、研究血液，腫瘤，藥理，免疫農業畜牧業選種，育種食品工業8流式細胞儀在臨床檢驗中的應用生命科學領域的應用制藥工業生物學研究環境研究臨床診斷、研究農flow cytometry +tumorflow cytometry + Transplantflow cytometry + Autoimmune diseasesflow cytometry+leukemiaflow cytometry總結可以預計未來流式細胞儀在臨床上的應用一定會有更大的發展！9流式細胞儀在臨床檢驗中的應用flow cytometry +tumorflow cyto1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用

6、邁瑞流式介紹專家對邁瑞流式的評價目錄10流式細胞儀在臨床檢驗中的應用1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用邁瑞流式介紹專家對流式細胞術在臨床檢驗中的應用淋巴細胞亞群分析HLA-B27檢測白血病免疫分型和MRD 急性白血病、 慢性淋巴增生性疾病（CLD) 淋巴瘤造血干細胞分析 造血干細胞絕對計數；陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH） CD55/CD59/FLAER檢測血小板相關分析 血小板計數、血小板免疫表型分析細胞周期與DNA倍體分析。2010年全國三級醫院檢驗科流式項目分布11流式細胞儀在臨床檢驗中的應用流式細胞術在臨床檢驗中的應用淋巴細胞亞群分析2010年全國三流式細胞術分析淋巴細胞亞群

7、的原理12流式細胞儀在臨床檢驗中的應用流式細胞術分析淋巴細胞亞群的原理12流式細胞儀在臨床檢驗中的TBNK淋巴細胞的檢測及臨床指導意義診斷與鑒別診斷疾病臨床分期治療效果評估指導臨床用藥。淋巴細胞分類百分比和絕對計數淋巴細胞種類特異性分子標記T淋巴細胞CD3+T輔助/誘導淋巴細胞CD3 + CD4 + T抑制/細胞毒淋巴細胞CD3 + CD8 + B淋巴細胞CD3-CD19+NK淋巴細胞CD3-CD16+CD56+13流式細胞儀在臨床檢驗中的應用TBNK淋巴細胞的檢測及臨床指導意義診斷與鑒別診斷淋巴細胞分TBNK淋巴細胞檢測在臨床科室中的應用流式在風濕免疫科的應用流式在腫瘤的應用流式在移植中心的

8、應用流式在血液科的應用流式在感染科的應用流式在心血管內科的應用流式在其他科室的應用流式在健康體檢的應用14流式細胞儀在臨床檢驗中的應用TBNK淋巴細胞檢測在臨床科室中的應用流式在風濕免疫科的應用胃癌及其不同臨床分期淋巴細胞亞群的變化15流式細胞儀在臨床檢驗中的應用胃癌及其不同臨床分期淋巴細胞亞群的變化15流式細胞儀在臨床檢腫瘤術后淋巴細胞亞群的變化16流式細胞儀在臨床檢驗中的應用腫瘤術后淋巴細胞亞群的變化16流式細胞儀在臨床檢驗中的應用乙型肝炎患者體內淋巴細胞亞群變化傳染病信息. 2011. 24. 206-21017流式細胞儀在臨床檢驗中的應用乙型肝炎患者體內淋巴細胞亞群變化傳染病信息. 2

9、011. 2（World J Gastroenterol. 2008,14:3710-8.）乙型肝炎患者體內淋巴細胞亞群變化18流式細胞儀在臨床檢驗中的應用（World J Gastroenterol. 2008,1HIV/AIDS病人的診斷與分期成人及15歲以上青少年HIV/AIDS的臨床分期及其分期標準臨床分期CD4細胞計數（個數/mm3）HIV抗體檢測HIV核酸檢測主要臨床表現一般持續時間期6個月12個月A期500或一過性降低或急性HIV感染綜合征或無癥狀1周3周B期500血清陽轉或無癥狀或PGL6個月12個月期6年7.5年A期350無癥狀或A組臨床表現B期200349B組臨床表現期20

10、0C組臨床表現23年（WS 293-2008 艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準）19流式細胞儀在臨床檢驗中的應用HIV/AIDS病人的診斷與分期成人及15歲以上青少年HIV肺部疾病的鑒別診斷疾病類型例數BALF淋巴細胞亞群（%）CD3+CD4+CD8+CD4/CD8結節病1491.85.6270.611.214.58.46.93.12IPF1694.53.9114.73.1278.47.920.20.04肺結核674.35.6142.31.9232.11.211.30.05肺部腫瘤767.510.424.35.2435.19.620.70.13（中華檢驗醫學雜志. 2000, 23: 214-2

11、16） 20流式細胞儀在臨床檢驗中的應用肺部疾病的鑒別診斷疾病類型例數BALF淋巴細胞亞群（%）CD利妥昔單抗治療效果監測(Arthritis Research & Therapy 2009,11；R131)利妥昔單抗(美羅華)：針對B細胞特異性抗原CD20的人-鼠嵌合單克隆抗體用于復發或耐藥的CD20 陽性濾泡性淋巴瘤是首個以B細胞為靶標治療類風濕性關節炎的藥物外周血B細胞百分比顯著下降而骨髓B細胞略下降21流式細胞儀在臨床檢驗中的應用利妥昔單抗治療效果監測(Arthritis Research移植病人免疫抑制劑治療指導A移植前1-2天；B移植后1-2天；C移植后4-5天；D移植后6-8天；

12、E移植后12-16天69例（50例沒有排斥，19例發生排斥）CD4在移植后有一個緩慢的下降過程CD4如果升高，預示發生排斥反應，需要調整免疫抑制藥的治療方案22流式細胞儀在臨床檢驗中的應用移植病人免疫抑制劑治療指導A移植前1-2天；B移植后1-2天（ Neuroimmunomodulation. 2014, 214:206-12.） 老年人身體狀況評估23流式細胞儀在臨床檢驗中的應用（ Neuroimmunomodulation. 2014,（ Clinical and Applied Immunology Reviews. 2002, 2:129139. ）慢性疲勞綜合征與淋巴亞群分析24流

13、式細胞儀在臨床檢驗中的應用（ Clinical and Applied Immunol（ Mechanisms of Ageing and De6elopment. 1998, 100: 121132.） 體育鍛煉對淋巴亞群的影響25流式細胞儀在臨床檢驗中的應用（ Mechanisms of Ageing and De6臨床需要監測免疫功能的常見疾病疾病類別內容原發性免疫缺陷B細胞免疫缺陷、T細胞免疫缺陷、聯合免疫缺陷繼發性免疫缺陷感染（HIV、CMV）免疫抑制劑的使用腫瘤代謝性疾病、營養不良、衰老自身免疫病SLE、RA血液腫瘤白血病/淋巴瘤其他手術（Kuby Immunology, 7th,

14、2013）26流式細胞儀在臨床檢驗中的應用臨床需要監測免疫功能的常見疾病疾病類別內容原發性免疫缺陷B細TBNK淋巴細胞亞群檢測CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APCCD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC27流式細胞儀在臨床檢驗中的應用TBNK淋巴細胞亞群檢測CD3-FITC/CD8-PE/CDHLA-B27檢測與脊柱關節病脊柱關節病（Spondyloarthritis, SpA）疾病HLA-B27陽性率(%)強直性脊椎炎90Reiters綜合癥7090銀屑病性關節炎 5060急性前葡萄膜炎4050潰瘍性結腸炎伴關節病510正

15、常人群 2728流式細胞儀在臨床檢驗中的應用HLA-B27檢測與脊柱關節病脊柱關節病（Spondyloa強直性脊柱炎強直性脊柱炎（AS）定義：一種慢性、進行性和炎性疾病，也是血清陰性脊柱關節病（SpA）中最具代表性的疾病。主要累計骶髂關節、脊柱、脊柱軟組織及四肢關節，表現為椎間盤纖維環和纖維環結締組織的骨化，椎間動關節和四肢關節滑膜的炎癥和增生，嚴重者可失去勞動能力。實驗室檢查： CRP升高血沉加快HLA-B27陽性類風濕因子陰性29流式細胞儀在臨床檢驗中的應用強直性脊柱炎強直性脊柱炎（AS）定義：實驗室檢查：29流式細HLA-B27檢測與AS輔助診斷1984年修訂的紐約標準；1991年歐洲脊

16、柱關節病研究組（ESSG）標準；2009年國際脊柱關節病評估工作組（ASAS）SpA診斷標準標準增加HLA-B27作為重要的診斷指標 Rudwaleit M. Curr Opin Rheumatol.2010,22:375-380）30流式細胞儀在臨床檢驗中的應用HLA-B27檢測與AS輔助診斷1984年修訂的紐約標準； HLA-B27檢測在AS中的診斷價值臨床意義：1.輔助疾病早期確診,早期治療;2.鑒別診斷癥狀相似的疾病;3.對高危人群進行預測;HLA-B27+HLA-B27+ 的ASHLA-B27- 的AS約5-10%的AS患者為HLA-B27- HLA-B27陽性率在我國為27%，AS

17、的患病率為0.1%，因此大部分HLA-B27+并不患AS AS患者中HLA-B27+達9095% 31流式細胞儀在臨床檢驗中的應用HLA-B27檢測在AS中的診斷價值臨床意義：HLA-B27不同HLA-B27檢測方法比較方法檢測手段優點缺點MLCT顯微鏡人工觀察經濟，無需昂貴的設備 操作步驟繁瑣、費時，且易受血清、補體、單抗的品質以及操作者主觀因素的影響，常出現誤判漏判。靈敏度、特異性和重復性均較差。目前，僅少數實驗室使用。ELISA酶標儀測定吸光度敏感性較高，設備簡單，可進行高通量檢測操作步驟較多，洗滌步驟復雜、要求嚴格，易污染導致假陽性，重復性一般。PCRDNA擴增后，電泳紫外分析敏感性、

18、特異性高實驗室常用方法，耗時長，需要提取DNA、PCR擴增后還需要電泳分析；容易污染，假陽性率高：空氣中DNA氣溶膠極易污染擴增產物，對環境要求高。FCM計算機數據分析操作步驟簡單、快捷，敏感性和特異性高 實驗室常用方法，需配備流式細胞儀；注意抗原/抗體交叉反應。32流式細胞儀在臨床檢驗中的應用不同HLA-B27檢測方法比較方法檢測手段優點缺點MLCT顯HLA-B27檢測的敏感性和特異性（ Rudwaleit M,Sieper J. Nat Rev Rheumatol.2012,8:262-268 ）與其他指標相比，HLA-B27在SpA鑒別和診斷上具更高的敏感性、特異性ParameterSe

19、nsitivity%SpecificityInflammatory back pain38-9576-100Heel pain (enthesitis)16-5289-96Peripheral arthritis26-6291-100Dactylitis12-2796-99Anterior uveitis10-2297-100Psoriasis1-1796IBD2-799Positive family history for AS, reactive arthritis, IBD, psoriasis, anterior uveitis7-3693-100Response to NSAIDs6

20、4-7775-85Elevated acute phase reactants (CRP)38-6967-100HLA-B2783-9691-96MRI of sacroiliac joints54-9383-10033流式細胞儀在臨床檢驗中的應用HLA-B27檢測的敏感性和特異性（ Rudwaleit MHLA-B27檢測配套試劑健康人（左）和強直性脊柱炎患者（右）的HLA-B27的檢測結果（上：同型對照，下：測試樣本）FITC-HLA-B27/PE-HLA-B7雙色34流式細胞儀在臨床檢驗中的應用HLA-B27檢測配套試劑FITC-HLA-B27/PE-H流式細胞儀在臨床檢驗中的應用培訓課

21、件邁瑞流式細胞儀及配套試劑BriCyte E6流式細胞儀及配套試劑36流式細胞儀在臨床檢驗中的應用邁瑞流式細胞儀及配套試劑BriCyte E6流式細胞儀及配套人性化設計降低臨床操作難度臨床常規項目全自動軟件雙向LIS連接全中文操作界面37流式細胞儀在臨床檢驗中的應用人性化設計降低臨床操作難度臨床常規項目全自動軟件37流式細1.選擇檢測項目2.自動進樣3.報告智能化自動設計自動分析軟件38流式細胞儀在臨床檢驗中的應用1.選擇檢測項目2.自動進樣3.報告智能化自動設計自動分析智能化自動檢測設計自動調節-準確、可靠臨床軟件TBNK淋巴細胞分析HLA-B27檢測電壓補償質控39流式細胞儀在臨床檢驗中的

22、應用智能化自動檢測設計自動調節-準確、可靠39流式細胞儀在臨床檢自動電壓調節40流式細胞儀在臨床檢驗中的應用自動電壓調節40流式細胞儀在臨床檢驗中的應用自動補償調節8.0041流式細胞儀在臨床檢驗中的應用自動補償調節8.0041流式細胞儀在臨床檢驗中的應用單平臺絕對計數無需內標微球內置高精度流量傳感器，精確測定樣本流體積，直接計算絕對計數；采用陶瓷泵負壓吸樣形成有效“雙閉環”，穩定控制樣本流；42流式細胞儀在臨床檢驗中的應用單平臺絕對計數無需內標微球內置高精度流量傳感器，精確測定樣本智能溫度控制 15到32無需調整光路全封閉防塵設計簡潔穩定-光學系統43流式細胞儀在臨床檢驗中的應用智能溫度控制

23、 全封閉防塵設計簡潔穩定-光學系統43流式細胞1275 mm試管1275 mm試管1.5mL、2mL微量離心管方便快捷-多種進樣方式44流式細胞儀在臨床檢驗中的應用1275 mm試管1275 mm試管1.5mL、2mL微機型BriCyte E6FC500Canto II外形尺寸*(mm，寬高深)500500550610978889910630610重量*(Kg)5585146自動進樣器重量(Kg)15-22氣源不需要需要需要穩壓電源不需要需要需要簡潔穩定45流式細胞儀在臨床檢驗中的應用機型BriCyte E6FC500Canto II外形尺寸*儀器性能：高分辨率BriCyte E6 檢測305

24、A八峰粒子PE50 MESF BD FACSCanto II檢測305A八峰粒子PE50 MESF46流式細胞儀在臨床檢驗中的應用儀器性能：高分辨率BriCyte E6 檢測305A八峰粒子淋巴細胞亞群分析臨床評估北京協和醫院北醫三院四川省人民醫院臨床評估病人；42例對照儀器：BCI FC500臨床評估病人；30例對照儀器：BD FACSCanto II臨床評估病人；34例對照儀器：BCI FC50047流式細胞儀在臨床檢驗中的應用淋巴細胞亞群分析臨床評估北京協和醫院北醫三院四川省人民醫院臨HLA-B27檢測臨床評估試驗儀器對照儀器合計陰性陽性陰性23023陽性077小計23730結果判讀標準

25、結論陽性符合率100.00%95%Pass陰性符合率100.00%95%Pass總體符合率100.00%95%PassKappa10.8Pass試驗儀器對照儀器合計陰性陽性陰性16016陽性01717小計161733結果判讀標準結論陽性符合率100.00%95%Pass陰性符合率100.00%95%Pass總體符合率100.00%95%PassKappa10.8Pass北醫三院四川省人民醫院臨床評估病人：30例對照儀器：BD FACSCanto II臨床評估病人；33例對照儀器：BCI FC50048流式細胞儀在臨床檢驗中的應用HLA-B27檢測臨床評估試驗儀器對照儀器合計陰性陽性陰性2項目BriCyte E6傳統流式細胞儀軟件界面全中文操作軟件，模塊化設計，可見即所得，兩小時掌握儀器操作英文界面，菜單式設計，需要長時間熟悉菜單功