1、第 第7頁 /共7頁 質量文件文件名稱檢驗方法驗證和確認管理規程編 碼 版本號00文件屬性 新訂； 修訂編寫部門質控部起 草 人起草日期 年 月 日審 核 人審核日期 年 月 日批 準 人批準日期 年 月 日頒發部門質保部執行日期 年 月 日分 發質保部、質控部目的：規范檢驗方法的確認與驗證。范圍：適用于檢驗方法確認與驗證。職責：質控部相關人員對此規程負責。內容：1.藥典方法或其它法定標準收載的檢驗方法應當進行確認，以確保檢驗數據準確、可靠。確認內容如下：1.1方法選擇性選擇適當的儀器、試劑(包括儀器型號、GC或HPLC色譜柱、流動相配比等)使供試品溶液中目標峰與雜質峰能較好地分開，并確保目標

2、峰中沒有其他雜質峰存在，必要時可采用二極管陣列檢測器或質譜檢測器對組分的單一性進行評價和確認。1.2系統適應性：1.2.1色譜柱的理論板數(n)用于評價色譜柱的分離效能。由于不同物質在同一色譜柱上的色譜行為不同，采用理論板數作為衡量柱效能的指標時，應指明測定物質，一般為待測組分或內標物質的理論板數。在規定的色譜條件下，注入供試品溶液或各品種項下規定的內標物質溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分峰或內標物質峰的保留時間tR(以分鐘或長度計，下同，但應取相同單位)和峰寬(W)或半高峰寬(Wh/2)，按n=16(tR/W)2或n=5.54(tR/Wh/2)2計算色譜柱的理論板數；或直接由色譜工作軟件計

3、算出色譜柱的理論板數。1.2.2分離度(R)用于評價待測組分與相鄰共存物或難分離物質之間的分離程度，是衡量色譜系統效能的關鍵指標。可以通過測定待測物質與已知雜質的分離度、也可以通過測定待測組分與某一添加的指標性成分(內標物質或其他難分離物質)的分離度，或將供試品或對照品用適當前方法降解，通過測定待測組分與某一降解產物的分離度舉對色譜系統進行評價與控制。無論是定性鑒別還是定量分析，均要求待測峰與其他峰、內標峰或特定的雜質對照峰之間有較好的分離度。除另有規定外，待測組分與相鄰共存物之間的分離度應大于1.5。分離度直接由色譜工作軟件計算出色譜峰的分離度或由下列公式進行計算： 或 式中：tR2為相鄰兩

4、峰中后一峰的保留時間;tR1為相鄰兩峰中前一峰的保留時間；W1、W2及W1,h/2、W2,h/2分別為此相鄰兩峰的峰寬，及半高峰寬。當對測定結果有異議時，色譜柱的理論板數(n)和分離度(R)均以峰寬(W)的計算結果為準。1.2.3重復性用于評價連續進樣中，色譜系統響應值的重復性能。采用外標法時，通常取各品種項下的對照品溶液，連續進樣5次，除另有規定外，其峰面積測量值的相對標準偏差應不大于2.0；采用內標法時，通常配制相當于80，100%和120的對照品溶液，加入規定量的內標溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別至少進樣2次，計算平均校正因子。其相對標準偏差應不大于2.0%。1.2.4拖尾因子(T)

5、用于評價色譜峰的對稱性。為保證分離效果和測量精度，應檢查待測峰的拖尾因子是否符合各品種項下的規定。色譜峰的拖尾因子直接由色譜工作軟件計算或按下列公式進行計算：式中：W0.05h為5峰高處的峰寬；d1為峰頂點至峰前沿之間的距離除另有規定外，T應不大于2.0。2.在出現以下幾種情況時，必須進行檢驗方法驗證：采用新的檢驗方法、檢驗方法需變更的、采用藥典及其它法定標準未收載的檢驗方法、法規規定的其他需要驗證的檢驗方法。2.1驗證涉及的方法2.1.1含量的氣相或液相的測定方法。2.1.2清潔驗證的檢驗方法：應當采用經驗證的靈敏度高的檢驗方法檢測殘留物或污染物。每種方法的的檢測限必須足夠靈敏，能檢測殘留物

6、的限度標準。應當確定檢驗方法可達到的回收率。殘留物的標準應當切實可行，并根據最有害的殘留物來確定，可根據原藥材的藥理、毒理或生理活性來確定，也可根據原藥材中最有害的組分來確定。2.1.3穩定性指示方法2.1.4其他必要的檢驗方法2.2驗證涉及的內容如下表：項目內容鑒別雜質測定含量測定及溶出量測定定量限度專屬性+精密度重復性-+-+中間精密度- +- +線性-+-+范圍-+-+準確度-+-+檢測限- -+-定量限-+-耐用性+穩定性-+-+注：“+”為需要驗證的內容；“”已有重現性驗證，不需要驗證中間精密度；“”如一種方法不夠專屬性，可用其他檢驗方法予以補充；“”視具體情況予以驗證。2.2.1選

7、擇性(或專屬性)選擇適當的儀器、試劑(包括儀器型號、GC或HPLC色譜柱、流動相配比等)使供試品溶液中目標峰與雜質峰能較好地分開，并確保目標峰中沒有其他雜質峰存在，必要時可采用二極管陣列檢測器或質譜檢測器對組分的單一性進行評價和確認。2.2.2精密度2.2.2.1系統精密度通過對單個測定值與平均值之間的偏差程度來衡量系統的誤差。對同一均勻的樣品溶液或標準品溶液，連續重復進樣六次，記錄每次進樣后各組分的響應值、峰面積或峰高，計算相對標準偏差(RSD)。2.2.2.2方法精密度通過測定樣品含量與真值(平均值)的偏差程度來衡量樣品制備過程(包括稱量、稀釋)中的誤差。分別對同一批號的樣品稱量六次，按含

8、量測定方法測定其含量，計算其相對標準偏差(RSD)，除另有規定外通常RSD2.0%。2.2.2.3中間精密度按驗證確定的方法，同一人用同一儀器檢測三批樣品，每批間隔24小時以上，測定一次，共測定三次。或由兩人分別使用不同的儀器檢測同三批樣品。2.2.3方法的線性范圍2.2.3.1在含量測定濃度的50%150%選擇五個以上(含五個)不同的濃度點，每一個濃度需測定三次，記錄各對應濃度下的響應信號(峰高、峰面積或峰面積的比值)，以衡量樣品量與檢測器響應信號間的線性對應關系。2.2.3.2接受標準：相關系數r0.991.00。2.2.4方法的準確度衡量該方法的實測結果與真實值的吻合程度，即方法的回收率

9、。取已知濃度的樣品(濃度范圍為含量測定濃度的80%、100%、120%)各三份，每份進樣測定三次，計算該方法的百分回收率。2.2.5檢測限儀器能檢測到樣品中各組分的最低檢測濃度，不需定量。2.2.5.1色譜類儀器在儀器系統性實驗符合檢測要求的條件下，測定三次空白樣品，洗脫時間需用覆蓋整個樣品中所有組分的流出。計算平均噪聲水平。根據產品檢驗規程規定的檢測濃度配制梯度濃度，單針進樣。當信噪比為3:1或2:1，確定該濃度為待確定的檢測限。將該濃度溶液重復進樣三次，若三次所得圖譜的信噪比均為3:1或2:1，則確定該濃度為檢測限。2.2.5.2光譜類儀器在儀器系統性實驗符合檢測要求的條件下，把3倍空白值

10、的標準偏差(測定次數n20)相對應的質量或濃度稱為檢出限。2.2.6定量限能夠重復的、準確的測量峰面積(相當于供分析物)的進樣量。2.2.6.1色譜類儀器色譜峰峰高等于噪聲高的10倍。按檢測限方法測定儀器的平均噪聲，按檢測限操作方法操作，將按信噪比為10:1的濃度定為定量限。2.2.6.2光譜類儀器在儀器系統性實驗符合檢測要求的條件下，把10倍空白值的標準偏差(測定次數n20)相對應的質量或濃度稱為檢出限。2.2.7方法耐用性(僅在新開發的方法的第一次驗證時進行)HPLC法，方法耐用性要求進行考察的變動因素包括：流動相比例、流動相pH值、不同的色譜柱及柱溫等；GC法，方法耐用性要求進行考察的變動因素包括：不同的色譜柱、柱溫、檢測器和載氣流速(或柱壓)等，主要考察雜質峰與目標峰的分離度能否達到要求，并確保目標峰中沒有干擾峰存在，同時觀察雜質峰的出峰順序是否發生變化。2.2.8溶液穩定性將配制好的溶液間隔一定的時間(24小時內)分別進樣，比較含量目標峰面積的變化。3.進行檢驗方法驗證前，由驗證部門進行驗證的立項申請并經驗證委員會批準后，進行驗證方案的編制，在得到驗證委員會的審批后方可付諸實施；驗證方案應包括驗證的目的、引用的標準、檢驗方法、驗證項目、可接受標準、樣品的測定、驗證評價、結論要求等內容。4.進行相關的方法驗證后，驗證部門應出具相應的驗證報告。5.由驗證小組