1、湖南新寧二中生物組生物選修31.2基因工程的基本操作程序?qū)ｎ}1 基因工程湖南新寧二中生物組目的基因的檢測與鑒定基因工程的基本操作程序的步驟：目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞湖南新寧二中生物組閱讀與思考1、什么是目的基因？2、獲取目的基因的方法有哪些？其操作過程分別是怎樣的？一、目的基因的獲取1、目的基因概念：主要指的是編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。2、目的基因獲取方法：從基因文庫中獲取目的基因利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因化學(xué)方法直接人工合成湖南新寧二中生物組從基因文庫中獲取目的基因基因文庫： 將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體

2、中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫。湖南新寧二中生物組基因文庫 基因組文庫部分基因文庫（如cDNA文庫）基因文庫的構(gòu)建過程湖南新寧二中生物組基因組文庫限制酶供體細(xì)胞的全部DNA大量DNA片段拼接到載體上導(dǎo)入受體細(xì)胞擴(kuò)增基因文庫的構(gòu)建過程湖南新寧二中生物組mRNA單鏈DNA 雙鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄cDNA文庫湖南新寧二中生物組如何從基因文庫中找到所需要的基因？依據(jù)目的基因的有關(guān)信息。如：根據(jù)基因的核苷酸序列 基因在染色體上的位置 基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性。從基因文庫中獲取目的基因利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因PCR的全稱： 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR的原理： DNA復(fù)

3、制 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提條件：要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。湖南新寧二中生物組利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因湖南新寧二中生物組模板原料引物酶控制溫度目的基因DNA四種脫氧核苷酸如單鏈DNA分子片段耐熱的DNA聚合酶PCR儀自動調(diào)控PCR的條件：湖南新寧二中生物組PCR的過程：利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因變性(90-95)復(fù)性(55-60)延伸(70-75)湖南新寧二中生物組用化學(xué)方法直接人工合成條件：基因較小，核苷酸序列已知。湖南新寧二中生物組二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心用切目的基因相同的限制性內(nèi)切酶切割質(zhì)粒湖南新寧二中生物組二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心湖南新寧二中生物組二、基因表達(dá)載體的

4、構(gòu)建核心目的基因湖南新寧二中生物組二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心1、基因表達(dá)載體的組成目的基因啟動子:終止子:標(biāo)記基因等一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段。位于基因的首端。一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段。位于基因的尾端。啟動子的作用：湖南新寧二中生物組二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心終止子作用：使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止。標(biāo)記基因作用： 是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基 因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來，如青霉素基因。 是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)。湖南新寧二中生物組二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建目的：a.使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代。b.使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。三、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 1、什么是轉(zhuǎn)化？ 2、目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法是什么？具體過程是怎樣的？ 3、目的