1、課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)課題目的分離分解尿素的細(xì)菌對(duì)分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)常見的分解尿素的微生物芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。一、分離分解尿素的細(xì)菌在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其它種類微生物生長的培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基一種培養(yǎng)基依據(jù)某些微生物特殊營養(yǎng)需求設(shè)計(jì)的實(shí)例：缺乏氮源的選擇培養(yǎng)基可用來分離_微生物缺乏碳源的選擇培養(yǎng)基可用來分離_微生物一、分離分解尿素的細(xì)菌固氮自養(yǎng)另一種培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，這種化學(xué)物質(zhì)沒有營養(yǎng)作用，對(duì)所需分離的微生物無害，但可以抑制或殺死其他微生物。在培養(yǎng)

2、基加入青霉素、四環(huán)素或鏈霉素?？梢砸种萍?xì)菌和放線菌的生長，而將酵母菌和霉菌分離出來。一、分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)例：培養(yǎng)基配方一KH2PO43.0gNaH2PO41.4gMgSO4.7H2O0.2g葡萄糖10.0gNaNO32.0g瓊脂15.0g培養(yǎng)基配方二KH2PO43.0gNaNO32.0gMgSO4.7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素3.0g瓊脂15.0g培養(yǎng)基配方三KH2PO41.4g葡萄糖10.0gNaH2PO42.1g尿素1.0gMgSO4.7H2O0.2g瓊脂15.0g從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素培養(yǎng)基配方三

3、KH2PO41.4g葡萄糖10.0gNaH2PO42.1g尿素1.0gMgSO4.7H2O0.2g瓊脂15.0g用選擇培養(yǎng)基可將分解尿素的細(xì)菌從土壤中分離出來，怎樣才能說明選擇培養(yǎng)基確實(shí)起到了選擇的作用？討論設(shè)置對(duì)照稀釋涂布平板法 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。也就是說平板上一個(gè)菌落代表一個(gè)活菌。（也叫活菌計(jì)數(shù)法） 二、分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)原理：二、分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)101二、分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)稀釋涂布平板法土壤稀釋微生物種類土壤稀釋倍數(shù)目標(biāo)分離土壤中細(xì)菌104、 105、106分離土壤中放線菌103、 104、105分離土壤中真菌102、

4、 103、104分離土壤中尿素細(xì)菌104、 105、 106、107平板上的菌落數(shù)應(yīng)為30300個(gè)，便于準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。1g土樣9ml無菌水132456二、分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)土壤稀釋1g土樣 9ml 無菌水涂布接種二、分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù) 第一位同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目為230。第二位同學(xué)在該濃度下涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為：21、212、256。該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎？如果需要如何改進(jìn)？?jī)晌煌瑢W(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106倍的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果：二、分解尿素的細(xì)菌

5、的計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)記錄第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。二、分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要至少涂布三個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)。二、分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)二、分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)有一位同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為268，那么每毫升樣品中的菌

6、落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2毫升）多少？每毫升樣品中的菌落數(shù)(C/V) MC:代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)V:代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積M：稀釋的倍數(shù)三、操作步驟1、土壤取樣2、樣品稀釋3、取樣涂布4、培養(yǎng)與觀察過程：三、操作步驟細(xì)菌適宜在酸度接近中性的潮濕土壤中生長。鏟去土壤表層目的從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。1、土壤取樣2、樣品稀釋三、操作步驟通常選用一定稀釋范圍的樣品進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。3、取樣涂布：按照由104106稀釋度的順序分別吸取0.1 mL進(jìn)行平板涂布操作，每3個(gè)一組并分別標(biāo)號(hào)。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。三、操作步驟4、微生物的培養(yǎng)與觀察：細(xì)菌：30370C的溫度下培養(yǎng)12d放線菌：25280C的溫度下培養(yǎng)57d霉菌：25280C的溫度下培養(yǎng)34d我們可以每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目培養(yǎng)溫度及時(shí)間觀察過程三、操作步驟在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、溫度、及培養(yǎng)時(shí)間）同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的相同的菌落特征，