1、關于纖維素微生物的分離第一張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月1、纖維素在生物圈的分布狀況？2、纖維素酶的組成及作用？纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質。植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產物。纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即CX酶、 C1酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。一、纖維素和纖維素酶第二張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月例：下列作物中，纖維素含量最高的是（ ）A、棉花 B、亞麻 C、秸稈 D、朩材A、棉花例：微生物體內能使纖維素分解成纖維二糖的酶是 。C1酶

2、和CX酶第三張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月例：要將能分解纖維素的細菌從土壤中分離出 來，應將它們接種在（ ）A、加入指示劑的鑒別培養基上B、含有蛋白胨的固體培養基上C、只含纖維素粉而無其他碳源的選擇培養基上D、含四大營養要素的培養基上第四張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月纖維素1、培養基：以_為惟一碳源的選擇培養基。纖維素酶纖維素分解菌紅色消失，出現透明圈剛果紅纖維素紅色復合物剛果紅染色法2、鑒別篩選的原理：二、纖維素分解菌的篩選 即：可根據是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。第五張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月例:在加入剛果紅的培養基中會出現透明圈，產生 的透明圈

3、是（ ）A、剛果紅與纖維素形成的復合物B、剛果紅與纖維二糖形成的復合物C、纖維素分解后形成的葡萄糖導致的D、以纖維素分解菌為中心形成的第六張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月課題2是將土樣成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮 源的選擇性培養基上，直接分離得到菌落。本課題通過選擇培養，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養基上。其他步驟基本一致.1、本實驗的流程與課題2中的實驗流程有哪些異同？三、實驗操作土壤取樣選擇培養梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上挑選產生透明圈的菌落第七張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月三、實驗操作土壤取樣選擇培養梯度稀釋將樣品涂布到鑒別

4、纖維素分解菌的培養基上挑選產生透明圈的菌落2.為什么要在富含纖維素的環境中尋找纖維素分解菌？這樣的環境中，纖維素分解菌的含量相對高第八張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月三、實驗操作土壤取樣選擇培養梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上挑選產生透明圈的菌落將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實際上是人工設置纖維素分解菌生存的適宜環境。一般應將紙埋于深約10 cm左右腐殖土壤中。3.將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應該埋 進土壤多深？第九張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月三、實驗操作土壤取樣選擇培養梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上挑選產生透明圈的菌

5、落 目的？“選擇培養”是否需要，應根據樣品中目的菌株數量的多少來確定。思考：為什么選擇培養能夠“濃縮”所需的微生物？選擇培養使那些能夠適應這種營養條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應這種營養條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用.第十張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月選擇培養參照課本29頁旁欄中的比例配置，回答下列問題：a、旁欄中的配方是液體培養基還是固體培養基？為什么？b、這個培養基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，是 如何進行選擇的？ c、你能否設計一個對照實驗，說明選擇培養基的作用是液體培養基，原因是配方中無凝固劑有選擇作用，本配方中以纖維素為唯一碳源，所以能分

6、解纖維素的微生物可以大量繁殖.用牛肉膏蛋白胨培養基與之對照第十一張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月剛果紅染色法方法一：先培養微生物，再加入剛果紅進行顏色反應方法二：在倒平板時就加入剛果紅染色法 優點 缺點方法一方法二操作繁瑣，剛果紅會使菌落之間發生混雜操作簡便，不存在菌落混雜問題透明圈的產生基本上是纖維素分解菌的作用透明圈的產生可能是產淀粉酶的細菌，也可能是能降解色素的細菌的作用第十二張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月挑選產生透明圈的菌落 參照課本剛果紅染色法，挑選產生透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落單菌落挑取第十三張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月為確定得到的菌

7、是否是纖維素分解菌，還需進行發酵產纖維素酶的實驗。纖維素酶的發酵方法有液體發酵和固體發酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定。課題延伸第十四張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月例：用剛果紅染色時，加入剛果紅應在（ ）制備培養基時 梯度稀釋時 倒平板時涂布時 長出菌落時 A、 B、 C、 D、 第十五張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月例：分離土壤中纖維素分解菌用到的方法是稀釋倒平板法 涂布平板法 單細胞挑取法 選擇培養基分離A、 B、 C、 D、第十六張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月例：分離土壤中纖維素分解菌的實驗過程中，

8、操作有誤 的是（ ） A、經選擇培養后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌 的培養基上 B、選擇培養這一步可以省略，但纖維素分解菌少 C、經稀釋培養后，用剛果紅染色 D、對照組可用同樣量的培養液涂布到不含纖維素 的培養基上第十七張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月接種微生物常用的方法有：平板劃線法稀釋涂布平板法分離并統計纖維素分解菌的實驗中， 宜采用 ， 原因是：稀釋涂布平板法平板劃線法難以根據稀釋體積計算每克樣品中的細菌數量 第十八張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月1纖維素分解菌的選擇培養基為液體培養基，因培養基中無凝固劑，利用液體選擇培養基以增加纖維素分解菌的濃度。2為確定得到的菌是

9、否是纖維素分解菌，還需進行發酵產纖維素酶的實驗。纖維素酶的發酵方法有液體發酵和固體發酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定。3流程中的“選擇培養”是否需要，應根據樣品中目的菌株數量的多少來確定。第十九張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月第二十張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月四、結果分析與評價（一）培養基的制作是否合格以及選擇培養基是否篩選出菌落（二）分離的結果是否一致 設置對照，若對照的培養基在培養過程中無菌落生長則說明培養基制作合格。如果觀察到產生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。如果不同，分析產生不同結果的原

10、因。 由于在土壤中細菌的數量遠遠高于真菌和放線菌的數量，因此最容易分離得到的是細菌。但由于所取土樣的環境不同，學生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結果。第二十一張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月五、課題延伸 本課題對分解纖維素的微生物進行了初步的篩選，但是這只是分離純化的第一步。為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進行發酵產纖維素酶的實驗，纖維素酶的測定方法一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量的測定。31為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進行 發酵產纖維素酶 實驗，纖維素酶的發酵方法有 液體 發酵和 固體 發酵。32纖維素酶測定方法是對纖維素酶分解濾紙等纖維素

11、所產生的 葡萄糖 含量進行定量測定。第二十二張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月再 見！第二十三張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月1纖維素分解菌的選擇培養基為液體培養基，因培養基中無凝固劑，利用液體選擇培養基以增加纖維素分解菌的濃度。2為確定得到的菌是否是纖維素分解菌，還需進行發酵產纖維素酶的實驗。纖維素酶的發酵方法有液體發酵和固體發酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定。3流程中的“選擇培養”是否需要，應根據樣品中目的菌株數量的多少來確定。第二十四張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月(1)方案土壤取樣選擇培養梯度稀釋將樣品

12、涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上挑選產生透明圈的菌落。(2)選擇培養的目的：增加纖維素分解菌的濃度，確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。(3)涉及到的微生物技術主要有：培養基的制作、無菌操作技術、稀釋涂布平板法、選擇培養基的作用、土壤取樣等。第二十五張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月土壤取樣取樣的環境是怎樣的，作出這種選擇的理由是什么？ 選擇纖維素豐富的環境，如樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。 生物與環境的互相依存關系，在富含纖維素的環境中纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環境第二十六張，PPT共三十一頁，創作于2022年6

13、月梯度稀釋 按照課題1 的稀釋操作方法，將選擇培養后的培養基進行等比稀釋，稀釋最大倍數到106第二十七張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月剛果紅染色法方法一：先培養微生物，再加入剛果紅進行顏色反應方法二：在倒平板時就加入剛果紅思考：這兩種方法各有哪些優點與不足 方法一 缺點是操作煩瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發 生混雜；優點是這樣顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用 方法二 優點是操作簡便，不存在菌落混雜問題缺點一是由于培養基中還含有淀粉類物質，可以使能產生淀粉酶的微生物出現假陽性反應；缺點二有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養過程中會降解剛果紅，形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區分.第二十八張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上1、制備培養基:參照旁欄中的比例2、涂布平板：將稀釋度為104106的菌懸液各取0.1ml涂布在培養基上，30倒置培養第二十九張，PPT共三十一頁，創作于2022年6月3、操作方法：將土樣加入裝有30ml