1、咖啡因的檢測1內容提要咖啡因簡介咖啡因的檢測方法 碘量法 HPLC法 近紅外光譜分析法 毛細管電泳法2 咖啡因的簡介咖啡因（Caffeine ）是從茶葉、咖啡果中提煉出來的一種生物堿，適度地使用有祛除疲勞、興奮神經的作用，臨床上用于治療神經衰弱和昏迷復蘇。 它的化學式是C8H10N4O2。它的化學名是1,3,7-三甲基黃嘌呤或3,7-二氫-1,3,7三甲基-1H-嘌呤-2,6-二酮。 3性質描述 本品含一分子結晶水，為白色或帶極微黃綠色，柔韌有絲光的針狀結晶，升華精制得六角形棱柱狀晶體。熔點238，178升華。 極易溶于吡咯及含4%水的四氫呋喃。溶于乙酸乙酯，微溶于石油醚。 4檢測方法碘量法H

2、PLC 法近紅外光譜分析法毛細管電泳法 5碘量法 基本原理 ：碘量法是利用I2的氧化性和I-的還原性進行滴定的分析方法 。測定步驟（間接碘量法）：咖啡因檢測（間接碘量法）：稱取咖啡因，加稀硫酸，濾過加碘液，稀釋，搖勻量取續濾液，用硫代硫酸鈉液滴定至近終點，加淀粉指示液，繼續滴至藍色消失將滴定的結果用空白試驗校正6HPLC法 優點： HPLC即高效液相色譜法，是以液體作為流動相，并采用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術。是20世紀60年代末在經典液相色譜的基礎上發展起來的一種現代色譜分析方法。具有樣品適用范圍廣，分離效率高，檢測靈敏度高，分析速度快，樣品回收方便并易將分析放大為制備分離等特點。

3、7HPLC法 。 基本原理：1、就分離原理而言，HPLC與經典柱層析（色譜）沒有本質區別，一般是在柱狀的固定相（層析柱）上加入待分離的樣品，然后用流動相淋洗，根據樣品組分與固定相及流動相作用力不同，在通過層析柱的過程中，不同的組分得到了分離。2、 高效液相色譜法的分類（按照分離機理）：（1）吸附色譜。（2）分配色譜。（3）離子交換色譜。（IEC）（4）體積排阻色譜。（SEC）（5）親和色譜。（AC）8HPLC 法HPLC高效液相色譜儀工作原理：（1）高壓輸液系統。（2）進樣系統。（3）色譜柱系統。（4）檢測系統。 數據記錄儀 高效液相色譜儀 液相色譜紫外檢測器9 法測定步驟 首先確定色譜條件，

4、包括色譜柱的選擇，流動相、流速、檢測波長、柱溫及進樣量等。10（1）繪制標準 工作曲線（2）精密度試驗與回收率試驗（3）實際樣品含量測定法測定步驟11近紅外光譜分析法 基本原理： 采用近紅外光譜分析技術對咖啡因進行了光譜及定量分析 , 原始光譜表明咖啡因在近紅外波段有著很強且較為明顯的吸收峰。通過對樣品的漫反射原始吸光度光譜進行導數、散射校正及相關分析更清晰地給出了咖啡因在近紅外光譜波段的光譜特性 , 為建立快速穩健的定標模型創造了條件。12 近紅外法使用儀器13 近紅外光譜分析法測定14毛細管電泳法 優點： 毛細管電泳法技術（CE）是近年來發展起來的一種液相分離技術,具有高效、快速、靈敏、低

5、耗,樣品需要量少的特點，在20世紀80年代后期迅速發展起來。基本原理：電滲流現象：玻璃表面存在硅羥基, pH3時, 形成雙電層，在高電場的作用下引起柱中的溶液整體向負極移動。電泳現象： 帶電離子在電場作用下的遷移。電滲流比電泳淌度大一個數量級。15毛細管電泳法 。 儀器的基本構成： 一個高壓電源，一個檢測器， 一截毛細管。定量測量原理：在檢測器的線性范圍內，響應值（峰面積或峰高）與樣品濃度成正比 。引入內標物后濃度換算公式：16毛細管電泳法 。 對咖啡因的檢測：（以王洪杰等人毛細管電泳法同時測定4 種食品添加劑的試驗為例 ）圖1 4 種添加劑的HPCE 分離注:1 - 咖啡因;2 - 焦性沒食子酸(內標物) ; 3 - 山梨酸;4 - 苯甲酸;5 - 糖精摘自毛細管電泳法同時測定4 種食品添加劑解放軍預防醫學雜志2007 年6 月第25 卷第3 期同時測定多種物質含量！“4 種添加劑達到基線分離,在3 min 內完成測定。”快速！17毛細管電泳法 。 具體方法：1試驗條件的選擇先后進行了4 組緩沖溶液濃度（硼砂+ SDS）的測定，選擇最佳試驗條件使4 種添加劑的圖譜在短時間內達到基線分離。2 添加劑的分離 進樣及輸出信號圖譜3 毛細管