1、卡莫氟軟膠囊（規格：50mg） （二）藥學研究資料（資料項目10） 質量研究工作的試驗資料及文獻資料一、 質量研究樣品來源1、卡莫氟軟膠囊；規格: 50mg。批號理論產量（萬粒）實際產量（萬粒）06050110.950605020.930605030.89三批中試樣品均在本公司符合GMP要求的車間生產制備。2、卡莫氟對照品：中國藥品生物制品檢定所，規格：50mg，批號：100352-200301。二、質量研究本品質量研究主要參照卡莫氟片質量標準（中國藥典2005年版二部“卡莫氟片”）進行研究。1、性狀 取本品三批檢查，結果見表10-1。表10-1 外觀性狀檢查結果批號0605010605020

2、60503性狀內容物為微黃色乳狀混懸液體內容物為微黃色乳狀混懸液體內容物為微黃色乳狀混懸液體結論：本品三批性狀描述為：內容物為微黃色乳狀混懸液。 2、鑒別 2.1鑒別（1）：取三氧化鉻的飽和硫酸溶液約1ml，置小試管中，轉動試管，溶液應能均勻涂于管壁，加本品內容物適量（約相當于卡莫氟10mg），微熱，轉動試管，溶液應不能再均勻涂于管壁，而類似油垢存在于管壁。 方法的建立：取本品三批內容物適量（約相當于卡莫氟10mg），照上述方法依法操作，結果顯相同現象；另取空白輔料適量，照上述方法依法操作，無此現象。2.2鑒別（2）：在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保

3、留時間一致。方法的建立：取本品三批依含量測定項下方法制成供試品溶液，取卡莫氟對照品依含量測定項下方法制成對照品溶液，照高效液相色譜法（中國藥典2005年版二部附錄D）測定。另取空白輔料適量，制成空白輔料溶液，同法測定。結果表10-2。表10-2 高效液相色譜鑒別結果批號060501060502060503空白輔料保留時間與對照品保留時間一致無干擾結果表明，三批供試品的高效液相色譜主峰與對照品保留時間一致，且空白輔料不影響主藥的鑒別。3、檢查3.1溶出度 本品的溶出度測定方法參照卡莫氟片質量標準(中國藥典2005年版二部),并進行了質量研究。3.1.1 溶出介質的選擇 由于0.1mol/L 鹽酸

4、溶液接近胃液，卡莫氟在乙醇中微溶，采用含不同乙醇量的0.1mol/L鹽酸溶液中(250ml)對卡莫氟(12.5mg)進行溶解觀察，并稀釋制成每1ml中含有10g的溶液分別測吸光度A。在吸光度保持穩定的情況下，含醇量越低越能與生理狀態相對應。結果表明：以含乙醇20%的0.1mol/L鹽酸溶液作為溶出介質最佳。3.1.2 檢測波長的確定 精密稱取經五氧化二磷干燥器減壓干燥至恒重的卡莫氟原料約25mg，以含乙醇20% 的0.1mol/L鹽酸溶液溶解于250ml容量瓶中，精密吸取5ml置50ml容量瓶中，以0.1mol/L鹽酸的溶液稀釋至刻度，搖勻，此溶液在波長258nm處有最大吸收，空白溶液此處無吸

5、收干擾。選用258nm 為測定波長。3.1.3 濃度與吸收的線性關系 精密稱取干燥至恒重的卡莫氟原料25mg置250ml容量瓶中，加50ml乙醇溶解后加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度搖勻。分別吸取1、2、3、4、5ml置25ml容量瓶中各加0.1mol/L鹽酸溶液至刻度搖勻，于258nm 波長處測定吸光度A，求得回歸方程為：A= 0.0453C -0.0029 (r= 0.9999)。圖10-1 濃度與吸光度線性關系曲線圖3.1.4 穩定性試驗配制卡莫氟高低二濃度(5g/ml、10g/m1)溶液兩組，室溫放置，分別經0.5、l、2、4、8小時于258nm波長處測定吸光度，表明卡莫氟在含20

6、% 乙醇的0.1mol/L鹽酸溶液中能保持穩定。3.1.5 回收率試驗 精密稱取干燥至恒重的卡莫氟約25mg，輔料約300mg于100ml容量瓶中加含20% 乙醇的0.1mol/L鹽酸溶液適量，充分溶解后再加至刻度，搖勻，經0.45m濾膜過濾，取續濾液，分別取1ml置50ml和25ml容量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度搖勻得5g/ml和10g/ml溶液。取卡莫氟原料25.0 mg同法制備于258nm波長處測定吸光度A。求得平均回收率為99.49% ，RSD 為0.33% 。3.1.6 溶出曲線試驗 樣品：卡莫氟軟膠囊（批號：060501）；取經超聲儀脫氣處理含20%乙醇的0.lmo

7、l/l 鹽酸液1000ml作溶出介質，采用RCZ一6B型溶出度儀，恒溫至37±0.3 ，降下轉籃，當樣品與介質接觸計時，轉速100轉/分，分別在5、l0、30、45、60、90分鐘用針筒式微膜過濾器取樣7ml(同時補充等量等溫介質)，精密吸取5ml置25ml容量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度搖勻，另取經五氧化二磷干燥至恒重的卡莫氟對照品適量，精密稱定，加少量乙醇使溶解并用上述溶劑定量稀釋制成每1ml中含有8g的溶液。取上述兩種溶液，于258nm 波長處測定吸光度A。測定結果并繪制溶出曲線圖如下。圖10-2 卡莫氟軟膠囊溶出曲線圖方法：取本品，照溶出度測定法（中國藥典200

8、5年版二部附錄C第一法），以20%乙醇的0.lmol/L 鹽酸液1000ml為溶劑，轉速為每分鐘100轉，依法操作。經60分鐘時，取溶液適量濾過，精密量取續濾液5ml，置25ml量瓶中，用上述溶劑稀釋至刻度，搖勻；另取經五氧化二磷干燥至恒重的卡莫氟對照品適量，精密稱定，加少量乙醇使溶解并用上述溶劑定量稀釋制成每1ml中含有8g的溶液。取上述兩種溶液，照分光光度法（中國藥典2005年版二部附錄 A），在258nm的波長處分別測定吸光度，計算出每粒的溶出量。限度為標示量的70%，應符合規定。3.1.3溶出度檢查測定結果取本品三批進行溶出度檢查，依法測定，結果見表10-3。表10-3 溶出度檢查結果

9、批 號1(%)2(%)3(%)4(%)5(%)6(%)平均值%060501100.591.33100.7101.797.6799.5598.6060502101.098.8499.7897.4398.3798.1498.906050399.3199.7896.7398.1498.37100.598.8本品三批溶出度檢查結果均符合規定，本品處方及生產工藝是合適的。3.2崩解時限：取本品三批樣品照（中國藥典2005年版二部附錄X A）崩解時限檢查法依法測定。檢查結果如表10-4。表10-4 崩解時限檢查結果批 號060501060502060503崩解時間（min）151515試驗結果表明，本品崩

10、解時限基本一致，三批均符合質量標準。3.3裝量差異取本品三批，依法檢查（中國藥典2005年版二部附錄A），取本品20粒，分別精密稱定重量后，倒出內容物，囊殼用乙醚洗凈，置通風處揮盡乙醚，再分別精密稱定囊殼重量，求出每粒內容物的裝量與平均裝量。結果見表10-5。表10-5 裝量差異檢查結果批號060501060502060503平均裝量(g)0.66190.65440.6653裝量差異符合規定符合規定符合規定 結論：裝量差異均符合質量標準要求。3.4、微生物限度檢查3.4.1卡莫氟軟膠囊微生物限度檢查方法學驗證(1)供試品：卡莫氟軟膠囊（060501、060502、060503）(2)菌種：枯草

11、芽孢桿菌CMCC(B)63 501、金黃色葡萄球菌CMCC(B)26 003、大腸埃希菌CMCC(B)44 102、白色念珠菌CMCC(B)98 001、黑曲霉菌CMCC(B)98 003(3)培養基：營養肉湯培養基、改良馬丁培養基、營養瓊脂培養基、玫瑰紅鈉培養基、膽鹽乳糖培養基、MUG培養基(4)試驗方法：1、按中國藥典2005版二部“微生物限度檢查法”中常規法和稀釋法檢驗。2、細菌、霉菌及酵母菌計數按照中國藥典2005版微生物限度檢查法進行細菌、霉菌及酵母菌計數的方法學驗證試驗及菌落計數。(5)菌液制備：1、接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至10ml營養肉湯培養基中

12、，3537培養1824小時，取此培養液1ml加無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7稀釋級，使含菌數為50100cfu/ml。2、接種白色念珠菌的新鮮培養物至10ml改良馬丁培養基中，2328培養1824小時，取此培養液1ml加無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7稀釋級，使含菌數為50100cfu/ml。3、接種黑霉菌的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基中，2328培養57天，加無菌氯化鈉溶液35ml洗下霉菌孢子，吸出菌液，取菌液1ml加無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-4稀釋級，使含菌數為50100cfu/ml。

13、（6）供試液制備：取供試品5g，加至含溶化的（溫度45）5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無菌混合物中，慢慢加入45pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml,攪拌使供試品充分乳化，制成1：20的供試液。（7）驗證方法1、菌液組分別取菌液1ml，采用平皿計數法，測定菌液中每1ml含活菌數，測定結果見表10-6。2、供試品對照組取供試液2ml，加入平皿中，立即傾注瓊脂培養基，待凝固后，置規定溫度培養25天觀察結果。測定供試品本底菌數。測定結果見表10-7。3、試驗組取供試液2ml，按供試品對照組同法操作，同時加入各試驗菌50100cfu，置規定溫度培養25天觀察結果。測定結果

14、見表10-8、表10-9。4、稀釋劑對照組分別取各試驗菌5001000cfu，加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至10ml。分別取1ml按供試品對照組同法操作, 置規定溫度培養25天觀察結果。測定結果見表10-10、表10-11（8）試驗結果：表10-6 菌液組菌落計數（cfu/ml）試驗金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌大腸埃希菌194787310456286827211262平均90807210859表10-7 供試品對照組菌落計數（ cfu/g）樣品細菌數霉菌及酵母菌數12平均12平均000000表10-8 試驗組菌落計數（cfu）金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉

15、菌大腸埃希菌1626658814827170507752平均6668537950表10-9 試驗組回收率（%）金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌大腸埃希菌7385747385表10-10 稀釋劑對照組菌落計數（cfu）金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌大腸埃希菌1757565864925965536845平均6770597747表10-11 稀釋劑對照組回收率（%）金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌大腸埃希菌平均7488827180（9）結論:常規法驗證試驗結果顯示，試驗組和稀釋劑組各菌回收率均大于70%。該法專屬性良好，可用于本品微生物限度的檢驗。3.4.2中試

16、產品檢查：取本品三批，依法檢查（中國藥典2005年版二部附錄XI J），結果見表10-12。表10-12 卡莫氟軟膠囊微生物限度檢查結果批號0605010605102060503微生物限度符合規定符合規定符合規定本品三批微生物限度檢查結果均符合規定，將其列入質量標準。3.5 有關物質參照中國藥典2005版二部卡莫氟有關物質檢查。3.5.1方法：取本品內容物適量（約相當于卡莫氟200mg），加甲醇冰醋酸（99：1）制成每1ml含20mg的溶液，振搖10分鐘，用0.45m濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，加甲醇冰醋酸（99：1）制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液

17、。照薄層色譜法（中國藥典2005年版二部附錄V B）試驗，吸取上述兩種溶液各15l，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯丙酮（5:3）為展開劑，展開，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質斑點，與對照溶液的主斑點比較，不得更深(小于0.5%)。3.5.2 方法的建立（1）專屬性試驗1、分別稱取卡莫氟原料藥、空白輔料適量，加甲醇冰醋酸（99：1）制成每1ml中含20mg的溶液，照薄層色譜法（中國藥典2005年版二部附錄V B）試驗，吸取上述溶液各15l，依法檢測，有關圖譜見附圖。檢測結果可知空白輔料不干擾本品有關物質測定。2、酸、堿水解和氧化加速破壞試驗取卡莫氟0.6g，

18、加甲醇15ml溶解后分作三份，分別加鹽酸(1mol/L)1ml，加氫氧化鈉溶液(1mol/L)1ml，加10雙氧水1ml,室溫放置10小時，加甲醇冰醋酸（99：1）制成每1ml約含卡莫氟20mg的溶液，依法測定，破壞試驗的TLC圖譜見附圖。試驗結果表明，卡莫氟經酸破壞試驗影響不大；堿、氧化破壞后，有雜質產生，且與主斑點分離良好。本薄層色譜條件能夠檢出本品的降解產物，且分離度符合要求。（2）檢測限試驗取卡莫氟原料藥適量，加甲醇冰醋酸（99：1）逐漸稀釋，依法檢查，結果見附圖，結果顯示本法可檢出1.5g的卡莫氟，表明本法有較高靈敏度。6 含量測定6.1 卡莫氟含量測定6.1.1 方法依據卡莫氟片質

19、量標準（中國藥典2005年版二部“卡莫氟片”）含量測定采用分光光度法。本品為卡莫氟軟膠囊，主要輔料為大豆油，大豆油在258nm波長下有吸收，對卡莫氟含量測定有干擾。并且卡莫氟的主要降解產物氟尿嘧啶在該波長下也有吸收，采用分光光度法測定本品含量造成結果偏高，因此原方法不適合卡莫氟軟膠囊中卡莫氟含量的測定。我公司參考有關文獻“高效液相色譜法測定嘧福祿片中卡莫氟的含量及其有關物質”中含量測定的方法，采用高效液相色譜法,能將供試品中的主峰與雜質峰完全分離，方法簡便、準確。6.1.2 色譜條件的確定1、流動相選擇照文獻方法采用的流動相：甲醇-混合酸溶液(磷酸6.77mL，冰醋酸5.72mL，硼酸6.18

20、g以水稀釋至1000mL，用2mol/L氫氧化鈉調節pH至2.0) (85：15)，有很好的準確度及分離度。考慮使用試劑多、操作繁瑣。故選擇甲醇水磷酸（85：15：0.1）為流動相。2、檢測波長的選擇照紫外-可見分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄 A)，取卡莫氟原料藥適量，加流動相溶解，以0.45m濾膜過濾，取續濾液制成每1ml中含卡莫氟10g的溶液，在210400nm的波長范圍掃描，結果見附圖。由圖看出本品在258nm處有最大吸收。故選擇258nm作為本品含量測定檢測波長。3、色譜條件：儀器：LC-10AT液相色譜儀LC-10ATvp 泵，SPD-10A紫外檢測器。色譜柱：依利特ODS

21、2 C18柱，5m，4.6mm×150mm。流動相：甲醇-水-磷酸（85：15：0.1）檢測波長：258nm流速：0.8ml/min6.1.3 線性關系試驗精密稱取卡莫氟對照品7.8mg，置50ml量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液1.0ml、2.0 ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置20ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，取上述溶液各10l，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，按峰面積計算回歸方程，結果見表10-14，以濃度為橫座標，峰面積為縱座標，繪制線性關系曲線圖。表10-14 濃度與峰面積的線性關系試驗結果濃度(g/ml)

22、7.815.623.431.246.8峰面積130135258793378462508212764595圖10-3 含量測定線性關系曲線圖以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標得回歸方程： A=16241 C + 2656.8 r = 0.9999上述線性試驗結果表明，本品進樣濃度在7.846.8g/ml范圍內峰面積與濃度呈良好的線性關系。6.1.4 回收率試驗精密稱取卡莫氟約12mg、15mg及18mg各三份，精密稱定，分別置50ml量瓶中，分別入處方量的輔料，加流動相30ml，振搖，加流動相稀釋至刻度，搖勻，以0.45m濾膜過濾，取續濾液加流動相稀釋制成分別含卡莫氟80%、100%、120%、（處

23、方量）三種不同濃度的溶液，各三份，各取5.0ml分別置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取卡莫氟對照品適量，用流動相溶解稀釋并制成每1ml中約含30g 的溶液，作為對照品溶液。取上述各溶液各10l，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，計算回收率，結果見表10-15。表10-15 卡莫氟含量測定回收率試驗結果濃度加入量(mg)峰面積測得量(mg)回收率(%)總回收率(%)RSD(%)80%13.6245690313.6099.8899.840.5913.5145209613.4699.6313.5645389013.5199.66100%16.7356490916.8

24、2100.5316.4555591216.55100.6116.6956403816.79100.62120%20.4267908420.2299.0120.3267628820.1399.0920.3167907520.2299.55由表10-15可見，在上述三種濃度下，卡莫氟總回收率分別為99.84%，表明空白輔料對其含量測定無干擾，測定結果準確。上述試驗結果表明，本方法回收率良好。6.1.5溶液穩定性試驗取處方量卡莫氟原料及輔料適量，精密稱定，置100ml量瓶中，加流動相適量，振搖，加流動相稀釋至刻度，以0.45m微孔濾膜過濾，取續濾液加流動相稀釋至每1ml中約含卡莫氟30g的溶液，作為

25、供試品溶液，分別于0、2、4、8小時取樣測定，結果見表10-16。表10-16 溶液穩定性試驗結果時間(小時)峰面積平均值RSD（%）05373685334880.961529338253778445255028537449試驗結果表明：本品溶液在放置8小時后測定，峰面積基本無變化，表明溶液在8小時內穩定。6.1.6精密度試驗取線性關系項下的第3份溶液，按上述色譜條件，量取10l，注入液相色譜儀，連續進樣6次，記錄色譜圖，結果見表10-17。表10-17 精密度試驗結果（n=6）測定次數峰面積平均RSD（%）15130555114700.6625062433507482451518955128486514002精密度試驗結果RSD%(n=6)為0.66，表明本法精密度良好。6.1.7卡莫氟含量測定方法的確定照高效液相色譜法（中國藥典2005年版二部附錄D）測定。色譜條件及系統適應性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇水磷酸（85：15：0.1）為流動相；檢測波長為258nm, 流速0.8ml/min。理論塔板數按卡莫氟峰計算應不低于2000；卡莫氟與各雜質峰的分離