1、第1次關于轉基因分析的全球會議“需要在國際和區域間協調統一“ Roger Wood 和和 Andrew Damant WC2B 6NH ，倫敦，帝國大道125號，民航大廈，食品標準局談及到廣義的、而不僅僅是轉基因生物時，應包括以下幾點：食品法典和歐盟的實驗室質量標準可接受的標準分析方法食品法典審議的方法，檢測和確定來自于生物技術的食品一般方法和標準方法測量不確定度方面（取樣和分析） 采用歐洲網絡轉基因生物實驗室轉基因檢測分析方法定義的最低性能要求（弊）從事控制進出口食品檢測實驗室評估能力的準則第8步在1997年6月的食品法典委員會上通過（見CAC/GL 27-1997)要求3 .下列標準應被參

2、與食品進出口監測的實驗室采納： ISO / IEC導則25 ： 1990規定了檢測實驗室應遵守的一般標準“校準和監測實驗室職權范圍的一般要求“ ; 注：現在改為英文的ISO / IEC 17025:2005 參加適當的符合“國際統一議定書的（化學）分析實驗室的能力測試 “理論與應用化學65 （1993）21322144;在1995年7月的第21屆會議上，已被食品法典委員會采納 規定要求的食品分析水平測試計劃 注：最新議定書理論與應用化學， 2006，78 （ 1 ），145-196現已通過了食品法典委員會 凡提供、使用的分析方法應該有以食品法典已審定的原則規定的根據 使用內部質量控制程序，如這

3、里所講的“分析化學實驗室內部質量控制統一準則，“理論與應用化學67（ 1995 ）649-6664 .上文提到參與評估的實驗室機構應遵守一般實驗室認可標準，如ISO / IEC導則58:1993中規定了 “校準和檢驗實驗室認可系統的通用操作與認可標準” 。 歐洲議會和2004年4月29 國會制定（ EC ）882/2004條例 官方控制以確保核查遵守飼料和食品法、動物健康和動物福利法規第11條 取樣和分析方法使用的采樣和分析方法應遵守官方控制或相關社區的規則（ a ）如果沒有這樣的規則存在，以國際公認的規則或協議為準。例如歐洲標準委員會（CEN）已接受或在國家立法中商定的準則（ b ）若上述情

4、況均不存在，按與目的相符的其他方法或按照發達國家科學議定書執行 凡第1款不適用的， 驗證的分析方法可采取發生在單個實驗室的符合國際公認協議的準則。 3 .附件三詳細列出了符合標準的所有可能的分析方法第12條 官方實驗室 1 .主管部門應指定在官方控制可進行樣品分析的實驗室 然而，主管當局可能只指定實驗室，運營、評估以及認可按照以下歐洲標準執行： EN ISO / IEC 17025 “能力測試和校準實驗室的一般規定” EN 45002 “評估測試實驗室的一般標準” EN 45003 “校準和測試實驗室認可制度通用的運作和認可準則”， 考慮到不同標準的測試辦法規定了通用的飼料和食品法。 （注：這

5、些提法現已更新與關于認證機構的新的歐盟條例( 2008年6月23日通過 ？) )一致附件三：分析方法的特征分析方法應符合以下標準特點： 準確性; 適用性（矩陣和濃度范圍內） ; 檢測限; 限制度; 精度; 可重復性; 再現性; 恢復性; 選擇性; 敏感性; 線性; 測量不確定度; 可根據需要選擇的其他標準。 第1 （ e ）中提到的精確值應通過一個已按國際認可的協議執行的合作試驗賦予（例如：ISO 5725:1994或化學的國際統一協議）或按已有的依據標準兼容性測試的分析方法執行。 重復性和有效值應表示為國際公認的形式（如95 置信區間按ISO5725:1994或理論與應用化學定義） 。協作實

6、驗的結果應公開發表或免費提供。 分析方法只能在單一的實驗室予以審定的情況下，他們應當按照化學統一的指導方針審定，或按依據標準兼容性測試已確定績效標準的分析方法執行。 （單個實驗室驗證分析方法的化學統一指導方針（MichaelThompson, Stephen L R Ellison and Roger Wood,理論與應用化學。 2002，74 （ 5 ），835-355 ）現已被歐盟和食品法典接受。 ）什么是標準的分析方法？為什么要引入？傳統的方法（具體的分析方法） 分析師被剝奪了選擇的自由，因此，某些情況下，不得不使用一些不恰當的方法; 程序抑制了自動化的使用; 想改變無法令人滿意的或劣于

7、另一目前可用方法的分析方法，在行政上很難實施。標準方法（方法的表型特征） 這個“標準”的做法與目前食品法典和歐盟采用的程序相比，擁有更大的靈活性 在食品分析的某些領域中，提供了許多分析方法，其中有一些符合有關法規特點、但由于時間的限制還未經食品法典或歐盟審議。 如:沒有具體規定的方法 但是， “標準法”也可能意味著接受由食品法典，歐盟等設定的單個標準 如:方法是否不夠好？法典委員會的分析和取樣方法 審議檢測和鑒定轉基因食品的方法 一般方法和標準方法 （論文CX/MAS 08/29/8)）轉基因食品分析的審定和質量控制要求指南考慮到： 標準的做法和已確定的特征（ LOD技術， LoQ等） 實驗室

8、質量測量的不確定度基于DNA分析方法的附加要求 -擴增長度-是否有該方法的具體操作規則-定性和定量PCR檢測方法是否有區別 -是否能開展單一或多重P CR擴增基于蛋白質方法的附加要求： -試劑應與反應時間所需耗試劑等量附件一：當一種轉基因食品的檢測方法CCMAS表示贊同時，該信息可提供給食品法典方法的說明-該方法的目的和意義-科學依據-該方法所需要的規范的預測模型/數學模型方法的優化信息-引物對/熒光寡核苷酸探針測試-選擇性測試-穩定性測試-靈敏度測試-穩定性測試-交叉反應 實際應用的方法-適用性-操作特點和實用性的方法-操作技能要求 分析控制需要指出的方法驗證/性能 -擴增長度-該方法是否是

9、儀器化的或化學特異性的 -是否需進行單一或多重P CR擴增-基于PCR技術和免疫學方法驗證的標準是否有差別附件二:適用于分析轉基因食品法典定義-精度-適用性-動態范圍-范圍的量化-檢測限（ LOD值） -定量限（ LOQ） -實用性-重復性標準偏差（ RSDr） -再現性標準偏差（ RSDR） -回復-穩定性 -靈敏度-選擇性-真實性附件三：定量PCR審定法 每個特征給定和預期值的信息， 如：重復性標準偏差和再現性標準偏差信息分析控制驗收標準和給出結果的解釋信息 重復性標準偏差（ RSDr ） 建議：重復性相對標準偏差25 或接近這個值在該方法的整個動態范圍是可行的。 再現性標準偏差（ RSD

10、R ） 建議：再現性相對標準偏差35 或接近該值在標準濃度及大多數的動態范圍內是可行的。 RSDR 50 左右是可行的極限的定量下限。 附件四：定性聚合酶鏈反應方法的審定 附件五：基于蛋白質方法的審定 定性和定量方法的審議 附件六：轉基因食品的水平測試 得分標準信息來自logtransformed 數據庫 注：問卷分析方法技術委員會/lap/rsccom/amc/amc_index.htm下載法典準則的測量不確定度(CAC/GL 54-2004) 引言使用ISO / IEC 17025:1999，分析師能意識到相關的每個分析結果的不確定性、并估計該不確定性，這是重要和必須

11、的。 測量的不確定性可能來自一些程序。為了達到食品法典的控制目的，食品分析實驗室被要求使用可行的通用的檢測或驗證方法，并在納入日常使用之前，驗證他們的程序。因此，這些實驗室提供了一系列可以用來估算其測量不確定度的分析數據。只適用于定量分析的準則 大多數定量分析結果采取 “a 2u 或 a U”的形式記錄 其中“a”是被測量濃度真實值（分析結果）的最優估計，“u ”是 標準的不確定性，而“ U ” （相當于2u）是擴大 的不確定性。 “a 2u”代表了置信區間為95 的范圍， 即在該范圍內找到的真實值可信度是95 。 “ U ” 或“的2 u” 常見于分析師的報告中， 以下簡稱“計量不確定性“

12、，可用不同方式進行估計。.結果在不確定度外，高于檢測限.結果高于檢測限，檢測限在不確定度內.結果低于檢測限，檢測限在不確定度以內.結果在不確定范圍內，低于檢測限檢測上限 這意味著法典的規定和執法界限是不同的 規范的制定應該受到贊賞測量的不確定性是否同時適用于采樣和分析？ 測量不確定性適用于整個測量過程。 對于分析者來說，一直考慮單一的“分析” 測量不確定性，但現在越來越多地認識到必須對整個系統加以考慮，并且“抽樣” 測量不確定性的重要性正在日益增加。 法典委員會的分析和取樣方法 第29次會議，布達佩斯，匈牙利，2008，10/3-14/3 測量不確定性指導 （論文 CX/MAS 08/29/9

13、 ） 取樣不確定性指導 （論文 CX/MAS 08/29/9- Add 1.)同意： 準備分析測量確定性的近一步指導意見 進一步進行基于以下論文的討論： 歐洲分析化學組織 /國際分析化學溯源性合作組織 /波蘭華沙分析測量技術展/北歐技術試驗協作機構指南關于“取樣測量不確定性的評估“和做好準備北歐技術試驗協作機構報告604 （不是將來，現在立即行動 ） 目的的實施在于認真仔細的考慮- 難點在于轉基因產品部門的執行！統一標準“一種歐洲的觀點” Andrew Damant英國食品標準局立法-1條例（ EC ）No 1829/2003- CRLGMFF法律規定第32條 CRL GMFF的操作按照條例（

14、 EC ）No 641/2004執行-附件一規定給申請授權者提供檢測方法類型的參考信息 - 包括分析方法的信息-申請人還提供了與寄主側翼序列相鄰的完整插入序列以便構建一種特異性事件檢測方法 還提供食品和飼料樣品以及對照樣品立法-2CRL - GMFF開展的活動與歐洲轉基因實驗室的網絡協調一致 ENGL“定義轉基因檢測分析方法的最低執行需求” （ EC ）No 1981/2006條例-第6條和附件二提供一些國家實驗室關于協助CRL測試和驗證檢測與鑒定方法的參考細節驗證過程申請者/EFSA檢測方法不可信的潛在要求細節補充信息潛在要求” 測試停止“潛在要求EFSA接受對照樣品方法相關數據（第一步）科

15、學評估方法樣品文獻（第二步）CRL試驗測試樣品和方法（第三步）共同研究探討（第四步）結果報告（第五步）轉基因測試分析方法最低執行需求的定義最初發表于2005年第一階段（步驟2和3 ） - 由申請人提交的執行方法數據和部分官員檔案的評估;第二階段（第4步） 協作試驗之后的全面確認研究的執行，方法、數據的評估 目前正在修訂第一階段 接受標準的方法實用性 方法的實用范圍，分析方法的參考等可行性 設備 時間 實際困難特異性 特異性事件活動范圍 包括1/10th和至少和至少5目標濃度目標濃度 精確度 在參照值 25%以內以內 R2系數系數 0.98 PCR效率 -3.1斜坡 -3.6RSDr 超過整個動

16、力學范圍 25 LOQ 1/10th的目標濃度,并且RSDr 25 LOD值 1/20th的目標濃度的目標濃度 穩定性 偏離不超過30第二階段 執行需求的方法 RSDR 35 的目標濃度， 50 終濃度 0.2 真實性 超出整個范圍在公認的參考 值值 25%以內以內標準是否滿足？適用性 ？可行性 特異性 動態范圍 精確性 ？ R2的系數 PCR效率 RSDr LOD LOQ 穩定性 ？RSDR 真實性 問題？目前為止，已進行了 32個協作試驗 -3 花粉（提取+ R T- PCR法） RSDR = 17.7 至43.9 -29的DNA（僅R T- PCR檢測） RSDR = 12 至33.5 獲得的大多數精確數據只涉及RT - PCR檢測（即D