1、紫外可見分光光度計賽沃醫(yī)藥藥物分析部賽沃醫(yī)藥藥物分析部徐剛徐剛目的1. 掌握紫外-可見分光光度法的定義和在實踐中的應用；2. 掌握分光光度計的基本結構和工作原理；3. 掌握紫外可見分光光度計正確使用方法； 紫外可見分光光度法定義紫外-可見分光光度法根據(jù)物質分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結構分析方法。操作簡單、準確度高、重現(xiàn)性好。波長長（頻率小）的光線能量小，波長短（頻率大）的光線能量大。分光光度測量是關于物質分子對不同波長和特定波長處的輻射吸收程度的測量。紫外可見分光紫外可見分光光度計的應用光度計的應用幾乎所有的無機元素和在紫外及可見光區(qū)有

2、特征吸收的有機物或者有機化合物都能用紫外-可見分光光度法進行測定。目前，紫外-可見分光光度計已成為全世界歷史最悠久、使用最多、覆蓋面最廣的常規(guī)分析儀器。紫外-可見分光光度法的應用范圍涉及化學化工、醫(yī)療衛(wèi)生、冶金地質、食品飲料、農業(yè)化肥、畜牧水產、機械制造、計量科學、環(huán)境保護、生物制藥、石油材料等領域中的科研、教學、生產中的質量控制、原材料和產品檢驗等各個方面，進行定性分析、定量測定、純度檢查、動力學研究等等。紫外可見分光光度計部件無論哪一類分光光度計都包括：光源、單色器、吸收池、檢測器和測量儀表。分光光度計各部件的次序如圖所示:光 源: 分光光度計上常用的光源有兩種：鎢絲燈或氫燈，在可見光區(qū)、

3、近紫外光區(qū)和近紅外光區(qū)常用鎢絲燈作為光源；在紫外光區(qū)多使用氫弧燈。單色器：把混合光波分解為單波長光的裝置。在分光光度計中多用棱鏡或光柵作為色散元件。吸收池：（比色杯、比色皿、比色池）一般由玻璃、石英或熔凝石英制成，用來盛被測的溶液。在低于350 nm的紫外光區(qū)工作時，必須采用石英池或熔凝石英池。吸收池（比色皿）必須與光束方向垂直。此外，每套比色皿的質料、厚度應完全相同，以免產生誤差。比色皿上的指紋、油污或壁上的沉積物都會顯著地影響其透光性，因此在使用前務必徹底清洗。檢測器：有光電池、光電管和光電倍增管三種。測量裝置 一般常用的紫外光和可見光分光光度計有3種測量裝置，即電流表、記錄器和數(shù)字示值讀

4、數(shù)單元?，F(xiàn)代的儀器常附有自動記錄器，可自動描出吸收曲線。紫外可見分光光度計紫外可見分光光度計工作原理（圖）工作原理（圖）1.光源燈；2.濾光片；3.球面反射鏡；4.入射狹縫；5.保護玻璃；6.平面反射鏡；7.準直鏡；8.光柵；9.保護玻璃；10.出射狹縫； 11.聚光鏡；12.試樣室； 13.光門；14.光電管分光光度計工作原理（文）分光光度計工作原理（文）由光源燈(1)發(fā)出連續(xù)輻射光線，經濾光片(2)和球面反射鏡(3)至單色器的入射狹縫(4)聚焦成像，光束通過入射狹縫(4)經平面反射鏡(6)到準直鏡(7)產生平行光，射至光柵(8)上色散后又以準直鏡(7)聚焦在出射狹縫(10)上形成一連續(xù)光譜

5、，由出射狹縫選擇射出一定波長的單色光，經聚光鏡(11)聚光后，通過試樣室(12)中的測試溶液部分吸收后，光經光門(13)再照射到光電管(14)上。調整儀器，使透光度為100，再移動試樣架拉手，使同一單色光通過測試溶液后照射到光電管上。如果被測樣品有光吸收現(xiàn)象，光量減弱，由光電轉換元件將變化的光信號轉變?yōu)殡娦盘枺浘€性運算放大器和對數(shù)運算放大器處理，將光能的變化程度通過數(shù)字顯示器顯示出來。可根據(jù)需要直接在數(shù)字顯示器上讀取透光度(T)、吸光度(A)或濃度(C)。TU-19紫外可見紫外可見分光光度計分光光度計基本操作基本操作1.通電-儀器自檢-預熱30min；2.選擇功能模塊：光度測量/光譜掃描/定量測定/時間掃描/光譜帶寬掃描 （1）參數(shù)設置：選擇波長或者波長范圍。（2）儀器校零：將樣品溶劑放入樣品光路池和參比光路樣品池中，進行校零。 （3）樣品測定：將樣品溶液置樣品光路池中，測量吸光度值或者進行光譜掃描。（4）處理結果：處理和保存結果。注意事項 比色皿至少要用待測溶液潤洗3次，才能保證