1、血紅蛋白的組成血紅蛋白的組成 血紅蛋白由血紅蛋白由血紅素血紅素與與珠蛋白珠蛋白組成組成血紅素：鐵原子與原卟啉血紅素：鐵原子與原卟啉復合物。復合物。珠蛋白：包括珠蛋白：包括、和和珠蛋白珠蛋白6 6種。種。 血紅蛋是由兩種不同的鰲合了血紅素的血紅蛋是由兩種不同的鰲合了血紅素的珠蛋白肽鏈所形成的四聚體結構，在人體的珠蛋白肽鏈所形成的四聚體結構，在人體的不同發育時期，其主要的血紅蛋白（不同發育時期，其主要的血紅蛋白（HbHb）組）組成不同。成不同。 人體發育過程中人體發育過程中H H的組成的組成發育期發育期血紅蛋白血紅蛋白肽鏈組成肽鏈組成胚胎期胚胎期 Gower12 2 2 2Gower22 2 2

2、2胎兒期胎兒期Porland2 2 2 2F2 2 2 2A2 2 2 20 02 2周歲左右周歲左右F2 2 2 2A2 2 2 2A2 22 2 2 22 2周歲后以后周歲后以后A2 2 2 2A2 22 2 2 2F2 2 2 2HbHb的種類的種類A.正常的Hb分三類 a.HbA(2 22 2) b.HbF(2 22 2) c.HA2 2(2 22 2)B.異常Hb有兩類 a.快速異常Hb:穩定Hb b.慢速異常Hb:不穩定Hb基層常用的電泳分析方法基層常用的電泳分析方法醋酸纖維膜電泳醋酸纖維膜電泳瓊脂凝膠電泳瓊脂凝膠電泳 醋酸纖維膜電泳醋酸纖維膜電泳主要過程主要過程瓊脂凝膠電泳瓊脂凝

3、膠電泳 RBC RBC洗滌洗滌 制備溶血制備溶血 點樣點樣 電泳電泳 染色與脫色染色與脫色 掃描法掃描法 比色法比色法: :分區剪下色帶，洗脫分區剪下色帶，洗脫 分區切割色帶分區切割色帶, ,融化瓊脂，干燥融化瓊脂，干燥, ,透明透明比色比色 HbAHbA2 2的常用測定方法的常用測定方法原理原理: :根據不同根據不同HbHb自帶電荷的不同、分子量大小的不自帶電荷的不同、分子量大小的不同、結構和等電點的不同同、結構和等電點的不同, ,在一定在一定pHpH值的緩沖液中朝值的緩沖液中朝特定方向泳動，在一定的電壓下經一定時間，可分特定方向泳動，在一定的電壓下經一定時間，可分離出各自的區帶。離出各自的

4、區帶。主要類別主要類別: :l醋酸纖維素膜電泳法醋酸纖維素膜電泳法l瓊脂凝膠電泳法瓊脂凝膠電泳法HbA2HbA2含量測定含量測定: :l洗脫法洗脫法l掃描法掃描法血紅蛋白血紅蛋白A2測定測定 不連續電泳將不連續電泳將HbAHbA2 2分離后，分別剪分離后，分別剪出膜條中的出膜條中的HbAHbA和和HbAHbA2 2區帶，分別放入試區帶，分別放入試管中，管中，HbAHbA加蒸餾水加蒸餾水20ml20ml， HbAHbA2 2加加4ml4ml，浸泡，浸泡3030分鐘，不定時搖動，使分鐘，不定時搖動，使HbHb完全完全冼脫下來后混勻，用冼脫下來后混勻，用721721分光光度計以波分光光度計以波長長4

5、13nm413nm蒸餾水校正零點，讀取光密度蒸餾水校正零點，讀取光密度ODOD值并計算出結果。值并計算出結果。抗堿血紅蛋白抗堿血紅蛋白(HbF)(HbF)測定測定設備：設備：721721分光光度計，刻度吸管，秒表，玻璃漏斗分光光度計，刻度吸管，秒表，玻璃漏斗，濾紙。，濾紙。試劑：試劑：1/12mol/LKOH1/12mol/LKOH或或NaOHNaOH溶液，酸性半飽和硫酸溶液，酸性半飽和硫酸銨溶液。銨溶液。方法：取兩支試管，測定管加入溶血液方法：取兩支試管，測定管加入溶血液0.1ml0.1ml，對，對照照管加入管加入0.02ml0.02ml，于測定管中加入，于測定管中加入KOH1.6mlKOH

6、1.6ml，搖勻，搖勻，1 1分鐘時立即加入酸性半飽和硫酸銨溶液分鐘時立即加入酸性半飽和硫酸銨溶液3.4ml3.4ml，倒，倒轉轉6 6次，放次，放1010分鐘，濾取溶液檢測，用波長分鐘，濾取溶液檢測，用波長 540nm 540nm 蒸餾水校正零點，分別讀取測定管和對照管光密度蒸餾水校正零點，分別讀取測定管和對照管光密度ODOD值，計算出結果。值，計算出結果。 HbCSHbCS的區帶多在的區帶多在HbAHbA2 2位置的前位置的前后，含量低，后，含量低，2 2左右，很不穩定，左右，很不穩定，有時還可分開成三或四小區帶，用有時還可分開成三或四小區帶，用聯苯胺染色可確定。聯苯胺染色可確定。HbEH

7、bE為慢速異常為慢速異常區帶，其位置相當于區帶，其位置相當于HbAHbA2 2。HbHHbH和和HbBartHbBarts s為快速異常區帶。為快速異常區帶。全自動全自動HbHb電泳儀電泳儀目前國內使用的主要有目前國內使用的主要有美國的美國的HelenaHelena電泳儀、掃描儀和分析系統。電泳儀、掃描儀和分析系統。法國的法國的SebiaSebia電泳儀、掃描儀和分析系統。電泳儀、掃描儀和分析系統。國產的金桑特電泳儀、掃描儀和分析系統。國產的金桑特電泳儀、掃描儀和分析系統。1.1.通過掃描定量給出通過掃描定量給出HbAHbA、 HbA HbA2 2和和HbFHbF值。值。2.2.異常區帶通過查

8、表確定。異常區帶通過查表確定。HbEHbE區帶的鑒別區帶的鑒別A.A.聯苯胺染色聯苯胺染色, ,鑒定是否為鑒定是否為Hb Hb B.B.區帶位于區帶位于HbA2 HbA2 區帶位置上區帶位置上, ,在陰性在陰性(-)(-)泳動泳動速度最慢的一種異常速度最慢的一種異常Hb,Hb,難與難與A2A2區分開區分開C.HbA2C.HbA2定量在定量在10%10%以上以上, ,應考慮為應考慮為HbE HbE D.HbED.HbE純合子只有純合子只有HbFHbF和和HbE,HbEHbE,HbE高達高達95%95%以上以上HbHHbH區帶的鑒定區帶的鑒定A.A.聯苯胺染色聯苯胺染色, ,確定是否為確定是否為H

9、bHb B.B.在陽極在陽極(+)(+)泳動速度最大的泳動速度最大的HbHb區帶區帶C.HbHC.HbH包含體陽性包含體陽性(+) (+) D.pH6.5D.pH6.5緩沖液緩沖液( (酸性酸性) )唯一向陽性唯一向陽性(+)(+)移動的移動的HbHb區帶區帶E.HbMCVMCHE.HbMCVMCHF.HbBartF.HbBarts s 區帶在區帶在HbHHbH區帶后區帶后, ,泳動速度比泳動速度比HbHHbH稍慢稍慢 些些, ,有有BartBarts s 區帶區帶, ,一般都有一般都有H H區帶區帶,H,H含量高達含量高達30%30% 多多, ,但不會超出但不會超出40%,40%,低少到低少

10、到1%1%左右。左右。HbAHbA2 2 在血紅蛋白病中的意義在血紅蛋白病中的意義HbAHbA2 2組成組成: : 2 2 2 2HbAHbA2 2參考值參考值:1.2%-3.5%:1.2%-3.5%HbAHbA2 2含量的改變含量的改變: HbA: HbA2 2水平升高水平升高, ,是是地地貧基因攜帶者的特征性標志貧基因攜帶者的特征性標志, , 故故HbAHbA2 2定定量的準確與否量的準確與否, ,對于臨床一線對于臨床一線地貧基因地貧基因攜帶者的篩查至關重要。攜帶者的篩查至關重要。血紅蛋白（血紅蛋白（Hb）病）病1.1.血紅蛋白病：基因突變導致合成的珠蛋白血紅蛋白病：基因突變導致合成的珠蛋

11、白肽鏈肽鏈結構異常結構異常（如：鐮狀細胞血紅蛋白病（如：鐮狀細胞血紅蛋白病/HbS/HbS）2.2.地中海貧血：基因突變導致一種或多種珠地中海貧血：基因突變導致一種或多種珠蛋白肽鏈蛋白肽鏈合成減少或缺如合成減少或缺如（/地貧）地貧）3.3.獲得性血紅蛋白病：接觸或誤服化學藥物獲得性血紅蛋白病：接觸或誤服化學藥物 Hb Hb病為世界上發病率最高危害最大的單基因遺病為世界上發病率最高危害最大的單基因遺傳病，被傳病，被WHOWHO列為嚴重危害人類健康六大疾病之一。列為嚴重危害人類健康六大疾病之一。 全球約有全球約有4.83%4.83%的人口攜帶的人口攜帶HbHb病基因病基因, ,每年各類每年各類重型

12、地貧重型地貧( (包括地貧復合異常包括地貧復合異常HbHb病類型病類型) )患兒的出生患兒的出生率不低于率不低于2.42.4。據此推算。據此推算, ,全球每年至少約全球每年至少約3535萬萬HbHb病患兒出生病患兒出生; ; 至今為止，全球在分子水平上已鑒定出近至今為止，全球在分子水平上已鑒定出近10001000種不同的珠蛋白突變基因，其中包括種不同的珠蛋白突變基因，其中包括700700多種異常多種異常HbHb變異體和變異體和200200余種余種地貧基因以及地貧基因以及7070多種多種地貧突地貧突變變, ,其中中國人群中異常其中中國人群中異常HbHb、地貧基因和地貧基因和地貧突變地貧突變各占各

13、占7070多種、多種、3434種和種和1111種。種。臨床常見的異常血紅蛋白臨床常見的異常血紅蛋白以速度快慢排序以速度快慢排序 1. 1.血紅蛋白血紅蛋白E/AE/A2 2 2. 2.血紅蛋白血紅蛋白D/SD/S3.3.血紅蛋白血紅蛋白G G 4.4.血紅蛋白血紅蛋白K K 5.5.血紅蛋白血紅蛋白J J6.6.血紅蛋白血紅蛋白H HHbHb電泳操作中的經驗與教訓電泳操作中的經驗與教訓1.RBC1.RBC洗滌：離心的速度和時間要夠，生理鹽水與洗滌：離心的速度和時間要夠，生理鹽水與血血 比例要比例要5 5：1 1，血漿與冼滌生理鹽水要盡量吸干凈。，血漿與冼滌生理鹽水要盡量吸干凈。2.2.制備溶血：加入的溜水、溶血劑與紅細胞體積要制備溶血：加入的溜水、溶血劑與紅細胞體積要 符合要求。離心的速度和時間要夠。符合要求。離心的速度和時間要夠。3.3.點樣點樣: :血紅蛋白液適量，不能太寬。血紅蛋白液適量，不能太寬。4.4.電泳電泳: :醋纖膜浸泡時間要夠長，平衡時間要夠。醋纖膜浸泡時間要夠長，平衡時間要夠。5.5.染色與脫色染色與脫色: :時間要夠。時間要夠。1.1.正常新生兒正常新生兒 9.9.輕型輕型地中海貧血地中海貧血2.2.胎兒水腫綜合征胎兒水腫綜合征 10.10.異常異常HbDHbD雜合子雜合子3.3.地中海貧血地中海貧血1(1(臍