1、萘異硫氰酸酯誘導大鼠肝損傷機理及中藥的保護作用表1 大鼠血清ALT活性 （U/L，xs）注：n=6，與模型組比較，*P0.05，*P0.01表2 大鼠血清AKP (U/L，xs)注：n=6，與模型組比較，*P0.01表3 大鼠血清TBIL (mg/dl，xs)注：n=6，與模型組比較，*P0.01 2.2 大鼠肝組織勻漿PLA2的變化 大鼠染毒2天后，肝組織勻漿PLA2活性明顯增強，與空白組比較差異有顯著性(P0.01)，天后，模型組與其他各組比較差異有顯著性(P0.01)。天后，已經趨于正常水平。見表。表4 大鼠肝組織的PLA2活性 (U，xs)注：n=6，與模型組比較，*P0.01 2.3

2、 大鼠血清生化指標與肝組織PLA2關系 血清ALT、AKP、TBIL與肝組織勻漿PLA2呈正相關，相關系數分別為 ALT=0.61，AKP =0.577，TBIL=0.593 結果見圖13。 圖1圖2圖3 2.4 肝組織病變化 光鏡下，可見空白組肝組織肝小葉結構完整，中央靜脈周圍有放射狀排列的肝細胞索，竇間隙均勻、清晰，肝細胞體積較大，呈多邊形，大圓形核居中，胞漿豐富，匯管區清晰可辨，無明顯炎細胞浸潤。模型組肝細胞發生廣泛的水樣變性，胞漿疏松化及混濁腫脹，肝細胞體積增大，使肝細胞索增粗變寬，而肝竇受壓狹窄，甚至消失，能見到一定量的壞死灶，匯管區可見大量的中性粒細胞、淋巴細胞、漿細胞浸潤，膽管上

3、皮增生明顯。金石散、地塞米松組，肝損傷程度明顯恢復較快，肝細胞腫脹逐漸減輕，竇間隙逐漸清晰，胞漿疏松化、水樣化逐漸好轉，匯管區炎細胞滲出明顯減輕，膽管上皮增生減少。 3 討論 3.1 ANIT誘導大鼠肝損傷模型的適用性 肝毒性損傷模型的建立是完成本實驗的基礎。本實驗以血清ALT、AKP、TBIL和肝組織形態學改變為指標，確認肝損傷是否形成，并以此進行動態觀察。利用ANIT 誘導動物肝損傷模型在國內已有報道1。本次實驗采用ANIT 100mg/kg體重，灌胃使大鼠染毒，2天后，大鼠血清ALT、AKP、TBIL明顯升高(P0.01)，光鏡下可見肝細胞變性壞死，匯管區大量炎細胞浸潤，膽管上皮損傷伴增

4、生性改變。 由于ANIT誘導肝損傷是急性肝損傷，具有自限性，染毒天后，血清ALT、AKP、TBIL有所下降，病理切片肝細胞變性壞死，匯管區炎細胞浸潤，膽管上皮損傷及增生有所減輕，但仍表現為典型的肝損傷狀態(P0.01)。天后，以上各項指標與空白組比較仍有差異。上述結果表明，本實驗模型急性肝損傷明顯，損傷期能滿足實驗藥物觀察期限，效果滿意。 3.2 PLA2在ANIT誘導大鼠肝損傷中的作用 ANIT誘導肝損傷機理仍不完全清楚。發現ANIT誘導的肝損傷表現為肝實質細胞，膽管上皮細胞壞死，匯管區大量中性粒細胞浸潤2。ANIT誘導的肝損傷是中性粒細胞依賴性的肝損傷，ANIT在體外能使中性粒細胞活化，進

5、一步發現由活化中性粒細胞釋放的細胞因子如組織蛋白酶、彈力蛋白酶對體外培養的肝細胞具有毒性作用3。 作為肝毒性損傷介質的中性粒細胞在肝損傷中如何發揮作用？過去曾提出過不同解釋由于中性粒細胞浸潤而誘發的肝細胞損傷，其一是由于中性粒細胞粘附于內皮細胞而導致血管狹窄、血流減少，但后來的實驗并不支持這種觀點；另一是粘附的中性粒細胞可產生活性氧與蛋白酶活性增加，但后來的實驗證明，當炎癥細胞浸潤致肝損傷時，脂質過氧化程度比由過氧化物所引起的程序低一個數量級，因而認為活性氧并非導致肝細胞損傷的主要原因，認為蛋白酶可能是中性粒細胞介導的細胞毒性的重要因素。 中性粒細胞要引起肝毒性損傷需三個基本過程：(1)某些外

6、源性化學物質誘發中性粒細胞在肝臟內蓄積。(2)中性粒細胞穿透內皮細胞并蓄積于肝竇。(3)中性粒細胞粘附并誘發肝細胞損傷。這三個基本過程缺一不可，假如阻斷其中任何一過程，就能減輕肝細胞毒性損傷。 PLA2存在于所有研究過的細胞內，在許多疾病中發揮重要作用。PLA2能調節炎性細胞的活化及炎癥介質的產生和釋放4。PLA2催化膜磷脂產生的花生四烯酸經脂氧合酶和環氧化酶作用產生大量炎癥介質，包括氫過氧化合物、白三烯（LTS）、前列腺素（PGS）和血栓素（TXS）等類物質，均有不同程度的致炎及炎癥趨化作用5。另外，PLA2在催化生成花生四烯酸的同時，又可生成溶血卵磷脂，繼而轉化為血小板活化因子（PAF）6

7、。 糖皮質激素具有抑制免疫反應，穩定溶酶體膜，抗內毒素血癥作用，可起到保護肝細胞，減輕肝細胞壞死作用。糖皮質激素對大鼠血清磷脂酶A2的張力具有抑制作用7。實驗中對經ANIT 誘導肝損傷的大鼠使用地塞米松后，肝組織PLA2活力下降，同時肝細胞壞死程度減輕，匯管區中性粒細胞浸潤減少，血清生化指標下降，呈正相關，以上情況均說明，PLA2在ANIT誘導的肝損傷中發揮一定的作用。 3.3 金石散對ANIT誘導肝損傷的作用機制 大鼠經ANIT誘導產生肝損傷，經中藥金石散治療后，血清ALT、AKP、TBIL明顯下降。光鏡下，肝細胞、膽管上皮細胞變性壞死程度明顯減輕，匯管區中性粒細胞浸潤減少，同時肝組織中PLA2活力也降低。說明中藥金石散對ANIT誘導的肝損傷具有保護作用。金石散是我院研制開發的治療膽結石藥物8，具有清熱解毒、舒肝利膽、利濕退黃功效，能降低膽汁通中膽紅素和黏液含量。 金石散對ANIT誘導肝損傷的機制可能通過降低PLA2張力，進而減少中性粒細胞在匯管區的聚集及與肝細胞的粘附，減輕肝細胞損傷。另外，金石散還可通過促進膽汁分泌，減輕膽管擴張，從而緩解膽管上皮細胞損傷。因此金石散的保護作用較糖皮質激素明顯。總之，金石散對肝損傷的保護作用部分是通過降低PLA2活力發揮作用的，與糖皮質激素作用相似，同時還通過其他途徑發揮作用，具體機制有待進一步探