1、·藥品鑒定 ·2011年 9月第 8卷第 27期高效液相色譜法測定維生素C 注射液含量劉國如，劉永鎖，陳振玲，王偉，豐廷宗，周毓瑾中國民用航空局民用航空醫學中心（民航總醫院），北京100023摘要 目的：建立高效液相色譜法測定維生素C 注射液中維生素C 含量的方法。方法：采用 Phenomenexluna-NH2分析色譜柱（ 4.6mm×250mm，5m），流動相為磷酸二氫鉀緩沖液 -乙腈（ 11，磷酸調至 pH3.0）；流速： 1.0ml/min ；檢測波長： 245nm。結果：維生素 C 的線性回歸方程為 Y=29560X-21310（r=0.9995），線性

2、范圍為 5 30g/ml，平均回收率為 98.30%（ n=9，RSD 為 2.1%）。結論：該方法操作簡便，結果準確，可用于測定維生素 C 注射液中維生素 C 的含量。關鍵詞 高效液相色譜法；維生素C 注射液；維生素C；含量測定 中圖分類號R917 文獻標識碼 A 文章編號 1673-7210（ 2011） 09（c）-050-02DeterminationofVitaminCInjectionbyHPLCLIUGuoru,LIUYongsuo,CHENZhenling,WANGWei,FENGTingzong,ZHOUYujinCivilAviationMedicineCentre(Civ

3、ilAviationGeneralHospital),CAAC,Beijing100023,ChinaAbstractObjective:TodevelopaquantitativemethodforthedeterminationofVitaminCinVitaminCInjection.Methods:Phenomenexluna-NH2column(4.6mm× 250mm,5m)wasusedaschromatographiccolumn,amixtureofacetonitrileanddibasicpotassiumphosphatebuffersolution(11,v

4、/v)wasusedasmobilephase,whichwasadjustedtopH3.0byphosphoricacid,andthedetectionwavelengthwasat245nmwithaflowrateof1.0ml/min.Results:TheregressionequationwasY=29560X-21310(r=0.9995),whichwaslinearoverarangefrom5 g/mlto30 g/ml.Theaveragerecoverywas98.30%(n=9,RSD=2.1%).Conclusion:Thismethodissensitive,

5、rapidandaccurate,whichiscanbeusedfordeterminationofVitaminCinVitaminCInjection.KeywordsHPLC;VitaminCInjection;VitaminC;Determination維生素 C 在臨床上不僅用于心血管系統、消化系統疾病的輔助治療，而且在眼科、口腔科和外科系統疾病的藥物治療中也十分常用 1 。維生素 C 注射液的 pH 偏酸性，且具有較強的還原性，在某些條件下氧化型結構和還原型結構可以互變，但是它們均有生物活性，氧化劑、光及金屬離子等，均可加速其失效 2 。因此，加入抗氧化劑、溫度為 25、 pH

6、為 5.66.0 時，維生素 C 注射液在此條件下最為穩定 3 。維生素 C 注射劑含量的測定方法有很多，例如，滴定分析法4 、分光光度法 5 、熒光法 6 、電極法 7 等，常見的滴定法存在滴定終點難以準確判斷，分光光度法操作耗時。因此，本研究以維生素 C 注射液為研究對象，建立維生素 C 含量測定的高效液相色譜法。1 儀器與試劑度99.5%）；去離子水（由超純水儀 Millipore 純水系統制備）。其余試劑均為色譜純。2 方法與結果 2.1 色譜條件色譜柱為 Phenomenexluna氨基柱（ 4.6mm×250mm， 5m）；流動相為磷酸二氫鉀液和乙腈的混合液（體積比 11

7、），濃度為 0.02mol/L，pH 由磷酸調至 3.0；柱溫為 25；系統流速為 1.0ml/min ；檢測波長為 245nm。2.2 標準曲線的制備精密稱取 0.10g 維生素 C 對照品，用流動相溶液溶解并定容至 100ml ，得 1mg/ml的儲備液，避光保存。稀釋儲備液得濃度分別為 5、 10、15、 20、25、30g/ml的溶液，用 0.45 m濾膜過濾，進行 HPLC 色譜分析。以維生素 C 對照品峰面積（Y ）對相應的濃度（ X ）進行線性回歸，從而得到維生素 C 的標準曲線方程為： Y=29560X-21310（r=0.9995，n=6）。 2.3 精密度試驗取維生素 C

8、標準曲線項下低（ 10g/ml）、中（ 20g/ml）、高（ 30g/ml）三種濃度，日內精密度分別連續進樣 5 次；日間精密度分別于第 1、 3、 5 天測定，各進樣 5 次。結果維生素 C 三種濃度的日內 RSD 分別為 0.17%、0.53%和 0.21%，日間1.1 儀器美國 Waters公司的高效液相色譜儀（附2998 光電二極管矩陣檢測器）；瑞士梅特勒 -托利多酸度計（上海斯坦福生物科技發展有限公司）；德國賽多利斯 BT25S 十萬分之一天平（上海臺衡儀器儀器表有限公司）。 1.2 試劑 CDEZ-VIT-004N 維生素 C 對照品（美國；批號： 18976；規格： 1g/瓶）；

9、維生素 C 注射液（北京雙鶴藥業股份有限公司；批號： 1009301；規格：每支1.0g/5ml）；磷酸二氫鉀（北京北化精細化學品有限責任公司；批號：20090810；分析純，純MEDICALRSD 分別為 2.98%、2.06%和 2.78%。2.4 回收率試驗精密量稱取已知含量的供試品溶液 0.5ml，共 9 份，分2011年 9月第 8卷第 27期·藥品鑒定 ·的比值來計算加樣回收率。結果其平均回收率為 98.30%， RSD 為 2.1%（n=9）。2.5 穩定性試驗取維生素 C 對照品儲備液，用流動相稀釋成濃度為20.0 g/ml的溶液，分別在0.0、 0.5、

10、1.0、 1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、 6.0h 進樣，記錄色譜圖。結果 0.03.5h，RSD 為 1.67%， 4h 后峰面積明顯減小。 2.6 重復性試驗取同一批號的樣品 6 份，按含量測定的方法進行重復性試驗，記錄維生素 C 色譜峰面積。結果 RSD 為 2.3%。2.7 樣品含量測定按“2.1項”下色譜條件，進樣 3 個不同批次的樣品含量，結果以標示量計， 3 批樣品標示量含量分別為： 104.1%、100.1%、102.3%，均在 95.0% 105.0%之間。 3 討論在 200 400nm 波長處掃描，維生素 C 在流動相中于 245nm 處有最大吸收，故把

11、檢測波長定為 245nm。經穩定性試驗測定，供試品溶液在實驗溫度（ 18 22）下置棕色量瓶中，分別于 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、6.0h 測定含量，結果 0.03.5h，RSD 為 1.67%，4h 后峰面積明顯減小。表明對照品溶液在3.5h 內穩定。由于維生素 C 見光不穩定，所以須避光操作，以提高該方法的準確性。與傳統的滴定法、紫外分光光度法相比，該法操作簡便、結果準確、專屬性強，可用于維生素 C 含量的測定。參考文獻 1 江明性 .新編實用藥物學 M.2 版.北京:科學出版社 ,2005:536.2 陳新謙 ,金有豫 ,湯光 .新編藥物學

12、M. 北京 :人民衛生出版社 ,2011:630.3郝志耘 ,夏惠娟 .維生素 C 穩定性實驗研究 J.牡丹江醫學院學報 ,1997,18 (1):13-15.4 庫爾班江 ,賽麗曼 .碘量法測水果蔬菜中維生素 C 的含量 J. 伊犁師范學院學報 :自然科學版 ,2007,3:28-32.5 張捷莉 ,高雨 ,侯冬巖 .紫外分光光度法測定維多康中維生素 C 的含量J.食品科學 ,2004,25(11):235-237.6 童裳倫 ,項光宏 ,劉維屏 .間接熒光法測定維生素 CJ. 光譜學與光譜分析,2005,25(4):598-600.7 張秋靈 ,鄒華 ,常文貴 .聚中性紅修飾電極測定維生素

13、C 的方法研究 J.飲料工業 ,2007,72(11):33-36,40.（收稿日期： 2011-04-26）A ：維生素 C 對照品； B：維生素 C 注射液； C：維生素 C 注射液陰性樣品圖 1 維生素 C 對照品、注射液及陰性樣品色譜圖別加入維生素 C 低（ 10g/ml）、中（ 20g/ml）、高（ 30g/ml）三種濃度對照液0.5ml，每個濃度分別配制3 份。混合均勻后，按 “ 2.1項”下的色譜條件進行測定，通過測得量與加入量（上接第47 頁）在診斷胃部早期癌中的作用越來越受到人們的重視，但由于其價格因素，限制了其在基層醫院的應用，而醋酸亞甲藍染色技術簡便、花費少，能清晰顯示病

14、變結構，鏡下診斷符合率與窄帶內鏡相似，有極為廣闊的應用前景。參考文獻 1KudoS,TamuraS.DiagnosisofcolorectaltumorouslesionsbymagnifyingendoscopyJ.GastrictestEndosc,1996,44(1):8-14.2 佐野寧 ,掘松高博 ,片桐敦 ,等 .Narrowbandimaging(NBI)colonoscopy用大腸腫瘍微細血管診斷學J消化器內視鏡 ,2005,17(1):2129-2138.3MachidaH,SanoY,HamamotoY,etal.Narrowbandimaginginthediagnosisofcolorectalmucosallesions:apilotstudyJ.Endoscopy,2004,36(12):1094-1098.4KuznetsovK,LambertR,ReyJF.Narrowbandimaging:potentialandlimitationsJ.Endoscopy,2006,38(6):76-81.5GonoK,ObiT,YamaguchiM,etal.AppearanceofenhancedtissuefeaturesinnarrowbandendoscopicimagingJ.JB