1、蛋白質的結構與功能蛋白質的結構與功能第第 一一 章章Structure and Function of Protein西醫綜合考試大綱西醫綜合考試大綱1.組成蛋白質的組成蛋白質的20種氨基酸的化學結構和分類。種氨基酸的化學結構和分類。2.氨基酸的理化性質。氨基酸的理化性質。3.肽鍵和肽。肽鍵和肽。4.蛋白質的一級結構及高級結構。蛋白質的一級結構及高級結構。5.蛋白質結構和功能的關系。蛋白質結構和功能的關系。6.蛋白質的理化性質蛋白質的理化性質(兩性解離、沉淀、變性、凝兩性解離、沉淀、變性、凝固及呈色反應等固及呈色反應等)。7.分離、純化蛋白質的一般原理和方法。分離、純化蛋白質的一般原理和方法。

2、 蛋白質蛋白質(protein)是由許多氨基酸是由許多氨基酸(amino acids)通過肽鍵通過肽鍵(peptide bond)相連形成的高分子含氮化合物。相連形成的高分子含氮化合物。蛋蛋 白白 質質 的的 分分 子子 組組 成成The Molecular Component of Protein第第 一一 節節元素組成：元素組成：C、H、O、S、N特點：特點：含氮量很接近，平均為含氮量很接近，平均為16。 100克樣品中蛋白質的含量克樣品中蛋白質的含量 ( g % )= 每克樣品含氮克數每克樣品含氮克數 6.251001/16% 蛋白質元素組成的特點蛋白質元素組成的特點一、氨基酸一、氨基酸

3、 組成蛋白質的基本單位組成蛋白質的基本單位存在自然界中的氨基酸有存在自然界中的氨基酸有300余種，但余種，但組成人體蛋白質的氨基酸僅有組成人體蛋白質的氨基酸僅有20種，且均種，且均屬屬 L-氨基酸氨基酸（甘氨酸除外）。（甘氨酸除外）。H甘氨酸甘氨酸CH3丙氨酸丙氨酸L-L-氨基酸的通式氨基酸的通式RC+NH3COO-H 非極性疏水性氨基酸非極性疏水性氨基酸 極性中性氨基酸極性中性氨基酸 酸性氨基酸酸性氨基酸 堿性氨基酸堿性氨基酸（一）氨基酸的分類（一）氨基酸的分類* * 20 20種氨基酸的英文名稱、縮寫符號及分類如下種氨基酸的英文名稱、縮寫符號及分類如下: :甘氨酸甘氨酸 glycine G

4、ly G 5.97丙氨酸丙氨酸 alanine Ala A 6.00纈氨酸纈氨酸 valine Val V 5.96亮氨酸亮氨酸 leucine Leu L 5.98 異亮氨酸異亮氨酸 isoleucine Ile I 6.02 苯丙氨酸苯丙氨酸 phenylalanine Phe F 5.48脯氨酸脯氨酸 proline Pro P 6.30非極性疏水性氨基酸非極性疏水性氨基酸色氨酸色氨酸 tryptophan Trp W 5.89絲氨酸絲氨酸 serine Ser S 5.68酪氨酸酪氨酸 tyrosine Tyr Y 5.66 半胱氨酸半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07 蛋

5、氨酸蛋氨酸 methionine Met M 5.74天冬酰胺天冬酰胺 asparagine Asn N 5.41 谷氨酰胺谷氨酰胺 glutamine Gln Q 5.65 蘇氨酸蘇氨酸 threonine Thr T 5.602. 極性中性氨基酸極性中性氨基酸天冬氨酸天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97谷氨酸谷氨酸 glutamic acid Glu E 3.22賴氨酸賴氨酸 lysine Lys K 9.74精氨酸精氨酸 arginine Arg R 10.76組氨酸組氨酸 histidine His H 7.593. 酸性氨基酸酸性氨基酸4. 堿性氨基酸堿性氨基酸

6、幾種特殊氨基酸幾種特殊氨基酸 脯氨酸脯氨酸（亞氨基酸）（亞氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3 半胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫鍵二硫鍵-HH-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3（二）氨基酸的理化性質（二）氨基酸的理化性質1. 兩性解離及等電點兩性解離及等電點等電點等電點(isoelectric poi

7、nt, pI) 在某一在某一pH的溶液中，氨基酸解離成的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時溶液的兼性離子，呈電中性。此時溶液的pH值值稱為該氨基酸的稱為該氨基酸的等電點等電點。pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性離子氨基酸的兼性離子 陽離子陽離子陰離子陰離子CHNH2COOHR CHNH2COOHRCHNH3+COO-R CHNH3+COO-RCHNH2COO-R CHNH2COO-RCH COOHRNH3+CH COOHRNH3+（AA0）+OH-（AA-）+OH-（AA+）CHCO

8、OHCOOHCHCH2NH3+CHCOOHCOO-CHCH2NH3+CHCOO-COO-CHCH2NH3+ CHCOO-COO-CHCH2NH2+OH-（AA2-）pK1pK2pKRpK12.09 pKR3.86 pK29.822.9723.862.092pKpKpI R1天冬氨酸等電點天冬氨酸等電點(pI)的計算的計算2. 紫外吸收紫外吸收 色氨酸、酪氨酸色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在的最大吸收峰在 280 nm 附近。附近。大多數蛋白質含大多數蛋白質含有這兩種氨基酸殘基，有這兩種氨基酸殘基，所以測定蛋白質溶液所以測定蛋白質溶液280nm的光吸收值是分的光吸收值是分析溶液中蛋白質含量析溶液中蛋

9、白質含量的快速簡便的方法。的快速簡便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收芳香族氨基酸的紫外吸收3. 茚三酮反應茚三酮反應 氨基酸與茚三酮水合物共熱，茚三酮水氨基酸與茚三酮水合物共熱，茚三酮水合物被還原，其還原物可與氨基酸分解產生合物被還原，其還原物可與氨基酸分解產生的氨結合，再與另一分子茚三酮縮合生成的氨結合，再與另一分子茚三酮縮合生成藍藍紫色紫色化合物，其最大吸收峰在化合物，其最大吸收峰在570nm處。由處。由于此吸收峰值與氨基酸釋放出的氨量成正比，于此吸收峰值與氨基酸釋放出的氨量成正比，因此可作為氨基酸定量分析方法。因此可作為氨基酸定量分析方法。茚三酮反應茚三酮反應 氨基酸茚三酮氨基酸茚三酮H2

10、O加熱加熱還原性茚三酮還原性茚三酮H2O -NH-茚三酮茚三酮H2O藍紫色化合物藍紫色化合物二、肽二、肽* 肽鍵肽鍵(peptide bond)是由一個氨基酸的是由一個氨基酸的 -羧基與另一個氨基酸的羧基與另一個氨基酸的 -氨基脫水縮合氨基脫水縮合而形成的化學鍵。而形成的化學鍵。（一）肽（一）肽(peptide)NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH-CH-CHOHO OH甘甘氨氨酸酸+-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽鍵NH2-CH-C-N-CH-COOHHHHONH2-CH-C-N-CH-COOHHHHO* * 肽肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化是由

11、氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。合物。* * 兩分子氨基酸縮合形成兩分子氨基酸縮合形成二肽二肽，三分子氨，三分子氨基酸縮合則形成基酸縮合則形成三肽三肽* * 由十個以內氨基酸相連而成的肽稱為由十個以內氨基酸相連而成的肽稱為寡寡肽肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連由更多的氨基酸相連形成的肽稱形成的肽稱多肽多肽(polypeptide)。* 多肽鏈多肽鏈(polypeptide chain)是指許多氨基酸是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而形成的一種鏈狀結構。之間以肽鍵連接而形成的一種鏈狀結構。N 末端：多肽鏈中有末端：多肽鏈中有自由氨基自由氨基的一端的一端C 末端：多肽鏈中有末端：多

12、肽鏈中有自由羧基自由羧基的一端的一端多肽鏈有兩端多肽鏈有兩端 肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團不全，被稱為團不全，被稱為氨基酸殘基氨基酸殘基(residue)。多肽鏈中間有氨基酸殘基多肽鏈中間有氨基酸殘基多肽鏈多肽鏈NH2-CH-C-N-CH-COHHHONH2-CH-C-N-CH-COHHHHO-CH-C-N-CH-COOHHHHON-CH-C-N-CH-COOHHHHO氨基酸殘基氨基酸殘基C 末端末端N 末端末端谷胱甘肽谷胱甘肽(glutathione, GSH)蛋蛋 白白 質質 的的 分分 子子 結結 構構The Molecular Structur

13、e of Protein 第第 二二 節節蛋白質的分子結構包括蛋白質的分子結構包括 一級結構一級結構(primary structure)二級結構二級結構(secondary structure)三級結構三級結構(tertiary structure)四級結構四級結構(quaternary structure)高級高級結構結構（一）定義（一）定義蛋白質的一級結構指多肽鏈中氨基酸的排列蛋白質的一級結構指多肽鏈中氨基酸的排列順序。順序。一、蛋白質的一級結構一、蛋白質的一級結構（二）主要的化學鍵（二）主要的化學鍵肽鍵，有些蛋白質還包括二硫鍵。肽鍵，有些蛋白質還包括二硫鍵。 二、蛋白質的二級結構二、蛋

14、白質的二級結構蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間結構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空結構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側鏈的構象間位置，并不涉及氨基酸殘基側鏈的構象 。9 9一）定義一）定義 （二）主要的化學鍵（二）主要的化學鍵： 氫鍵氫鍵 （三）肽單元（三）肽單元參與肽鍵的參與肽鍵的6個原子個原子C 1、C、O、N、H、C 2位于同一平面，位于同一平面，C 1和和C 2在平面上所處的位置在平面上所處的位置為反式為反式(trans)構型，此同一平構型，此同一平面上的面上的6個原子構成了所謂的個原子構成了所謂的肽肽單元單元 (peptid

15、e unit) 。 （四）蛋白質二級結構的主要形式（四）蛋白質二級結構的主要形式 - -螺旋螺旋 ( -helix ) - -折疊折疊 ( -pleated sheet ) - -轉角轉角 ( -turn ) 無規卷曲無規卷曲 ( random coil ) （五）模體（五）模體在許多蛋白質分子中，可發現二個或在許多蛋白質分子中，可發現二個或三個具有二級結構的肽段，在空間上相互三個具有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個特殊的空間構象，被稱為接近，形成一個特殊的空間構象，被稱為模體模體(motif)。三、蛋白質的三級結構三、蛋白質的三級結構疏水鍵、離子鍵、氫鍵和疏水鍵、離子鍵、氫鍵和 V

16、an der Waals力等。力等。 （二）主要的化學鍵（二）主要的化學鍵整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。（一）（一） 定義定義 纖連蛋白分子的結構域纖連蛋白分子的結構域 （三）結構域（三）結構域大分子蛋白質的三級結構常可分割成一個或大分子蛋白質的三級結構常可分割成一個或數個球狀或纖維狀的區域，折疊得較為緊密，各數個球狀或纖維狀的區域，折疊得較為緊密，各行使其功能，稱為結構域行使其功能，稱為結構域(domain) 。（四）分子伴侶（四）分子伴侶分子伴侶分子伴侶(chape

17、ron)通過提供一個保護環境從通過提供一個保護環境從而加速蛋白質折疊成天然三級構象或形成四級結構。而加速蛋白質折疊成天然三級構象或形成四級結構。四、蛋白質的四級結構四、蛋白質的四級結構蛋白質分子中各亞基的空間排布及亞基接蛋白質分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質的四級蛋白質的四級結構結構。有些蛋白質分子含有二條或多條多肽鏈，有些蛋白質分子含有二條或多條多肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級結構，稱為蛋白每一條多肽鏈都有完整的三級結構，稱為蛋白質的質的亞基亞基。（一）概念（一）概念（二）主要的化學鍵（二）主要的化學鍵 氫鍵氫鍵和和離子鍵離子鍵蛋

18、白質結構與功能的關系蛋白質結構與功能的關系The Relation of Structure and Function of Protein第第 三三 節節一級結構是空間構象的基礎一級結構是空間構象的基礎 一、蛋白質一級結構與功能的關系一、蛋白質一級結構與功能的關系 空間構象決定功能空間構象決定功能 一級結構相似的蛋白質，其空間構象與功能也相一級結構相似的蛋白質，其空間構象與功能也相似。例如，不同哺乳動物的胰島素。似。例如，不同哺乳動物的胰島素。一級結構中重要氨基酸改變，導致空間構象及功一級結構中重要氨基酸改變，導致空間構象及功能改變。例如，鐮刀形紅細胞貧血。能改變。例如，鐮刀形紅細胞貧血。一

19、級結構中非重要氨基酸改變，不導致空間構象一級結構中非重要氨基酸改變，不導致空間構象及功能改變。例如，不同物種的及功能改變。例如，不同物種的Cyt C。比較蛋白質的一級結構，可以了解物種進化間的比較蛋白質的一級結構，可以了解物種進化間的關系。物種間越接近，一級結構越相似，其空間關系。物種間越接近，一級結構越相似，其空間構象與功能也相似。例如，不同物種的構象與功能也相似。例如，不同物種的Cyt C。（一）一級結構與功能的關系（一）一級結構與功能的關系Hb與與Mb都能可逆地與都能可逆地與O2結合，結合， Hb與與O2結合后稱為結合后稱為氧合氧合Hb。氧合。氧合Hb占總占總Hb的百的百分數（稱分數（稱

20、百分飽和度百分飽和度）隨）隨O2濃度變化而改變。濃度變化而改變。（二）血紅蛋白的構象變化與結合氧（二）血紅蛋白的構象變化與結合氧 肌紅蛋白肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線的氧解離曲線* 協同效應協同效應(cooperativity) 一個寡聚體蛋白質的一個亞基與其配體結合一個寡聚體蛋白質的一個亞基與其配體結合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結合能后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結合能力的現象，稱為力的現象，稱為協同效應協同效應。 如果是促進作用則稱為如果是促進作用則稱為正協同效應正協同效應 (positive cooperativity)如果是抑制作用則稱為如果

21、是抑制作用則稱為負協同效應負協同效應 (negative cooperativity)變構效應變構效應(allosteric effect)寡聚體蛋白質的一個亞基與其配體結合后，寡聚體蛋白質的一個亞基與其配體結合后，引起亞基構象變化的現象，稱為引起亞基構象變化的現象，稱為變構效應變構效應。引起變構效應的小分子物質稱為引起變構效應的小分子物質稱為變構劑變構劑或或效效應劑應劑。受小分子物質作用發生構象變化的蛋白質稱受小分子物質作用發生構象變化的蛋白質稱為為變構蛋白變構蛋白。（三）蛋白質構象疾病與分子病（三）蛋白質構象疾病與分子病 蛋白質構象疾病蛋白質構象疾病：指蛋白質的一級結構：指蛋白質的一級結構

22、不變，但是由于蛋白質的折疊發生錯誤，致不變，但是由于蛋白質的折疊發生錯誤，致使蛋白質的構象發生改變、功能改變而導致使蛋白質的構象發生改變、功能改變而導致的疾病。的疾病。分子病分子病：指蛋白質的一級結構改變，使：指蛋白質的一級結構改變，使蛋白質的構象發生改變、功能改變而導致的蛋白質的構象發生改變、功能改變而導致的疾病。疾病。第四節第四節蛋白質的理化性質與分離純化蛋白質的理化性質與分離純化The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein（一）蛋白質的兩性電離（一）蛋白質的兩性電離 一、理化

23、性質一、理化性質 蛋白質分子除兩端的氨基和羧基可解離外，蛋白質分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側鏈中某些基團，在一定的溶液氨基酸殘基側鏈中某些基團，在一定的溶液pHpH條條件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。 * 蛋白質的等電點蛋白質的等電點( isoelectric point, pI) 當蛋白質溶液處于某一當蛋白質溶液處于某一pH時，蛋白質解離成時，蛋白質解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的荷為零，此時溶液的pH稱為稱為蛋白質的等電點。蛋白質的等電點。（二）蛋白質的膠體

24、性質（二）蛋白質的膠體性質 蛋白質屬于生物大分子之一，分子量可自蛋白質屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至萬至100萬之巨，其分子的直徑可達萬之巨，其分子的直徑可達1100nm，為膠粒范圍之內。，為膠粒范圍之內。 * * 蛋白質膠體穩定的因素蛋白質膠體穩定的因素顆粒表面電荷顆粒表面電荷水化膜水化膜+帶正電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質在等電點的蛋白質在等電點的蛋白質水化膜水化膜+帶正電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質不穩定的蛋白質顆粒不穩定的蛋白質顆粒酸酸堿堿酸酸堿堿酸酸堿堿脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質的聚沉

25、溶液中蛋白質的聚沉（三）蛋白質的變性、沉淀和凝固（三）蛋白質的變性、沉淀和凝固 * 蛋白質的變性蛋白質的變性(denaturation)在某些物理和化學因素作用下，其特定的在某些物理和化學因素作用下，其特定的空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生物活性的喪失。物活性的喪失。 造成變性的因素造成變性的因素如如加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、重金屬離子及生物堿試劑等重金屬離子及生物堿試劑等 。 變性的本質變性的本質 次級鍵（非共價鍵和二硫鍵）

26、破壞，主鍵次級鍵（非共價鍵和二硫鍵）破壞，主鍵（肽鍵）不破壞，即蛋白質的空間結構改變，（肽鍵）不破壞，即蛋白質的空間結構改變，一級結構不改變。一級結構不改變。若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質仍可恢復或部分恢復其原有的構后，蛋白質仍可恢復或部分恢復其原有的構象和功能，稱為象和功能，稱為復性復性(renaturation) 。* * 蛋白質沉淀蛋白質沉淀在一定條件下，蛋白疏水側鏈暴露在外，肽在一定條件下，蛋白疏水側鏈暴露在外，肽鏈融會相互纏繞繼而聚集而從溶液中析出，稱為鏈融會相互纏繞繼而聚集而從溶液中析出，稱為沉淀。沉淀。變性的蛋白質易于沉淀，有時蛋白

27、質發生沉變性的蛋白質易于沉淀，有時蛋白質發生沉淀，但并不變性。淀，但并不變性。 * 蛋白質的凝固作用蛋白質的凝固作用(protein coagulation) 蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。 （四）蛋白質的紫外吸收（四）蛋白質的紫外吸收由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收波長處有特征性吸收峰。蛋白質的峰。蛋白質的OD280與其濃度呈正比關系，因與其濃度呈正比關系，因此可作蛋白質定

28、量測定。此可作蛋白質定量測定。（五）蛋白質的呈色反應（五）蛋白質的呈色反應茚三酮反應茚三酮反應(ninhydrin reaction) 蛋白質經水解后產生的蛋白質經水解后產生的氨基酸氨基酸也可發生茚也可發生茚三酮反應。三酮反應。 雙縮脲反應雙縮脲反應(biuret reaction)蛋白質和多肽分子中蛋白質和多肽分子中肽鍵肽鍵在稀堿溶液中與在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現紫色或紅色，此反應稱為硫酸銅共熱，呈現紫色或紅色，此反應稱為雙雙縮脲反應縮脲反應，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解程度。程度。二、蛋白質的分離和純化二、蛋白質的分離和純化（一）透析及超濾法（一）透析

29、及超濾法* 透析透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。開的方法。* * 超濾法超濾法 應用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留應用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質溶液的目的。分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質溶液的目的。（二）丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀（二）丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀 *使用使用丙酮沉淀丙酮沉淀時，必須在時，必須在04低溫下進行，低溫下進行，丙酮用量一般丙酮用量一般10倍于蛋白質溶液體積。蛋白倍于蛋白質溶液體積。蛋白質被丙酮沉淀后，應立即分離。除了丙酮以質被丙酮沉淀后，應立

30、即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。外，也可用乙醇沉淀。 *鹽析鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液，使蛋白質表面或氯化鈉等加入蛋白質溶液，使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導致蛋白質電荷被中和以及水化膜被破壞，導致蛋白質沉淀。沉淀。 * * 免疫沉淀法：免疫沉淀法：將某一純化蛋白質免疫動物將某一純化蛋白質免疫動物可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識別相應的抗原蛋白，并形成體識別相應的抗原蛋白，并形成抗原抗體抗原抗體復合物復合物的性質，可從蛋白質混合溶液中分的性質，可從蛋白質混合

31、溶液中分離獲得抗原蛋白。離獲得抗原蛋白。 （三）電泳（三）電泳蛋白質在高于或低于其蛋白質在高于或低于其pIpI的溶液中為帶電的溶液中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術質的技術, , 稱為稱為電泳電泳(elctrophoresis) 。根據支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝根據支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。膠電泳等。 幾種重要的蛋白質電泳幾種重要的蛋白質電泳*SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于蛋白質，常用于蛋白質分子量的測定。分子

32、量的測定。*等電聚焦電泳等電聚焦電泳，通過蛋白質等電點的差異，通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。而分離蛋白質的電泳方法。*雙向凝膠電泳雙向凝膠電泳是蛋白質組學研究的重要技是蛋白質組學研究的重要技術。術。（四）層析（四）層析層析層析(chromatography)分離蛋白質的原理分離蛋白質的原理待分離蛋白質溶液（流動相）經過一個待分離蛋白質溶液（流動相）經過一個固態物質（固定相）時，根據溶液中待分離的固態物質（固定相）時，根據溶液中待分離的蛋白質顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待蛋白質顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質組分在兩相中反復分配，并以不分離的蛋白質組分在兩相中反復分配，并以不同速