1、整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 第一節第一節 概概 述述 一、定義一、定義：根據溶液中物質分子或離子對紫外根據溶液中物質分子或離子對紫外和可見光的吸收來研究物質的組成和結構的方和可見光的吸收來研究物質的組成和結構的方法。包括比色分析法和紫外法。包括比色分析法和紫外- -可見分光光度法。可見分光光度法。第三章 紫外-可見吸收光譜法光譜名稱波長范圍遠紫外光10200nm近紫外光200400nm可見光400780nm整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College

2、 of Chemistry & Material Science遠紫外光遠紫外光( (10200nm) )：可被大氣中的水：可被大氣中的水氣、氮、氧和二氧化碳等所吸收，只能在氣、氮、氧和二氧化碳等所吸收，只能在真空中研究，稱為真空紫外光。真空中研究，稱為真空紫外光。近紫外：近紫外：200-400nm 二、波長范圍二、波長范圍整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 可見光：可見光：人眼能感覺到的波長人眼能感覺到的波長400-780nm的光。的光。白光白光：由紅、橙、黃、綠、青、藍、紫

3、：由紅、橙、黃、綠、青、藍、紫光按一定比例混合而成的復合光。光按一定比例混合而成的復合光。整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 看到的是固體物質看到的是固體物質反射或溶液透射反射或溶液透射的光。的光。物質（溶液）吸收的光是物質（溶液）吸收的光是反射或透射光反射或透射光的互補光的互補光。溶液顏色的深淺，取決于溶液中吸光溶液顏色的深淺，取決于溶液中吸光物質濃度的高低。物質濃度的高低。 三、物質的顏色與光的關系三、物質的顏色與光的關系基于物質對光的選擇性吸收基于物質對光的選擇性吸收整理課件 H

4、EBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 物質對光的選擇性吸收物質對光的選擇性吸收顏色與光的關系：顏色與光的關系：白光全吸收白光全吸收白光全透過白光全透過吸收黃光吸收黃光整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science /nm 吸收光顏色吸收光顏色 物質顏色物質顏色 400-450紫黃綠 450-480藍藍黃黃 480-490綠藍綠藍橙橙 490-500藍綠藍綠紅紅 500-560綠綠紅紫紅紫 560-58

5、0黃綠黃綠紫紫 580-610黃黃藍藍 610-650橙橙綠藍綠藍 650-780紅紅藍綠藍綠 物質顏色與吸收光顏色關系物質顏色與吸收光顏色關系整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 四、分析方法四、分析方法利用比較溶液顏色深淺來測定溶液中某組利用比較溶液顏色深淺來測定溶液中某組分的含量的分析方法，稱作分的含量的分析方法，稱作比色分析法比色分析法

6、。比色法：比色法：目視比色；目視比色；分光光度法：分光光度法：利用分光光度計進行吸收光利用分光光度計進行吸收光譜分析的方法。譜分析的方法。依據：依據：物質對光的選擇性吸收作用。物質對光的選擇性吸收作用。整理課件五、吸收光譜曲線五、吸收光譜曲線 將各種波長的單色光依次通過一定將各種波長的單色光依次通過一定濃度的溶液，并測定每一波長下溶液對光的濃度的溶液，并測定每一波長下溶液對光的吸收程度吸收程度( () )。以波長以波長( ( ) )為橫坐標，為橫坐標，A為縱坐標作圖，為縱坐標作圖，得到的曲線，稱得到的曲線，稱吸收光譜曲線吸收光譜曲線。 最大吸收波長最大吸收波長max ： 光吸收程度最大處對應的

7、波長。光吸收程度最大處對應的波長。HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science整理課件HEBEI NORMAL UNIVESITY, College of Chemistry & Material Science 分光光度法分光光度法 儀器：儀器：分光光度計分光光度計測定：吸收光譜曲線測定：吸收光譜曲線波譜區：紫外、可見波譜區：紫外、可見應用：定性、定量分析、應用：定性、定量分析、 結構分析結構分析整理課件 HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistr

8、y & Material Science無色溶液對光有無吸收？無色溶液對光有無吸收？醋酸水溶液：吸收一定波長的紫外光，醋酸水溶液：吸收一定波長的紫外光，分光光度法測定。分光光度法測定。190 200 210 220 230 240 250 260 2700.00.20.40.60.81.01.2Absorbance W avelength /nm整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 紫外吸收光譜的產生：分子外層電子能級紫外吸收光譜的產生：分子外層電子能級躍遷的結果，躍遷的結果，電

9、子躍遷的同時，伴隨著振電子躍遷的同時，伴隨著振動轉動能級的躍遷動轉動能級的躍遷帶狀光譜。帶狀光譜。第二節第二節 紫外紫外- -可見吸收光譜可見吸收光譜整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 分子吸收光譜分子吸收光譜在分子中，除了電子相對于原子核的運在分子中，除了電子相對于原子核的運動外，還有核間相對位移引起的振動和動外，還有核間相對位移引起的振動和轉動。轉動。這三種運動能量都是量子化的，并對應這三種運動能量都是量子化的，并對應有一定能級。下圖為分子的能級示意圖。有一定能級。下圖為分子的能級

10、示意圖。整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science13整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science圖中表示了不同能量的電子能級。在每一電子圖中表示了不同能量的電子能級。在每一電子能級上有許多間距較小的振動能級，能級上有許多間距較小的振動能級，在每一振動能級上又有許多更小的轉動能級。在每一振動能級上又有許多更小的轉動能級。E電子電子：電子能級差：電子能級差 E振動振動：振動能級差：振動能級差 E轉

11、動轉動：轉動能級差：轉動能級差即有即有 E電子電子 E振動振動 E轉動轉動E分子分子 = E電子電子 + E振動振動 + E轉動轉動整理課件 HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 通常，分子是處在基態振動能級上。通常，分子是處在基態振動能級上。當用紫外、可見光照射分子時，電子可以從當用紫外、可見光照射分子時，電子可以從基態激發到激發態的任一振動（或不同的轉基態激發到激發態的任一振動（或不同的轉動）能級上。動）能級上。因此，電子能級躍遷產生的吸收光譜，包括因此，電子能級躍遷產生的吸收光譜，包括了大

12、量譜線，并由于這些譜線的重疊而成為了大量譜線，并由于這些譜線的重疊而成為連續的吸收帶，這就是為什么分子的紫外、連續的吸收帶，這就是為什么分子的紫外、可見光譜不是線光譜，而是可見光譜不是線光譜，而是帶狀光譜帶狀光譜的原因。的原因。整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 不同物質具有不同的分子結構，選擇性吸收不同物質具有不同的分子結構，選擇性吸收 不同波長的光，因而具有不同的吸收光譜不同波長的光，因而具有不同的吸收光譜 結構鑒定結構鑒定光選擇吸收的性質光選擇吸收的性質：反映了分子內部結構反映了

13、分子內部結構的差異，各物質分子能級千差萬別，內部的差異，各物質分子能級千差萬別，內部各能級間的間隔也不相同。各能級間的間隔也不相同。整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science （一）分子中電子的躍遷類型（一）分子中電子的躍遷類型 O n電子（電子（n軌道）軌道） 有機物有機物 H C 電子（電子（ 軌道）軌道） H 電子（電子（ 軌道）軌道） 整理課件 * 反鍵軌道反鍵軌道 * 反鍵軌道反鍵軌道 n非鍵軌道非鍵軌道 成鍵軌道成鍵軌道 成鍵軌道成鍵軌道* * n* n* （一）分子中電子的躍遷類

14、型（一）分子中電子的躍遷類型整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 躍遷躍遷 所需能量最大；吸收遠紫外光所需能量最大；吸收遠紫外光 吸收波長吸收波長 n * * n *有機化合物的紫外有機化合物的紫外- -可見吸收光譜法分析依據可見吸收光譜法分析依據 * n* 整理課件內容回顧內容回顧根據溶液中根據溶液中物質分子或離子物質分子或離子對對紫外和可見光紫外和可見光的的吸收吸收來研究物質的組成和結構的方法。包來研究物質的組成和結構的方法。包括比色分析法和紫外括比色分析法和紫外- -可見分光光度法

15、。可見分光光度法。分子吸收光譜分子吸收光譜電子電子- -振振- -轉光譜轉光譜電子光譜：分子中成鍵電子躍遷電子光譜：分子中成鍵電子躍遷整理課件躍遷能量大小：躍遷能量大小： * n * * n *有機化合物的紫外有機化合物的紫外- -可見吸收光譜法分析依據可見吸收光譜法分析依據 * n* * 強吸收帶強吸收帶 不飽和鍵不飽和鍵 n* 弱吸收帶弱吸收帶 含雜原子的不飽和鍵含雜原子的不飽和鍵有機物分子：有機物分子：整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 產生產生* * 、 n n* *的有機分子

16、特征：的有機分子特征：包含不飽和包含不飽和鍵鍵生色團：含有生色團：含有鍵的不飽和基團。鍵的不飽和基團。一些生色團的特征吸收峰：一些生色團的特征吸收峰：P18 表表3-2整理課件P18 表表3-2：含雜原子的不飽和鍵的含雜原子的不飽和鍵的n n* *在紫外區在紫外區270-350nm 醛、酮特征吸收帶醛、酮特征吸收帶孤立雙鍵孤立雙鍵* * 吸收峰出現在遠紫外區吸收峰出現在遠紫外區* *在分析中的意義？在分析中的意義？1-己烯己烯 177 nm 1180011800 L.mol-1.cm-11，5-己二烯己二烯 178 nm 26000 26000 L.mol-1.cm-1 1，3，5-己三烯己三

17、烯 268 nm 427000 L.mol-1.cm-1 整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science （二）生色團的共軛作用（二）生色團的共軛作用 共軛作用：一種化合物中有兩個或兩個以共軛作用：一種化合物中有兩個或兩個以上生色團時，若兩個生色團發生共軛作用，上生色團時，若兩個生色團發生共軛作用，則原來的吸收峰消失，在則原來的吸收峰消失，在長波方向長波方向產生產生吸吸光度顯著加強光度顯著加強的新的吸收峰。的新的吸收峰。 共軛體系中，共軛體系中， 電子具有更大的離域性，電子具有更大的離域性，使得使

18、得 * 軌道能量降低，導致吸收峰向軌道能量降低，導致吸收峰向長波長波方向移動方向移動。整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 藍移、紅移藍移、紅移 有機化合物的吸收譜帶常常因引入有機化合物的吸收譜帶常常因引入取代基取代基或改或改變變溶劑溶劑使使maxmax和吸收強度發生變化和吸收強度發生變化: :maxmax向長波方向移動稱為向長波方向移動稱為紅移紅移，向短波方向，向短波方向移動稱為移動稱為藍移藍移 ( (紫移紫移) )吸收強度即摩爾吸光系數吸收強度即摩爾吸光系數 增大或減小的現象增大或減

19、小的現象分別稱為分別稱為增色效應增色效應或或減色效應減色效應。整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science單獨的單獨的羰基羰基 max=280 nmCH3CH=CHCHO max=220 nm max=322 nm 15000L.mol-1.cm-1 28L.mol-1.cm-1羰基雙鍵和烯鍵共軛羰基雙鍵和烯鍵共軛 使使* n* 吸收峰吸收峰紅移、產生增色效應紅移、產生增色效應。整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Mat

20、erial Science max (nm) max(L.mol-1.cm-1) (K) E 帶帶 * 184 nm 50000 E1吸收帶吸收帶 無精細結構無精細結構 204 nm 7000 E2吸收帶吸收帶 低分辨率精細結構低分辨率精細結構 B帶帶 254 nm 200 B吸收帶吸收帶 * 和苯環和苯環 精細結構吸收帶精細結構吸收帶 振動能級躍遷重疊振動能級躍遷重疊共軛封閉體系（苯）特征吸收帶共軛封閉體系（苯）特征吸收帶 整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 整理課件HEBEI NO

21、RMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science整理課件 HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material ScienceP20 表表3-4 某些苯衍生物的特征吸收某些苯衍生物的特征吸收有取代基時有取代基時 E 帶紅移帶紅移 B帶精細結構簡化帶精細結構簡化 強強度增加度增加 紅移紅移 助助 色色 團團：含有含有n電子的基團。它們本電子的基團。它們本身沒有生色功能，但當它們與生色身沒有生色功能，但當它們與生色團相連時，就會發生團相連時，就會發生n-共軛作

22、用，共軛作用，使生色團的吸收波長紅移，且強度使生色團的吸收波長紅移，且強度增加增加。 整理課件 HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science26整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science （三）溶劑對吸收光譜的影響 max(正己烷正己烷) max(氯仿氯仿) max(甲醇甲醇) max(水水) *230238237243n *3293153093051 1、溶劑極性對最大吸收波長的影響、溶劑極性對最大吸

23、收波長的影響CHCH3CHCH3COCH3異丙叉丙酮的溶劑效應異丙叉丙酮的溶劑效應整理課件 溶劑極性的影響對對maxmax影響：影響：n-n-* *躍遷：溶劑極性躍遷：溶劑極性，maxmax藍移；藍移；-* *躍遷：溶劑極性躍遷：溶劑極性 ，maxmax紅移紅移整理課件溶劑極性對吸收波長的影響，也是溶劑極性對吸收波長的影響，也是區別區別*躍遷和躍遷和n*躍遷的方躍遷的方法之一。法之一。 整理課件 HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science2 2、溶劑極性對光譜精細結構的影響、溶劑極性對光譜精細結構的影

24、響氣態：分子間作用力弱，振動、轉動氣態：分子間作用力弱，振動、轉動光譜均能表現出來光譜均能表現出來精細結精細結構清晰構清晰液態：液態： 非極性溶劑：溶劑化作用限制非極性溶劑：溶劑化作用限制了分子的轉動了分子的轉動 溶劑極性增大，分子振動受限，溶劑極性增大，分子振動受限，精細結構逐漸消失精細結構逐漸消失整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science極性溶劑使精細結構消失極性溶劑使精細結構消失整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry &

25、 Material Science溶劑選擇原則溶劑選擇原則在吸收光譜圖或數據表中，注明溶劑。在吸收光譜圖或數據表中，注明溶劑。 選用低極性溶劑，以獲得特征精細結構；選用低極性溶劑，以獲得特征精細結構；很好溶解被測物，具有良好化學和光化學穩很好溶解被測物，具有良好化學和光化學穩定性；定性；溶劑在樣品的吸收光譜區無明顯吸收。溶劑在樣品的吸收光譜區無明顯吸收。比較未知物質與已知物質的吸收光譜，必須比較未知物質與已知物質的吸收光譜，必須采用相同的溶劑采用相同的溶劑整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Scien

26、ce 二、無機化合物的吸收光譜二、無機化合物的吸收光譜金屬離子絡合物金屬離子絡合物的吸收光譜的吸收光譜（一）（一）d-d 配位場躍遷配位場躍遷 過渡金屬離子具有未充滿的過渡金屬離子具有未充滿的d軌道軌道 受配位體配位場的影響，原來能量相同的受配位體配位場的影響，原來能量相同的d軌道發生能級分裂，分裂后軌道發生能級分裂，分裂后d軌道之間的能軌道之間的能量差稱為量差稱為分裂能分裂能 整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science 32 配位體的配位場越強，分裂能越大，吸收配位體的配位場越強，分裂能越大

27、，吸收峰波長就越短。峰波長就越短。 配位體配位場強弱順序：配位體配位場強弱順序：I-Br-Cl-F-OH-C2O42-=H2OSCN-吡啶吡啶=NH3乙二乙二胺胺聯吡啶聯吡啶鄰二氮菲鄰二氮菲NO2-CN- d-d躍遷概率小，躍遷概率小， 小，小，0.1-100之間，定量之間，定量分析中應用價值不大分析中應用價值不大整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science（二）電荷轉移躍遷（二）電荷轉移躍遷 電荷轉移躍遷：絡合物中電荷轉移躍遷：絡合物中配位體和金配位體和金屬離子屬離子之間，一方的電子向主要屬于

28、之間，一方的電子向主要屬于另一方的軌道躍遷另一方的軌道躍遷 電荷轉移躍遷的電荷轉移躍遷的 maxmax大，大，104以上以上 整理課件Mn+ + Lb- M(n-1)+L(b-1)-Fe3+(SCN-)2+ Fe2+(SCN)2+HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Scienceh h 整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of C

29、hemistry & Material Science（三）金屬離子影響下的配位體（三）金屬離子影響下的配位體 *躍遷躍遷 配位體一般含有生色團、助色團，與金屬配位體一般含有生色團、助色團，與金屬離子配位后，配位體的共軛結構發生改變，離子配位后，配位體的共軛結構發生改變，導致吸收光譜藍移或紅移導致吸收光譜藍移或紅移 定量分析要求：絡合物與配位劑的最大吸定量分析要求：絡合物與配位劑的最大吸收波長之差（反襯度）應在收波長之差（反襯度）應在60nm以上以上整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Scie

30、nce 第三節第三節 紫外紫外-可見分光光度計可見分光光度計一、基本部件一、基本部件光源：提供分子激發所需輻射能量光源：提供分子激發所需輻射能量單色器：由連續光源中分離出所需單色光單色器：由連續光源中分離出所需單色光吸收池：盛放試樣吸收池：盛放試樣檢測器：檢測光信號檢測器：檢測光信號,光信號轉化為電信號光信號轉化為電信號信號顯示器：放大，讀數信號顯示器：放大，讀數整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemi

31、stry & Material ScienceUV-2501PC 紫外可見分光光度計紫外可見分光光度計整理課件（一）光（一）光 源源 要求：發射足夠強度的連續光譜要求：發射足夠強度的連續光譜 良好穩定性和較長使用壽命良好穩定性和較長使用壽命 可見區：鎢燈可見區：鎢燈 發射發射3202500nm連續光譜連續光譜 紫外區：氫、氘燈紫外區：氫、氘燈 發射發射180375nm連續光譜連續光譜HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science整理課件 （二）單色器單色器 入射狹縫：光源的光由此進入單色器；入射狹

32、縫：光源的光由此進入單色器； 準光裝置：使入射光成為平行光束；準光裝置：使入射光成為平行光束； 色散元件：復合光分解成單色光；色散元件：復合光分解成單色光；光柵或棱鏡光柵或棱鏡 聚焦裝置：將所得單色光聚焦至出射狹縫；聚焦裝置：將所得單色光聚焦至出射狹縫； 出射狹縫出射狹縫HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science HEBEI NORMAL UNIVERSITY

33、, College of Chemistry & Material Science準直透鏡準直透鏡棱鏡棱鏡聚焦透鏡聚焦透鏡出射狹縫出射狹縫 6整理課件 （三）吸收池（三）吸收池 盛放溶液并提供一定吸光厚度的器皿。盛放溶液并提供一定吸光厚度的器皿。 石英吸收池：紫外和可見區石英吸收池：紫外和可見區 玻璃吸收池：可見區玻璃吸收池：可見區為減少光的損失，吸收池的光學面必須完全垂直為減少光的損失，吸收池的光學面必須完全垂直于光束方向于光束方向。整理課件 HEBEI NORMAL UNIVERSITY 在所用的波長范圍內有良好的透光性，在所用的波長范圍內有良好的透光性，兩透光面有精確的光程。兩透

34、光面有精確的光程。在高精度的分析測定中（紫外區尤其重在高精度的分析測定中（紫外區尤其重要），吸收池要挑選配對。因為吸收池要），吸收池要挑選配對。因為吸收池材料的本身吸光特征以及吸收池的光程材料的本身吸光特征以及吸收池的光程長度的精度等對分析結果都有影響。長度的精度等對分析結果都有影響。規格：規格：0.5、2.0、3.0、5.0cm等。等。整理課件整理課件（四）檢測器（四）檢測器 將光信號變成可測的電信號，常用的有光電將光信號變成可測的電信號，常用的有光電池、光電管或光電倍增管池、光電管或光電倍增管1 1、光電管、光電管 陰極表面有光敏材料，光照射光敏材料，陰陰極表面有光敏材料，光照射光敏材料，

35、陰極發射電子，在陰陽兩極加壓，形成光電流極發射電子，在陰陽兩極加壓，形成光電流 藍敏光電管藍敏光電管（220-625nm）、紅敏光電管、紅敏光電管（600-1200nm）HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science整理課件HEBEI NORMAL UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science真空光電管90V DC直流放大直流放大陰極陰極R-+光束光束e陽極絲陽極絲（Ni）抽真空抽真空 玻璃管壁開有石英窗口整理課件HEBEI NORMAL

36、UNIVERSITY, College of Chemistry & Material Science光電倍增管：檢測微弱光信號的光電元件光電倍增管：檢測微弱光信號的光電元件整理課件 原理：原理： 1.工作時，相鄰電極間加一定電壓。工作時，相鄰電極間加一定電壓。2.分光后的光照射到光敏陰極分光后的光照射到光敏陰極K K上，轟擊出光電上，轟擊出光電子，在電場加速下又射向第一倍增極，轟擊出更子，在電場加速下又射向第一倍增極，轟擊出更多的光電子。多的光電子。3.次級電子再被電場加速打在第二倍增極上，又次級電子再被電場加速打在第二倍增極上，又會發射出更多的電子。經多個打拿極，釋放的電會發射出更

37、多的電子。經多個打拿極，釋放的電子依次倍增。子依次倍增。結構：真空密封管、光敏陰極、倍增極、陽極結構：真空密封管、光敏陰極、倍增極、陽極整理課件4. 最后放出的光電子最后放出的光電子 比最初多到比最初多到106倍以上，倍以上，最大電流可達最大電流可達 10A，電流經負載電阻轉變，電流經負載電阻轉變為電壓信號送入放大器。為電壓信號送入放大器。工作范圍內，電壓越高，放大倍數越大。兩極工作范圍內，電壓越高，放大倍數越大。兩極電壓電壓75100V。整理課件 （五）信號顯示器（五）信號顯示器檢流計、微安表、電位計、數字電壓檢流計、微安表、電位計、數字電壓表、記錄儀、表、記錄儀、數據微處理機數據微處理機等

38、進行儀等進行儀器自動控制和結果處理。器自動控制和結果處理。整理課件二、分光光度計構造原理二、分光光度計構造原理（一）單光束分光光度計（一）單光束分光光度計優點：結構簡單，價格便宜。優點：結構簡單，價格便宜。缺點：缺點：測量結果受光源波動性影響大測量結果受光源波動性影響大型號：型號：721,722,751,752,724721,722,751,752,724型型整理課件例：例：721型型分光光度計。波長范圍：分光光度計。波長范圍：360-800nm。光源：鎢燈；色散元件：玻璃棱鏡；檢光源：鎢燈；色散元件：玻璃棱鏡；檢測器：光電管。測器：光電管。752型型紫外可見分光光度計。波長范圍：紫外可見分光

39、光度計。波長范圍：200-1000nm。光源：鎢燈，氘燈；色散元件：光柵；光源：鎢燈，氘燈；色散元件：光柵；檢測器：光電管。檢測器：光電管。整理課件( (二）、二）、雙光束分光光度計雙光束分光光度計1.經單色器分光后經反射鏡分解為強度經單色器分光后經反射鏡分解為強度相等的兩束光，一束通過參比池，一束相等的兩束光，一束通過參比池，一束通過樣品池。通過樣品池。2.光度計能自動比較兩束光的強度，此光度計能自動比較兩束光的強度，此比值即為試樣的透射比，經對數變換將比值即為試樣的透射比，經對數變換將它轉換成吸光度并作為波長的函數記錄它轉換成吸光度并作為波長的函數記錄下來。下來。 整理課件整理課件雙光束分

40、光光度計一般都能自動記錄雙光束分光光度計一般都能自動記錄吸吸收光譜曲線收光譜曲線。由于兩束光由于兩束光同時同時分別通過分別通過參比池和樣品池，能自動消除光源強度參比池和樣品池，能自動消除光源強度變化所引起的誤差變化所引起的誤差。具有較高的精密度具有較高的精密度和準確度。和準確度。整理課件 由同一光源發出的光被分成兩束，分別由同一光源發出的光被分成兩束，分別經過兩個單色器，得到兩束不同波長（經過兩個單色器，得到兩束不同波長（ 1和和 2）的單色光；利用切光器使兩束光以）的單色光；利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經過光電倍增管和電子控制系統

41、，最后由顯過光電倍增管和電子控制系統，最后由顯示器顯示出兩個波長處的吸光度差值示器顯示出兩個波長處的吸光度差值A整理課件整理課件對于多組分混合物、混濁試樣（如生物對于多組分混合物、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景干擾或共組織液）分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長分光光度法，往往能提高方法的靈敏度分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。和選擇性。整理課件（A=A 1-A 2 ， A=( 1- 2)bc ）調節儀器，可使調節儀器，可使 1和和 2 的光強相等：的光強相等：A 1=lgI0/I1= 1bc+AsA 2 1=lgI0/I2= 2bc+As A=( 1- 2)bc整理課件等吸收雙波長法，等吸收雙波長法， 1和和 2的選擇的選擇測定測定a和和b的標準溶液的吸收光譜。的標準溶液的吸收光譜。在選定的兩個波長處干擾組分應具在選定的兩個波長處干擾組分應具有相同的吸收。有相同的吸收。A 1=lgI0/I1= 1bc+AsA 2 =lgI0/I2= 2bc+As A=( 1- 2)bc整理課件 第四節第四節 紫外紫外