1、百合的組織培養天津師范大學生命科學學院植物組織培養課程論文百合的組織培養研究摘要：百合是百合科百合屬，多年生草本球根植物。是著名的觀賞花卉，可食用，有很高的利用價值。利用組織培養進行繁育是百合無毒化和商品化的必要途徑。由于百合的常規繁殖率低，易感染病毒，所以對繁殖技術提出了更高的要求，人工繁殖技術對百合具有重要的意義。本實驗主要通過植物組織培養手段，以MS為基本培養基，以百合鱗莖為外植體，對其進行滅菌消毒，并置于溫度為25攝氏度，濕度為80%的溫箱中，8小時睡眠16小時光照的情況下進行培養。隨后觀察其生長情況，并拍照記錄。本次實驗外植體成功發育成愈傷組織，并長出芽。此實驗主要在于掌握植物組織培

2、養技術，了解其方法過程。關鍵詞：組織培養；百合；無菌操作目錄摘要I一、文獻綜述11.1百合組織培養技術進展11.2植物組織培養概述1參考文獻：2二、百合植物組織培養32.1實驗試劑32.2儀器32.3生物材料3三、實驗步驟33.1培養基的配制33.1.1配制培養基母液的配制方法33.1.2 完全培養基的制備43.2蘭州百合外植體滅菌處理和初代培養4四、實驗結果及討論54.1實驗結果54.2討論10百合的組織培養一、文獻綜述1.1百合組織培養技術進展百合植物資源豐富，栽培歷史悠久，花色多樣，它不僅適用于庭院栽培，布置花境，也可盆栽觀賞，并早已成為花卉研究領域的佼佼者。百合雖然觀賞性很高，但大多抗

3、性很弱，尤其抗寒性。一般在東北地區種植商品百合時， 每年秋季必須起球，窖藏或者冷庫存放，這大大增加了百合的生產成本，限制了東北地區花卉業的發展。隨著百合在國內外鮮切花市場的走俏，百合花生產和消費逐年增加，但由于百合種球繁殖率低，病毒侵染造成退化，難于滿足切花生產需要。目前主要采用組織培養進行百合脫毒和快速繁殖，以促進百合商品種球的生產。但是百合試管苗小鱗莖較小，結鱗莖時間較長，移植成活率低，制約了工廠化商品生產。目前國內繁殖百合主要通過進口鱗莖進行繁殖。但是市場售價較高，而且有時鱗莖質量難以保證、繁殖率低、易造成鱗莖退化。采用組織培養的方法在很短時間內可以得到大量的組培苗，而且一般在第二年即可

4、開花。11.2植物組織培養概述植物組織培養是一種將植物體的部分細胞或組織與母體分離，在適當的條件下加以培養，使它們能夠生長、發育、分化與增殖的技術。原理是來自植物細胞的全能性分化能力，也就是植物體內的某一類細胞，能夠獨立發育并且分化成為完整的植物成體。植物組織培養能夠以少量的母體培養出大量的植物，這使植物組織培養有許多的用途，例如基礎植物學與遺傳學研究，以及農業上的育種與品種保留。2植物組織培養是根據植物細胞具有全能性的理論，利用植物體離體的器官、組織或細胞以及原生質體,在無菌和適宜的人工培養基及溫度等人工條件下，能誘導出愈傷組織、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。1902年，德國著名植物學

5、家G.Haberlanclt根據細胞學理論，大膽地提出了高等植物的器官和組織可以不斷分割，直到單個細胞，即植物體細胞，在適當的條件下，具有不斷分裂和繁殖，發育成完整植株的潛力的觀點。1943年，美國人White在煙草愈傷組織培養中，偶然發現形成一個芽，證實了G.Haberlanclt的論點。組織培養選用的基礎培養基一般較多采用的是MS。采用固體培養基較多，因為相比液體培養基，固體培養基在操作上更方便，被廣泛使用。在基礎培養基里添加一定的外源激素，可以誘導出愈傷組織、胚狀體、不定芽、根等器官，最終可獲得再生植株或者次生產物。常用的激素類型有生長素類、細胞分裂素類、赤霉素等。3參考文獻：1:周威，

6、百合的組織培養，科技向導，2011年第09期2:/wiki/%E6%A4%8D%E7%89%A9%E7%B5%84%E7%B9%94%E5%9F%B9%E9%A4%8A3:梁一池，楊華，植物組織培養技術的研究進展，福建林學院學報，2002, 22(1):93-96二、百合植物組織培養2.1實驗試劑NH4NO3, KNO3, CaCl22H2O, MgSO47H2O, KH2PO4, KI, H2BO3，MnSO44H2O, ZnSO47H2O, Na2MoO42H2O, CuSO45H2O, CoCl26H2O, Na2EDTA2H2O，FeSO4

7、7H2O，煙酸，甘氨酸, 鹽酸硫胺素, 肌醇, 鹽酸吡哆醇；瓊脂，蔗糖，蒸餾水，NAA，6-BA，1mol/L HCl，1mol/L NaOH；75%酒精。2.2儀器冰箱、天平、酸度計或pH試紙、電爐、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、光照培養箱、三角瓶、容量瓶、量筒、移液管、燒杯、培養皿、濾紙、牛皮紙、繩、玻璃棒、鑷子、刀等。2.3生物材料百合三、實驗步驟3.1培養基的配制 3.1.1配制培養基母液的配制方法 a) 大量元素的配制：依次稱取KNO3 19g、NH4NO3 16.5g、MgSO47H2O 3.7g、KH2PO4 0.17g、CaCl22H2O 4.4g ,分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后

8、再將它們混溶，以防互相發生反應，最后用容量瓶定容至1L,轉入試劑瓶中，貼上標簽，置冰箱冷藏保存。 b) 微量元素的配制：依次稱取MnSO44H2O 2.23g、ZnSO47H2O 0.86g、H3BO3 0.32g、KI 0.083g、Na2Mo2H2O 0.025g、CuSO45H2O 0.0025g、CoCl26H2O 0.0025g ,分別用少量的蒸餾水徹底溶解，再將它們混溶，最后用容量瓶定容至1L,轉入試劑瓶中，貼上標簽，置冰箱冷藏保存。 c) 鐵鹽的配制：稱取FeSO47H20 1.390g、Na2EDTA1.856g，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，再將它們混溶，最后用容量瓶定容至50

9、0ml，保存在玻璃瓶中,貼上標簽，置冰箱冷藏保存。d) 有機物母液的配制: 依次稱取甘氨酸0.1g、鹽酸硫胺素 0.005g、鹽酸吡哆醇0.025g、煙酸0.025g、肌醇5g，用少量蒸餾水充分溶解，最后定容至250ml,轉入試劑瓶中，貼上標簽，置冰箱冷藏保存。 e) 激素溶液的配制：分別稱取6-BA、NAA各10mg，將6-BA用1ml的0.1mmol/L的NaOH溶液溶解，將NAA用1ml無水乙醇預溶，待溶解完全后，分別用容量瓶定容至100ml，即得到0.1mg/ml的母液（實驗時按需要量取）。 3.1.2 完全培養基的制備 1. 取出母液并按添加順序放好，將實驗所需的量筒，移液槍，燒杯，

10、移液管，吸耳球和玻璃棒等放在實驗臺上，以備實驗所需。 2. 取一干凈的燒杯，加入1/3左右（配制培養基總量的1/3左右）的蒸餾水，取大量元素母液150ml、微量元素母液15ml、鐵鹽母液15ml、機物母液7.5ml，上述溶液移入容量瓶中，加蒸餾水定容。3. 將定容好的培養基倒入燒杯中，稱取瓊脂粉，倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱，直到瓊脂粉完全熔化溶液透明。4. 然后稱取蔗糖45g攪拌溶解。5. 初代培養基按1mg/L 6-BA 15微升、0.1mg/L NAA1.5微升。用移液槍精確量取所需激素母液，加入培養基中。 6. 用精密試紙或PH計調整pH至6.0。用配制好的0.1mol/L的H

11、Cl和0.1mol/L的NaOH溶液來調節pH值。 7. 稍微冷卻后，分裝入以洗凈的三角培養瓶中。再用布塞和牛皮紙封口，最后用繩子扎緊。 8. 另取適量濾紙（多張/組）、培養皿（2套/組），用牛皮紙包好扎緊；另取去離子水適量裝入鹽水瓶,蓋好塞子；另取小鑷子和刀等包好（2套/組）。 9. 將步驟7、8所準備的物品統一放入高壓鍋內，120KPa滅菌30min左右。滅菌后從滅菌鍋中取出培養基，平放在實驗臺上令其冷卻凝固，放入超凈臺備用。在開始操作前將所用器材放入超凈臺，打開紫外燈進行消毒。3.2蘭州百合外植體滅菌處理和初代培養 將買來的新鮮蘭州百合的鱗莖撥開，洗去上面的泥土，在用流動的自來水沖洗2h

12、，用前再用蒸餾水洗1-2遍放到4度冰箱保存待用。在超凈工作臺上采用75%的酒精溶液侵泡90s，去離子水水沖洗3次，然后用3%NaClO3溶液浸泡15min，用去離子水沖洗3次，進行外植體消毒處理。然后放在無菌濾紙上，用無菌刀切成0.5cm大小的小塊，凹面向上，接種于培養基上。每人接種1瓶，每瓶接種3塊外植體。培養條件： 25、濕度80%、光照8h/d、光照強度2000lx。每5天向培養箱中加一次水，每隔兩天進行觀察和記錄生長情況，一周左右鱗片的顏色會發生變化，由剛開始的白色慢慢有點變紫色，培養10天左右鱗片由淡綠色慢慢變為綠色。四、實驗結果及討論4.1實驗結果圖1：5月20日，第4天，生長正常

13、，邊緣變成淺黑色圖2、3：5月23日，第7天，無染菌現象，黑色邊緣加深，表面有紫色紋路圖4:5月27日，第11天，表面紫色加深，有綠色出現圖5:5月30日，第14天，表面綠色加深，無染菌現象圖6：6月3日，第18天，和上次相比沒有太大變化，無染菌現象圖7：6月6日，第21天，無太大變化，此時邊緣變為深黑色圖8、9：6月14日，第29天，長出芽圖10：6月22日，第37天，芽變大4.2討論在本次百合的植物組織培養實驗中，我接種的錐形瓶中一次就成功長出了愈傷組織，且沒有出現染菌現象。在接種后第十天左右，百合鱗莖表面出現綠色；第18天時觀察到綠色加深；第29天時長出芽。總結實驗成功原因如下：1、實驗臺、器材等滅菌徹底，無菌操作嚴格，包扎嚴密，因此沒有雜菌污染；2、配制母液時各試劑用量嚴格控制，保證沒有某些物質過多或過少影響百合生長；3、培養環境適宜；4、接種時用鑷子