1、有限公司GM管理文件題目細菌、霉菌及酵母菌計數方法驗證希y定審核批準制定日期審核日期批準日期頒發部門GMP、頒發數量生效日期分發單位企管部、質保部、生產部、工程部文件編碼|共14 頁第1 頁、目 的：當建立微生物限度檢查法時，應進行細菌霉菌及酵母菌計數方法的驗證,以確認所采用的方法適合于該藥品的細菌霉菌及酵母菌數的測定。、適用范圍：細菌、霉菌及酵母菌計數方法的驗證 二、責 任 者：質量標準分析方法驗證小組。四、正 文：1、驗證申請2、驗證立項申請表3、驗證方案4、驗證方案的批復5、驗證報告6驗證報告的審批 7、驗證證書文件編碼第2 頁細菌、霉菌及酵母菌計數方法驗證申請細菌、霉菌及酵母菌計數方法

2、驗證申請。我公司細菌、霉菌及酵母菌計數方法 嚴格按照中華人民共和國獸藥典2005年版質量標準分析方法驗證指導原則進行, 今擬對細菌、霉菌及酵母菌計數方法進行驗證。請予以批準！附：細菌、霉菌及酵母菌計數方法驗證小組成員名單 組長:成員:申報單位：質量標準分析方法驗證小組申報日期：年 月 日文件編碼第3 頁驗證申請批復立項部門申請日期立項題目要求完成日期驗證原因類另S驗證要求及目的立項部門負責人簽名:主管部門意見簽名：年月日驗證部門意見簽名：年月日總經理意見簽名：年月日指定編制驗證方案的部門:編制驗證方案要求：驗證完成要求及日期：總經理簽名：年 月 日備注:文件編碼第4 頁細菌、霉菌及酵母菌計數方

3、法驗證方案一、概述：1、名稱：微生物限度檢查法細菌霉菌及酵母菌計數方法的驗證報告。2、目的：當建立微生物限度檢查法時，應進行細菌霉菌及酵母菌計數方法的驗證，以確認所采用的方法適合于該藥品的細菌霉菌及酵母菌數的測定。3、驗證判斷標準：中華人民共和國獸藥典2005年版附錄XIJ4、驗證人員：質保部：負責對驗證結果進行評價。化驗室：負責驗證情況的檢測和監督。總經理：負責對驗證結果進行評價。5、驗證日期：二、驗證1、 驗證依據：中華人民共和國獸藥典2005年版附錄XIJ微生物限度檢查法。 按供試液的制備和細菌霉菌及酵母菌計數所規定的薄膜過濾法及其有關要求進行。2、內容：（1）菌液所用的菌株傳代次數為3

4、代，接種大腸埃希菌，金黃色葡萄球菌，枯草芽抱桿菌的新鮮培養物至營養瓊脂培養基中，培養24小時，接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂培養基中，培養48小時，上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數為60cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮 培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基中，培養 7天，加入5ml0.9%無菌氯化鈉溶液，將抱 子洗脫。然后吸出抱子懸液（用管口帶有薄的無菌沙布能過濾菌絲的無菌毛細吸管） 至無菌試管內，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含抱子數60cfu的抱子懸液。（2）驗證方法驗證試驗進行了 3次獨立的平行試驗。A、試驗組 供試液（I）純化水1ml （U）藥品名稱（1：

5、 100） 10g,取供試液1ml過濾沖洗，在最后一次沖洗液中加入 60cfu試驗菌文件編碼第5 頁B、 菌液組測定所加試驗菌數。C、 供試品對照組取相當于供試品1g (1ml),按菌落數據計數方法測定供試 品本底菌數。D稀釋劑對照組用相應稀釋液0.9%無菌氯化鈉，加入試驗菌，使最終菌濃度為每1ml供試液60cfu，按薄膜過濾法制備計菌落數。(I)純化水大腸菌液組B1 2D組菌回C組菌回供試品對照稀釋劑對照收率%收率%組C組DD/B(A-C)/B123123> 70> 70埃希菌平均: 金黃色葡萄球菌平均:黑曲霉平均:枯草芽抱桿菌平均：> 70> 70白色念珠>

6、70> 70菌平均：文件編碼第6 頁(U)產品名稱項目D組菌C組菌回供試品對照稀釋劑對照回收收率%試驗組A菌液組B菌株組C組D率%(A-C)/BD/B大腸> 70> 70埃希菌平均：金黃色> 70> 70葡萄球菌平均：枯草芽抱> 70> 70桿菌 平均：白色念珠> 70> 70菌平均：黑曲霉> 70> 70平均：以上試驗同時取試驗用稀釋液 0.9%無菌氯化鈉1ml,依薄膜過濾法操作，作為陰 性對照試驗，均應無菌生長。(3) 驗證方案的實施情況，及偏差情況分析。對于細菌霉菌及酵母菌計數方法驗證方案應進行嚴格細致精密認真的實施，根

7、據統計結果，數據基本上應在允許偏差范圍。(4) 培訓：所有參與的人員在開始驗證前應作充分的培訓。(5) 結果判斷由上表可知，在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率，(稀釋劑對文件編碼第7 頁照組的平均菌落數占菌液組的平均菌落數的百分率)應均不低于70%試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數減去供試品對照組的平均菌落數的值占菌液組的平均菌落數 的百分率）應均大于70%則按該驗證供試液制備方法和計數法測定供試品的細菌霉菌 及酵母菌數。（6）再驗證當建立藥品的微生物限度檢查法時， 進行細菌霉菌及酵母菌計數方法的驗證，以確認所采用的方法適合于該藥品的細菌霉菌及酵母菌數的測定。若藥品的組分或原檢

8、驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，計數方法應重新驗證。驗證方案批復驗證方案名稱驗證方案起訖日期驗證 工 作負責驗證部門人員參加部門人員參加部門人員參加部門人員檢驗部門人員驗證方案概要結論驗證小組負責人年月日驗證小組成員會簽生產使用部門意見負責人年月日驗證管理部門意見負責人年月日總經理意見年月日備注細菌、霉菌及酵母菌計數方法驗證報告一、概述：1、名稱：微生物限度檢查法細菌霉菌及酵母菌計數方法的驗證報告。2、目的：當建立微生物限度檢查法時，應進行細菌霉菌及酵母菌計數方法的驗證，以確認所采用的方法適合于該藥品的細菌霉菌及酵母菌數的測定。3、驗證判斷標準：中華人民共和國獸藥典2005年版附錄XIJ4、

9、驗證人員：質保部：負責對驗證結果進行評價。化驗室：負責驗證情況的檢測和監督。總經理：負責對驗證結果進行評價。5、驗證日期：二、驗證1、 驗證依據：中華人民共和國獸藥典2005年版附錄XIJ微生物限度檢查法。 按供試液的制備和細菌霉菌及酵母菌計數所規定的薄膜過濾法及其有關要求進行。2、內容：（1）菌液所用的菌株傳代次數為3代，接種大腸埃希菌，金黃色葡萄球菌，枯草芽抱桿菌的新鮮培養物至營養瓊脂培養基中，培養24小時，接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂培養基中，培養48小時，上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數為60cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮 培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養

10、基中，培養 7天，加入5ml0.9%無菌氯化鈉溶液，將抱 子洗脫。然后吸出抱子懸液（用管口帶有薄的無菌沙布能過濾菌絲的無菌毛細吸管） 至無菌試管內，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含抱子數60cfu的抱子懸液。（2）驗證方法驗證試驗進行了 3次獨立的平行試驗。A試驗組 供試液（I）純化水1ml （U）藥品名稱（1： 100） 10g，取供文件編碼第10 頁試液1ml過濾沖洗，在最后一次沖洗液中加入 60cfu試驗菌。B菌液組測定所加試驗菌數。C供試品對照組取相當于供試品1g( 1ml),按菌落數據計數方法測定供試品本底菌數。D稀釋劑對照組用相應稀釋液0.9%無菌氯化鈉，加入試驗菌，使最終菌

11、濃度為每1ml供試液60cfu，按薄膜過濾法制備計菌落數。(I)純化水123123大腸969697606060埃布困平均9660金黃色979796606060葡萄球菌平均9760枯草芽抱969696606060桿菌平均9660白色念珠959695606060菌平均9560969696606060黑曲霉平均9660供試品對照稀釋劑對照回收收率%組C組D率%(A-C)/BD/B12312352525150515083.3373.33525053545452525280.6771.67545251525250505083.3373.33525052525251525286.6771.67525253

12、535251505185.0071.675351D組菌C組菌回項目試驗組A菌液組B菌株12312大腸8989886060埃布困平均8960金黃色9190916060葡萄球菌平均9160枯草芽抱8989896060桿菌平均8960白色念珠8888886060菌平均88609089896060黑曲霉平均9060（U）藥品名稱供試品對照組C稀釋劑對照組D3123123603838385251523852604041415050504150603839395151503951603837385252523852603940395051504050D組菌C組菌回 回收收率% 率 %(A-C)/BD/B8

13、6.6785.0083.3383.3385.0083.0086.6783.3383.3383.33以上試驗同時取試驗用稀釋液 0.9%無菌氯化鈉1ml,依薄膜過濾法操作，作為陰 性對照試驗，均無菌生長。（3）驗證方案的實施情況，及偏差情況分析。對于細菌霉菌及酵母菌計數方法驗證方案進行了嚴格細致精密認真的實施，根 據統計結果，數據基本上在允許偏差范圍。文件編碼第12 頁|（4）結論：由上表可知，在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率，（稀釋劑對照組的平均菌落數占菌液組的平均菌落數的百分率）均不低于70%試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數減去供試品對照組的平均菌落數的值占菌液組的平均菌落數的百分率）均大于70%則按該驗證供試液制備方法和計數法測定供試品的細菌霉 菌及酵母菌數。日期:日期:結論人:批準人:(5)再驗證當建立藥品的微生物限度檢查法時， 進行細菌霉菌及酵母菌計數方法的驗證， 以 確認所采用的方法適合于該藥品的細菌霉菌及酵母菌數的測定。若藥品的組分或原檢 驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，計數方法應重新驗證。文件編碼第13 頁驗證報告批復驗證項目名稱驗證起訖日期驗 證 工 作負責驗證部門人員參加部門人員參加部門人員參加部門人員檢驗部門人員驗證結果報告概