1、    復方中藥丹星通絡湯對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用            作者：馬春華,穆春曉,劉耘時間：2007-11-22 11:28:00                     【關鍵詞】  復方丹星通絡湯；

2、腦缺血;再灌注損傷;乳酸脫氫酶；FAS    【Abstract】 AIM: To study the neuroprotection and mechanism of danxingtongluotang （DX） on rats with focal cerebral ischemiareperfusion (I/R) injury. METHODS: Forty SD male rats were divided randomly into 4 groups: control group, shamoperated + normal saline (NS);

3、 model group, cerebral I/R+NS; nimodipine group, I/R+nimodipine; DX group, I/R+DX. The 4 groups were fed with NS, nimodipine or DX for consecutive 5 d. Focal I/R models were made with sutureocclusion method. After cerebral ischemia for 2 h and then reperfusion for 24 h, the activity of LDH in serum

4、was measured and the expression of FAS in brain tissue was detected. RESULTS: After cerebral I/R, the activity of LDH in serum of model group increased significantly as compared with control group (P<0.05); the activity of LDH in nimodipine group and DX group decreased obviously and was lower tha

5、n that in model group （P<0.05, P<0.01）, there was no significant difference between the activity of nimodipine group and DX group (P>0.05). Expression of FAS in brain tissue of model group  increased significantly as compared with that in control, nimodipine and DX groups (P<0.01);

6、the expression of  FAS in brain tissue of nimodipine and DX groups  was decreased significantly as compared with that in model group（P<0.01）; the level of DX group was lower than that of nimodipine group. CONCLUSION: DX has an obvious protection against I/R injury probably through decre

7、asing the activity of LDH and the expression of FAS in brain tissue.    【Keywords】 danxingtongluotang; cerebral ischemia; reperfusion injury; LDH；  FAS    【摘要】 目的: 探討復方中藥丹星通絡湯對大鼠局灶性腦缺血再灌注腦損傷的保護作用及機制. 方法: 40只大鼠隨機分為4組，即對照組(假手術+生理鹽水)、模型組(缺血再灌注+生理鹽水)、尼莫地平組(缺血再灌注+尼莫地平)、

8、復方丹星通絡湯組(缺血再灌注+復方丹星通絡湯). 每組分別連續5 d灌胃口服生理鹽水、尼莫地平、復方丹星通絡湯. 線栓法制作局灶性腦缺血再灌注模型，缺血2 h后再灌注24 h. 檢測血清乳酸脫氫酶（LDH）活力、大腦FAS細胞表達. 結果:模型組大鼠局灶性腦缺血再灌注后血清LDH活力明顯高于對照組（P<0.05）, 尼莫地平組、復方丹星通絡湯組血清中LDH活力明顯降低（尼莫地平組vs 模型組，P<0.01； 復方丹星通絡湯組vs模型組，P<0.05），尼莫地平組和復方丹星通絡湯組間無顯著性差異（P>0.05）. 模型組大腦FAS細胞表達明顯高于對照，尼莫地平，復方丹星通

9、絡湯組（P<0.01）,與模型組比較，尼莫地平組、復方丹星通絡湯組腦組織FAS陽性細胞數表達顯著下調（P<0.01）,復方丹星通絡湯組明顯低于尼莫地平組（P<0.01）. 結論: 復方丹星通絡湯可有效地防止FAS及LDH升高, 對腦缺血再灌注腦損傷有顯著保護作用.    【關鍵詞】 復方丹星通絡湯；腦缺血;再灌注損傷;乳酸脫氫酶；FAS      0引言    復方中藥丹星通絡湯是在清熱化痰、活血通絡治療中風病的理論基礎上，化裁精簡的臨床經驗方，由丹參、膽南星、三七等

10、藥組成. 我們觀察了該藥對實驗性大鼠局灶性腦缺血再灌注腦損傷的保護作用，并初步分析了其作用機制, 為臨床防治中風提供實驗依據.    1材料和方法    1.1材料復方丹星通絡湯生藥由大連醫科大學第二附屬醫院中藥局代購，常規水煎，濃縮至1 kg/L（生藥量）的溶液備用. 尼莫地平片（山西亞寶藥業有限公司）；FAS（NEO MARKERS公司），稀釋度為1150；Sp即用型工作試劑盒(福州邁新生物技術開發有限公司);多聚甲醛（天津市化學試劑廠）. 721分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)；802離心機(上海手術器械廠)；微量天平：北

11、京賽多利儀器系統有限公司；熒光顯微鏡BX51：日本Olympus；數碼相機cool PI995:日本Nikon；超薄切片機(上海手術器械廠)；SHZ300多用途水浴恒溫箱（江蘇太倉市試驗設備廠）. 40 g/L多聚甲醛固定液：900 mL蒸餾水中加入Na2HPO412H2O 36 g，多聚甲醛40 g，加熱攪拌（勿使其沸騰）,待其完全溶解后加入Na2HPO42H2O 3 g，定容至1000 mL；PBS：900 mL蒸餾水中加入NaCl 9 g，Na2HPO412H2O 6 g，Na2HPO42H2O 0.4 g，定容至1000 mL；DAB顯色劑：臨用先配. 6 mg DAB粉末加入10 m

12、L PBS，充分研磨后，加入30 mL/L H2O 230 L混勻，避光.    1.2方法SD大鼠體質量約200250 g，雄性，由大連醫科大學實驗動物中心提供. 大鼠40只隨機分為4組，即對照組、模型組、尼莫地平組及丹星通絡湯組. 對照組和模型組分別灌胃生理鹽水20 mL/kg，尼莫地平組20 mL/kg灌胃（濃度1 g/L），丹星通絡湯組灌胃復方丹星通絡湯7.5 mL/kg.  連續灌胃5 d，最后灌胃2 h后線栓法造模，用100 mL/L水合氯醛(3 mLkg)腹腔麻醉，取仰臥位固定在手術臺上行右側大腦中動脈阻斷術(MCAO)，頸部正中切開，分離

13、出右側頸總動脈、頸外動脈和頸內動脈及翼顎動脈. 先結扎翼顎動脈的近心端，防止魚線插入翼顎動脈，然后在頸總動脈前壁剪一小口，插入魚線，經頸總動脈穿入頸內動脈，繼續向前推進直到感覺有輕微阻力，提示尼龍線的頭部已經達到了頸內動脈的分叉處,即大腦中動脈的起始部. 頸總動脈分叉處切口，插入直徑0.22 mm魚線，進入頸內動脈入顱，深度為1720 cm，至大腦前動脈，阻斷大腦中動脈所有的血流來源. 扎緊備線，外留1 cm長線頭，縫合皮膚. 缺血2 h后再灌注，勿需再次麻醉和切開皮膚，輕輕提拉所留線頭至阻力時提示魚線頭端已至頸總動脈切口處，血液再通，再灌注24 h. 再灌前參照Longa等方法進行5 分制神

14、經功能評分(0分:無明顯神經病學癥狀；1分:不能完全伸展左前肢；2分:向左側旋轉；3分:向左側傾倒；4分:不能自行行走). 評分為13分者模型制備成功，余者剔除. 不足預定數額者按照隨機抽樣原則補齊動物并重新造模. 對照組栓線不插入頸內動脈顱內段， 其余同以上.    血清中LDH活力的測定：腦缺血、再灌注模型再灌24 h，腹主動脈取血5 mL，高速離心機離心取上清液2 mL，編號,24冷藏，制備血清標本；將備好的血清用分光光度劑測定測定管A值、測空管A值、標空管A值、標準管A值，利用公式，計算血清中LDH活力. 血清中LDH活力=（測定管A值-測空管A值）/（標

15、準管A值-標空管A值）×2000,標準管A值=0.1899,  標空管A值=0.085,   測空管A值=0.12.    大鼠腦組織FAS的平均陽性細胞數分析：將各組大鼠深度麻醉，迅速打開胸腔，左心室插管經升主動脈快速灌注生理鹽水200 mL，再持續灌注0.1 mol/L磷酸緩沖液配制的40 g/L多聚甲醛固定液300 mL，斷頭取腦，再用相同固定液后固定1 h，制備腦組織； 石蠟包埋、切片、防脫片處理；分別取與HE染色相鄰的切片進行FAS免疫組化檢測：免疫組化采用SP法，DAB顯色；結果評定：用光學顯微鏡（×400），觀察每個視野中FAS蛋白表達數目（胞質棕黃色為陽性細胞），