1、祖卡木顆粒中罌粟堿含量的反相高效液相色譜法測定         09-09-10 15:57:00     編輯：studa20                   作者：李煥丹，季志紅，劉峰，田佳佳，周宏兵【摘要】  目的采用反相高效液相色譜（RPHPLC）法測定祖卡木顆粒中罌粟堿的含量

2、。方法使用DIKMA C8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5m），甲醇乙腈1%三乙胺1%乙酸銨（4020139）為流動相，流速1 ml/min，檢測波長為240 nm。結果罌粟堿在0.019 80.396g范圍內呈良好線性關系（r0.999 9），平均回收率為99.6%，RSD為1.5%。結論該法靈敏、準確，專屬性強，重復性好，可以作為祖卡木顆粒的含量測定方法。 【關鍵詞】  祖卡木顆粒 高效液相色譜法 罌粟堿Abstract:Objective To establish a method for determining papaverine in Zukamu Gra

3、nules.MethodsThe separation was carried out on DIKMA C8 column（250 mm×4.6 mm，5 m）.The mobile phase was carbinol-acetonitrile-1% triethylamine -1% ammonium acetate（4020139）with a flow rate of 1.0ml/min.The detection wavelength was set at 240 nm.ResultsPapaverine showed a good linear relationship

4、 in the range of 0.01980.396g（r0.999 9）and the average recovery was 99.6% ,RSD was1.5%.ConclusionThe method is sensitive,accurate, specific and repeatable. It can be used for quality control of Zukamu Granules.Key words：Zukamu Granules;   HPLC;  Papaverine    由山柰、睡蓮花及罌粟

5、殼等藥味的提取物組成的祖卡木顆粒，具有清熱、發汗、通竅的功效，用于感冒咳嗽、發熱無汗、咽喉腫痛、鼻塞流涕等癥。方中罌粟殼含有罌粟堿，久服易成癮，過量攝入會引起心率不齊，嚴重時致人死亡。文章研究采用反相高效液相色譜法測定罌粟堿的含量，為控制祖卡木顆粒的質量提供依據。1  儀器與試藥1.1  儀器  島津LC10AT高效液相色譜儀（日本島津公司），HW-2000色譜工作站，C8柱（250mm×4.6mm，5m）（迪馬公司），超聲清洗提取器。1.2 試藥 甲醇為色譜純（天津四友生物醫學技術開發公司），水為超純水，余試劑為分析醇，鹽酸罌粟堿對照品（中國

6、藥品生物制品檢定所，批號：171214200403）。2  方法2.1   色譜條件 C8色譜柱，甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（4020139）為流動相，流速1 ml/min，檢測波長為240 nm。2.2   供試品溶液的制備 取本品約2.5 g，精密稱定，置100 ml具塞錐形瓶中，加入氨試液10 ml潤濕堿化后，加三氯甲烷50 ml，振搖5 min，超聲80 min后移至分液漏斗中，靜止分層，分取三氯甲烷層，水層用30 ml三氯甲烷分3次萃取，合并三氯甲烷溶液，水浴揮干三氯甲烷，殘渣用甲醇溶解并移至10 ml量瓶

7、中，加甲醇至刻度，搖勻，進柱前用0.45 m微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。2.3  對照品溶液的制備 取鹽酸罌粟堿適量，105下干燥2 h，精密稱定，加甲醇制成每毫升含39.6 g的溶液，作為對照品溶液。2.4  陰性對照溶液的制備 去除祖卡木顆粒處方中的罌粟殼，按祖卡木顆粒生產工藝制備陰性制劑，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。3  結果3.1  干擾實驗 照上述色譜條件，分別取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液各20 l，注入色譜儀，記錄色譜圖，圖中顯示，鹽酸罌粟堿的峰形良好，且與樣品雜質峰完成分離，陰性對照溶液

8、無干擾。結果見圖13。3.2   線性范圍實驗 分別精密吸取一定量的對照品溶液稀釋成濃度為0.99，1.98，2.97，4.95，9.90，14.85，19.80g/ml的標準溶液。按上述色譜條件分別進樣20l，取3次峰面積的平均值，對鹽酸罌粟堿的進樣量（g）進行線性回歸，得回歸方程Y = 4563.5X + 18009（r=0.999 9，n=7）結果表明鹽酸罌粟堿在0.019 8 0.396g范圍內線性關系良好。     09-09-10 15:57:00     編輯：studa

9、203.3  精密度實驗 取鹽酸罌粟堿對照液，按上述色譜條件連續進樣6次，20l/次，測定峰面積，其RSD為1.44%，結果表明精密度良好。3.4   重復性實驗 取同一批號樣品，按“2.2”方法平行制備6份供試品溶液，分別進行含量測定，RSD為1.7%。3.5  穩定性實驗 取供試品溶液，按上述色譜條件，每隔2 h進樣1次，記錄峰面積，結果表明供試品溶液在8 h內基本穩定，RSD為1.0%。結果見表1。表1  穩定性實驗（略）3.6  加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的樣品（批號060728）

10、6份，分別精密加入鹽酸罌粟堿對照液（39.6g/ml）1ml，按“2.2”方法平行制備供試品溶液，分別進行含量測定，結果平均回收率為99.6%，RSD為1.5%。結果見表2。3.7   樣品的測定 取5批樣品，分別按“2.2”方法平行制備供試品溶液，分別進行含量測定。結果見表3。表2  加樣回收率實驗結果（略）4  討論4.1  流動相的選擇  曾考察甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（555139）；甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（5010139）；甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（4515139）；甲醇-乙腈-1%

11、三乙胺-1%乙酸銨（4020139）；甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（3030139），結果以甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（4020139）為流動相分離效果最好。表3  祖卡木顆粒樣品含量測定結果（略）4.2  檢測波長的選擇 4.3  供試品溶液制備方法的選擇 本品中罌粟堿含量相對較少，故采用液液萃取的方法進行提取富集。基本方法是利用罌粟堿呈堿性，經氨試液或氨水堿化后游離，再用有機溶劑三氯甲烷提取。曾比較了兩者堿化試劑，發現用氨水堿化容易產生乳化現象，不易分層，故采用氨試液為堿化試劑。提取方法上曾比較了冷浸法（室溫24 h）和超聲提

12、取法，結果表明超聲提取法提取效率高，結果穩定。在超聲時間方面，比較了20，40，60，80，100 min的提取率，結果表明時間延長到60 min，提取率基本不再提高，為保證提取完全，保守的方法把超聲時間確定為80 min。【參考文獻】  1文 杰，馬 開，高 寒，等HPLC測定強力枇杷露中罌粟堿的含量J.中國中藥雜志，2006，31（16）：1330.2陳慶偉HPLC法測定鹽酸罌粟堿氯化鈉注射液中鹽酸罌粟堿的含量J.海峽藥學，2005，17（6）：74.3陸茂林，趙春城，蔡建榮，等罌粟堿檢測方法進展J.中國衛生檢驗雜志，2002，12（4）：504.4肖艷萍，林 海，黃 云HPLC

13、測定注射用鹽酸罌粟堿的含量J.中國藥師，2006，9（7）：628     09-09-10 15:57:00     編輯：studa203.3  精密度實驗 取鹽酸罌粟堿對照液，按上述色譜條件連續進樣6次，20l/次，測定峰面積，其RSD為1.44%，結果表明精密度良好。3.4   重復性實驗 取同一批號樣品，按“2.2”方法平行制備6份供試品溶液，分別進行含量測定，RSD為1.7%。3.5  穩定性實驗 取供試品溶液，按上述色譜條件，每隔2

14、 h進樣1次，記錄峰面積，結果表明供試品溶液在8 h內基本穩定，RSD為1.0%。結果見表1。表1  穩定性實驗（略）3.6  加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的樣品（批號060728）6份，分別精密加入鹽酸罌粟堿對照液（39.6g/ml）1ml，按“2.2”方法平行制備供試品溶液，分別進行含量測定，結果平均回收率為99.6%，RSD為1.5%。結果見表2。3.7   樣品的測定 取5批樣品，分別按“2.2”方法平行制備供試品溶液，分別進行含量測定。結果見表3。表2  加樣回收率實驗結果（略）4  討論4.1

15、60; 流動相的選擇  曾考察甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（555139）；甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（5010139）；甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（4515139）；甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（4020139）；甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（3030139），結果以甲醇-乙腈-1%三乙胺-1%乙酸銨（4020139）為流動相分離效果最好。表3  祖卡木顆粒樣品含量測定結果（略）4.2  檢測波長的選擇 4.3  供試品溶液制備方法的選擇 本品中罌粟堿含量相對較少，故采用液液萃取的方法進行提取富集。基本方法是利用罌粟堿呈堿性，經氨試液或氨水堿化后游離，再用有機溶劑三氯甲烷提取。曾比較了兩者堿化試劑，發現用氨水堿化容易產生乳化現象，不易分層，故采用氨試液為堿化試劑。提取方法上曾比較了冷浸法（室溫24 h）和超聲提取法，結果表明超聲提取法提取效率高，結果穩定。在超聲時間方面，比較了20，40，60，80，100 min的提取率，結果表明時間延長到60 min，提取率基本不再提高，為保