1、精選優質文檔-傾情為你奉上中國農業大學02-06年生物化學博士試題 wolfliu(金幣+2,VIP+0):3QS! LZ辛苦啦！2002年一、名詞解釋：（20分）1.同源蛋白質 (homologous protein) 2. 構型 (configuration)3.構象 (conformation) 4. 鈣調蛋白(calmodulin, CAM or CaM)5.逆轉座子(retrotransposon)二、以動物細胞或植物細胞為例說明細胞中的膜結構及其功能。（12分）三、在研究位置基因的功能時往往采用推定的該基因所編碼的氨基酸序列與已知功能的蛋白質的氨基酸序列比較來推斷，你認為這種比較應

2、采用什么原則？為什么？（12分）四、真核基因在原核細胞中表達的蛋白質常常失去生物活性，為什么？舉例說明。五、簡述信號肽的結構特點、功能和從蛋白質產物中切除的機理。（12分）六、分子篩、離子交換和親和層析是三種分離、醇化蛋白質的方法，你如何根據所要分離、純化的蛋白質的性質選擇使用。（12分）七、酶聯免疫吸附實驗（ELISA）的基本原理是什么？如何用此方法檢測樣品中的抗原和抗體？（12分）八、某一個蛋白，SDS凝膠電泳表明其分子量位于16900于37100標準帶之間，當用巰基乙醇和碘乙酸處理該蛋白后經SDS凝膠電泳分析仍得到一條帶，但分子量接近標準帶13370處，請推斷此蛋白質的結構？為什么第二次

3、用前要加碘乙酸？2003年一、簡要解釋下列名詞（每詞5分，共30分）1、寡糖與多糖2、端粒酶3、酮體 4、生糖氨基酸與生酮氨基酸 5、終止子和終止因子 6、分子伴侶（molecularchaperone）二、以下問答題任選7題回答（每題10分，共70分）：1、簡述關于生物膜運輸的分子機制的幾種主要假設以及他們間的相互關系。2、蛋白質磷酸化和去磷酸化的生物學意義是什么？3、請解釋酶促反應的前饋和反饋（feedforward 和 feedback）及其意義。4、什么機制保證了DNA復制的準確性？5、神經和肌肉等細胞活動的直接供能者是ATP。然而，ATP在細胞中含量很低，在哺乳動物肌肉中僅3 - 8

4、mmol / kg。問：是否存在其它的貯能物質，又是怎樣“運作”的呢?6、為什么C4植物即使在大氣CO2 濃度很低時其光合效率仍很高？7、逆轉座子廣泛存在于真核生物基因組中，簡述它的生物學意義并說明原因。8、DNA重組中同源重組是最基本的重組方式，它的過程是什么？有什么意義？2004年一分離純化蛋白質是根據蛋白質的哪些性質進行的？舉例說明3種層析的操作（解釋溶液的鹽離子濃度、PH值等變化）及其原理。(20分)二試舉一例說明激素介導的信號轉導的生理意義和作用機制。(20分)三 簡述兩類真核細胞蛋白質降解的機制以及它們的生物學意義。(20分)四 基因HOR的轉錄受激素X的正調控。試設計實驗分析鑒定

5、其順式作用元件（cis-elements）、反式因子(trans-factors)及其調控模式。(20分)五 在應用重組DNA技術表達某些蛋白時，經常在表達的蛋白末端加上一段氨基酸序列作為標簽(tag)。說明標簽序列在生物學研究中的應用。(20分)六 舉23例說明組蛋白翻譯后修飾的機制及其生物學意義。(20分)七 簡述miRNA（microRNA）和siRNA的結構和功能。（20分）2005年1. 在研究蛋白與蛋白間相互作用時，酵母雙雜交和免疫共沉淀是較常用的方法。請簡述兩種方法的原理。（15分）2說明產生自由基的常見途徑，并寫出兩個抗氧化保護酶。（10分）3SDS(Sodium Dodecy

6、l Sulfate)是生化中常用試劑，請說明它在聚丙烯凝膠電泳測定蛋白質分子量中的作用以及它在堿裂解法提取pUC18質粒DNA中的作用。（10分）4請設計實驗，純化在大腸桿菌中表達的Taq DNA polymerase(Taq DNA 聚合酶)并鑒定其純度和生物學活性。（20分）5現在，在藥店購買抗生素時，一般要求出示醫生處方，以避免抗生素的濫用。請說明細菌產生對抗生素耐藥性的生物化學機制。（15分）6隨著石油能源的減少，可再生能源的利用越來越重要，利用發酵工程產生的乙醇是一種可能的石油替代產品。請說明酵母在無氧條件下，將丙酮酸轉化為乙醇的生化反應過程（包括中間產物和所需要的酶和輔酶）。（15

7、分）7在高等生物蛋白組學研究中發現，逆境條件下某蛋白A含量遠遠高于它在正常條件下的含量，但是在mRNA水平上檢測表明在逆境條件和正常條件下此基因的表達水平基本一致。請根據你所學的知識說明其可能的表達調控機制。（15分）2006一、名詞解釋（每題3分，共30分）1.RNA編輯（RNAediting） 2.翻譯擴增 3.順反子：4.C值悖論：5.基因家族： 6.甲基化延遲： 7.割裂基因： 8.SD序列： 9. 減色效應： 10. DNA芯片：二、簡答題（每題8分，共40分）1. 簡述PCR技術的原理2簡述色氨酸操縱子中弱化作用的原理3.簡述外顯子捕捉的原理4. 簡述扣除雜交的原理：5簡述DNA協

8、同復制的機制四、論述題（共30分）1. 試述蛋白質合成產物的后加工過程 (10分)2. 敘述將外源基因導入原核細胞和真核細胞的常用方法（20分）物理方法 1.1 DNA直接注射法: 是目的基因導入的最簡單方法, 但注入量有限, 能夠接觸到的腫瘤細胞有限,故獲得的腫瘤細胞轉化率很低, 多通過腫瘤局部多點注射給藥。 1.2 顆粒轟擊技術:將目的基因包被金屬以后,利用高壓發射裝置, 加速包裹目的基因的金屬顆粒進入細胞,從而提高腫瘤細胞的轉化率。 2 化學方法 即用化學方法構建非病毒載體系統，借之完成基因轉導。主要包括以下兩種。 2.1 脂質體載體：方法具有安全、簡單、低毒、無免疫原性等優點，適用于注

9、射方法進行器官靶向性轉移并有一定的轉移效率。是除病毒載體轉移方法之外的另一種有價值的體內基因轉移方法。多用于體外轉化細胞，或通過瘤組織內注射1進行體內轉化,并已有少數臨床應用的報告。目前常用的是陽離子脂質體(商品名為Lipofectin)。它可自發的與DNA形成復合物，保護外源DNA不被核酸酶降解，具有制備簡單、安全無毒、無免疫原性、重復性、對基因片段大小無限制且轉染操作方便等優點。由于它可與細胞膜直接融合而能有效地避免溶酶體破壞，故遠比傳統的脂質體效率高。缺點是靶向性有限。Nishikawa等2從BALB/c小鼠的尾靜脈注射以熒光素酶基因為報告基因的質粒DNA-脂質體復合物， 發現肺、肝、脾

10、等器官組織中都有熒光素酶基因及其產物，持續表達超過3個月。常規脂質體易被網狀內皮系統(RES)細胞攝取，在巨噬細胞本身可成為靶細胞的部位，RES的這種親合性是有利的。Hasegawa等3采用日本血凝病毒( hemagglutinating virus of Japan , HVJ)脂質體為載體，用HSV-tk/Gcv系統治療肝癌發現，在體外試驗中當Gcv的濃度100microg/ml時幾乎所有腫瘤均被殺死，甚至當轉導率只有20時，也有1/3腫瘤被消滅。此方法重復應用效果更佳，且皮下注射未見明顯的炎癥反應。 2.2 受體介導法：利用肝細胞上富含轉移因子和糖蛋白受體的特點，人工合成多聚陽離子氨基酸

11、，進而連接轉移因子(或糖蛋白)和目的基因構成復合物，通過與肝細胞表面的受體結合來實現目的基因的轉移。此法靶向性好，但受體介導的內吞小泡會被轉運到溶酶體，易被溶酶體降解而造成目的基因表達時間短暫，表達效率低下。利用氯哇抑制溶酶體酶或腺病毒與內吞小泡相融合而將其破壞釋放出外源DNA，可提高轉化效率。 3 生物學方法 主要通過構建病毒載體來完成。 3.1 逆轉錄病毒(retrovirus，Rv):構建簡單，裝載外源基因容量最大達8kb，整合入宿主細胞基因組而無病毒蛋白表達。但僅能感染分裂期細胞，體外制備滴度較低，且其隨機整合有引起“插入性突變”的可能4。 3.2 腺病毒(adenovirus, Ad

12、v): 為近年肝細胞肝癌基因治療中報告最多的一種病毒載體5。體外制備滴度較大 ，裝載外源基因容量最大達35kb，不整合入宿主細胞基因組因而避免插入突變的危險，能感染分裂細胞和非分裂細胞。但易引起宿主免疫反應而使轉染效率下降，且大劑量靜脈給予可導致嚴重的肝臟炎癥反應，因此通過全身給藥受到限制。Nagao等6發現瘤內注射重組Adv后，目的基因可有效表達，但表達時間短暫，重復注射后表達效率降低且誘發體液和細胞免疫反應。 3.3 單純皰疹病毒：單純皰疹病毒(herps simplex virus，HSV)對非分裂細胞有天然的親合力，裝載外源基因容量達30kb，體外制備滴度接近腺病毒。但構建時難以除去與裂解細胞有關的基因而對細胞毒性大7。 3.4 腺相關病毒：腺相關病毒(adeno-associated virus，AAV)在人類不引起任何病理性后果，它能感染非分裂S相細胞，還能將基因轉人非周期(noncyling)腫瘤細胞。AAV是一種缺陷前病毒，對人類無致病性。能用于運載外源性重組基因組，已應用于肝和肝癌細胞的治療基因轉移8。 3.5 其他病毒：痘