1、博奧賽斯（天津）生物科技有限公司 高血壓系列 運用化學發光免疫檢測技術開展“高血壓項目”檢測的可行性分析一、開展“高血壓項目檢測”在醫療機構檢測中的重要性放射免疫分析技術開展腎素活性血管緊張素醛固酮系統（RRAS）測定，臨床意義介紹如下：RAAS是人體血壓、水和電解質平衡重要的調節系統，對維持人體內環境的穩定起著十分重要的作用。腎素在生理和許多病理情況下，其數量和活性決定了整個體系的活性，測定腎素活性因此成為RAAS活性的標志。實際工作中腎素活性的測定是通過測定血管緊張素I（Ang I）的量和在37條件下1hAI的增加量（即腎素原被腎素催化轉化為AI的量）來計算腎素活性的。腎素的主要生理功能是

2、將血管緊張素原分解成Ang I，AI在血管緊張素轉移酶（ACE）作用下轉變成Ang，并可引起醛固酮（ALD）分泌,以此發揮對機體血壓的調節作用。ALD是腎素-血管緊張素系統的一個延伸部分，它也參與了高血壓的發病過程。原發性醛固酮增多癥患者，腎上腺因腫瘤或增生等原因大量分泌ALD，腎素分泌受抑制。臨床上表現為高血壓、低血鉀。血、尿中ALd水平升高。腎素-血管緊張素-醛固酮系統（RAAS）是由一系列激素及相應的酶組成,通過對血容量和外周阻力的控制，調節人體血壓、水和電解質平衡，來維持機體內環境恒定。另外，它與一些腎臟疾病及與腎臟有關的一些疾病有密切的關系。目前檢測血漿中腎素活性（PRA）、血管緊張

3、素（Ang）和醛固酮（ALD）已成為原發性和繼發性高血壓分型診斷、治療及研究的重要指標。對一些有關腎臟疾病的診斷、治療以及發病機理的探討有著重要意義。二、采用化學發光法檢測“高血壓項目”是醫學檢驗技術的必然趨勢1. 本世紀70年代中期Arakawe首次報道用發光信號進行酶免疫分析，利用發光的化學反應分析超微量物質，特別是用于臨床免疫分析中檢驗超微量活性物質。目前，這一技術已從實驗室的稀有技術過渡到臨床醫學的常規檢測手段。化學發光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是將化學發光或生物發光體系與免疫反應相結合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定

4、技術。其檢測原理與放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同這處是以發光物質代替放射性核素或酶作為標記物，并藉助其自身的發光強度直接進行測定。2. 臨床實驗數據對照案例：2.1試驗方案試驗目的：通過博奧賽斯試劑盒對臨床樣本（金域提供）的對比試驗，驗證博奧賽斯試劑與金域現用試劑是否等效，從而驗證博奧賽斯試劑和進口試劑的測值相關性。試驗項目：博奧賽斯醛固酮（ALD）定量檢測試劑盒（化學發光法）（以下簡稱博奧賽斯ALD）博奧賽斯血管緊張素（Ang）定量檢測試劑盒（化學發光法）(以下簡稱博奧賽斯PRA) 博奧賽斯血管緊張素（Ang）定量檢測試劑盒（化學發光法）(以下簡稱博奧賽斯Ang)對照試劑：貝

5、克曼（Beckman Coulter）ALD放射免疫試劑（以下簡稱Beckman ALD） 索林（DiaSorin）血漿腎素活性放射免疫試劑（以下簡稱DiaSorin PRA） 伯樂免疫測定質控品三水平（371,372,373）（以下簡稱伯樂質控品） 美國病理學家協會（College of American Pathologists，CAP）尿樣本室間質評（2012年）（以下簡稱CAP 尿樣室間質評）試驗樣本：金域當天新鮮檢測樣本，樣本量應足夠進行比對試驗。試驗前去除嚴重溶血、脂血、黃疸和染菌的樣本。試驗方法：雙盲法。2.2試驗結果與結論2.2.1醛固酮（ALD）定量檢測試劑盒（化學發光法）2

6、.2.1.1分析靈敏度、劑量反應曲線性同時測定10個校準品零值（S0），計算發光值的平均值與標準偏差SD。計算-2SD，從校準品曲線中得出其對應濃度值即為分析靈敏度。表1 ALD分析靈敏度、線性S0發光值校準品濃度（pg/mL）發光值參數297559432291442526222252456235r0.9995309894630776687519795911963318S030766762896896313798221012428041231795SDS0105600.131607252990420650557883517335分析靈敏度13.7318559330137871500262278

7、263060本次試驗分析靈敏度為13.7pg/mL，r=0.9995.2.2.1.2精密度（CV%）10孔平行測定高值和低值的樣本，計算測定值的平均濃度（）與標準差（SD）。批內不精密度（CV %）= SD×100%表2 ALD精密度樣本1（2010-5-30 75160）樣本2（2010-5-30 75180）孔數發光值測定值發光值測定值11817980115.98218668070.6521809837126.29222597866.3831802299129.84211410076.6441804197129.45211712576.1351828486124.53217459

8、671.4561874899115.67214634575.371875937115.48212384278.0381831369125.45209637981.4991773696130.91210623880.23101827748124.68212261578.18123.8375.45SD6.024.67CV%4.86%6.20%樣本1,2的變異系數分別為4.864%，6.20%.2.2.1.3測值重復性 取1020份新鮮樣本，將每份樣本分裝成35份。每天測定一次，連續35天。計算每個樣本測定值的CV%.表3 ALD測值重復性2012-6-1高血壓樣本樣本號放免測定值（pg/mL）6-

9、2測定值6-4測定值6-7測定值SDCV%1751287701339.991183.671262.591262.0878.166.19%275104116154.45175.64164.78164.9610.66.43%375105273173.35153.07170.15165.5210.96.59%475106575397.76341.49357.33365.5329.027.94%5751557941108.321038.141106.461084.3139.993.69%675108235279.25246.47257.12260.9516.726.41%7751096260.3153

10、.6555.4456.473.456.11%87515621894.8783.9383.5987.466.427.34%9751575898.0685.6389.9191.26.316.92%10751587758.3449.8550.8453.014.648.75%117515990185.47165.63182.14177.7510.625.97%測得2012年6月1號金域高血壓樣本11個，分別于6月2號、4號、7號測定，分別計算CV%,結果在3.69%8.75%之間。2.2.1.4準確性2.2.1.4.1測定伯樂質控品表4 ALD測定伯樂質控品伯樂質控品（批號40250）測定值（pg/m

11、L）Beckman Coulter測定范圍（pg/mL）是否在質控范圍內37179.18<87.0是371200.26130-296是373400.47281-688是2.2.1.4.2測定CAP 尿樣室間質評表5 ALD測定CAP 尿樣室間質評CAP 尿樣室間質評（2012）測定值（ug/L）CAP提供ALD測定范圍（ug/L）是否在質控范圍內N-0147.936.7-100是N-0217.713.5-35是N-0319.714.1-34.2是2.2.1.5與Beckman Coulter測定值的臨床符合率。本次測定金域高血壓樣本213個，分別根據Beckman ALD，和博奧賽斯AL

12、D說明書中普食立位的參考值判斷樣本值，判斷樣本值屬于正常，偏高或者偏低。結果如下表。 表6 ALD臨床符合率（具體結果見附件一）低值樣本數正常樣本數高值樣本數總數213例2117418213符合例數1716217196不符例數412117臨床符合率92.00%2.2.1.6結論2.2.1.6.1博奧賽斯ALD試劑靈敏度為13.7pg/mL、批內不精密度4.864%，6.20%、測值重復性的不精密度在3.69%8.75%之間、劑量反應曲線線性0.9995、測定伯樂質控品值，CAP室間質評值均在要求范圍之內。2.2.1.6.2博奧賽斯ALD試劑和Beckman ALD試劑進行臨床對比試驗，符合性大

13、于90%，說明兩種試劑測值符合性良好。2.2.2血管緊張素（Ang）定量檢測試劑盒（化學發光法）2.2.2.1分析靈敏度、劑量反應曲線性同時測定10個校準品零值（S0），計算發光值的平均值與標準偏差SD。計算-2SD，從校準品曲線中得出其對應濃度值即為分析靈敏度。表7 Ang分析靈敏度、線性S0發光值校準品濃度（ng/mL）發光值參數700631068132220.330039643263092r0.9996680761870308371.519568632079875S06672183702646969282375.510731561129713SDS0140375.768091136809

14、54420509359560683分析靈敏度0.027191726710626345231362250825本次試驗分析靈敏度為0.02ng/mL，r=0.999。2.2.2.2精密度（CV%）10孔平行測定高值和低值的樣本，計算測定值的平均濃度（）與標準差（SD）。批內不精密度（CV %）= SD×100%表8 PRA精密度樣本1（2010-6-5 75012）樣本2（2010-6-5 75039）樣本3（2010-6-5 75044）孔數4度值37度值PRA4度值37度值PRA4度值37度值PRA14.321.517.21.376.645.271.554.212.6624.622

15、.0417.441.256.825.571.824.652.8335.3721.4516.081.216.415.21.264.042.7844.4623.0918.631.135.914.781.334.182.8554.7723.2918.521.216.2150.953.812.8663.2418.3515.111.487.075.590.973.742.7774.3821.9517.571.647.255.610.923.892.9784.5321.516.971.33.872.5794.9723.718.7317.365.292.79SD1.210.320.12CV%6.97%6.0

16、5%4.30%樣本1,2,3的變異系數分別為6.97%，6.05%，4.3%。2.2.2.3測值重復性 取1020份新鮮樣本，將每份樣本分裝成35份。每天測定一次，連續35天。計算每個樣本測定值的CV%.表9 PRA測值重復性2012-6-4高血壓樣本樣本號放免測值（ng/mL/hr）6-5測值6-6測值6-7測值6-8測值SDCV%1751412.162.172.031.991.912.030.115.42%2751561.041.331.131.191.131.20.097.50%3752471.982.282.12.262.492.280.167.02%4753832.432.672.5

17、12.252.362.450.187.35%57540422.8113.9413.3912.9712.1413.110.765.80%67547826.6126.1323.5925.5427.6725.731.696.57% 測得2012年6月1號金域高血壓樣本6個，分別于6月5號、6號、7號和8號測定，分別計算CV%,結果在5.42%7.5%之間。2.2.2.4準確性2.2.2.4.1測定伯樂質控品表10 PRA 伯樂質控品測定伯樂質控品（批號40250）測定值（ng/mL/hr）DiaSorin PRA測定范圍（ng/mL/hr）是否在質控范圍內3712.422-3.5是3716.775.

18、3-9.1是3738.245.9-10.1是2.2.2.5與DiaSorin PRA測定值的臨床符合率。本次測定金域高血壓樣本218個，分別根據DiaSorin PRA，和博奧賽斯PRA說明書中立位的參考值判斷樣本值，判斷樣本值屬于正常，偏高或者偏低。結果如下表。 表 11 PRA臨床符合率（具體結果見附件二）低值樣本數正常樣本數高值樣本數總數1335035218符合例數1284431203不符例數56415臨床符合率93.10%2.2.2.6結論2.2.2.6.1博奧賽斯PRA試劑從靈敏度為0.02ng/mL、批內不精密度為6.97%，6.05%，4.3%、測值重復性的不精密度在5.42%7

19、.5%之間、劑量反應曲線線性0.9996、測定伯樂質控品值均在要求范圍之內。2.2.2.6.2博奧賽斯PRA試劑和DiaSorin PRA試劑進行臨床對比試驗，符合性大于90%，說明兩種試劑測值符合性良好。2.2.3血管緊張素（Ang）定量檢測試劑盒（化學發光法）2.2.3.1分析靈敏度、劑量反應曲線性同時測定10個校準品零值（S0），計算發光值的平均值與標準偏差SD。計算-2SD，從校準品曲線中得出其對應濃度值即為分析靈敏度。表12 Ang分析靈敏度、線性S0發光值校準品濃度（pg/mL）發光值參數683629464066703068290877419047r0.99987441226706

20、46487034101773938250S069725936970649721270615021301582235844SDS0329377.26611462682908743012323571342272分析靈敏度7.05693414774190471500567130607886本次試驗分析靈敏度為7.05pg/mL，r=0.9998。2.2.3.2精密度（CV%）10孔平行測定高值和低值的樣本，計算測定值的平均濃度（）與標準差（SD）。批內不精密度（CV %）= SD×100%表13 Ang精密度樣本1（2010-6-1 75103）樣本2（2010-6-1 75104）孔數發

21、光值測定值發光值測定值1364851730.33486931419.752362659930.69484696319.783365176430.28516306717.054351088732.69515310617.145377768829.1510317217.576362968430.64513375317.317357167831.62525926116.228374836529.36518959116.829381174528.8491244119.2310373995529.43491111319.2430.2918.01SD1.21.34CV%3.97%7.44%樣本1,2的變異

22、系數分別為3.97%，7.44%。2.2.3.3測值重復性 取1020份新鮮樣本，將每份樣本分裝成35份。每天測定一次，連續35天。計算每個樣本測定值的CV%.表14 Ang測值重復性2012-6-4高血壓樣本樣本號6-5測值6-6測值6-7測值SDCV%17512726.0824.4523.4524.661.335.39%27514037.9332.9736.9235.942.627.29%37514151.3148.9554.6451.632.865.54%47515649.9547.7843.6747.133.196.77%57516928.1524.7427.3126.731.786.66%67524523.1621.2823.8422.761.335.84%77524733.437.1733.5234.72.146.17%87538347.3748.9948.2348.20.811.68%97540478.3