1、常用HPV檢測方法的分析HPV檢測的意義HPV 感染與CIN 和宮頸癌變有著密切的關系HPV的檢測可能對宮頸癌的預后有預測作用HPV檢測對科學研究的價值常用檢測方法1細胞學檢查；2. 組織學檢查；3感染組織中HPV蛋白的檢測；4. HPV感染的血清學檢查；5. HPV基因組檢測.細胞學檢查 傳統巴氏涂片（傳統巴氏涂片（CV） 液基薄層細胞學技術液基薄層細胞學技術(TCT)自動細胞學檢測系統自動細胞學檢測系統test，又稱，又稱LCT計算機輔助細胞檢測系統（計算機輔助細胞檢測系統（CCT），），優點與問題 優點： 操作簡單，價格低廉，適宜作初步篩查； 缺點： 凹空細胞是HPV 感染的主要形態學改

2、變， 但由于其他病毒感染及人為因素均有可能造成細胞內出現空泡或凹空樣變，而且細胞學檢查易受取材、染色及細胞病理醫生的主觀判斷等因素的影響，因此應用細胞病理學檢測HPV 存在靈敏度低、特異性差、假陰性率和假陽性率高、不能對HPV 進行分型.組織學檢查；肉眼觀察；陰道鏡觀察；組織檢查；優點與問題優點： 操作簡單，價格低廉，適宜作初步篩查； 缺點：準確率低，人員素質要求高，病人痛苦程度大。感染組織中HPV蛋白的檢測針對HPV抗原，主要是衣殼蛋白制備抗體，通過免疫學方法進行檢測。ELISA，免疫沉淀法等。優點與問題優點：原理明確，操作相對簡單缺點：由于HPV 至今尚不能在體外培養， 且其免疫原性較弱，

3、故血清學方法檢測靈敏度較低。HPV感染的血清學檢查檢測人體血清中是否存在有針對HPV產生的抗體，通過免疫學方法進行檢測。優點與問題優點：原理明確，操作相對簡單缺點：血清學檢測的對象是抗原和抗體，由于人體對HPV產生免疫應答有一定的遲滯性，所以血清學檢測對無免疫應答者和HPV 潛伏期感染者會產生漏檢。HPV基因組檢測PCR類檢測方法Southern雜交法原位雜交雜交捕獲法PCR類檢測方法優點：該方法靈敏度高，缺點：是容易發生樣品間的交叉污染，從而導致假陽性率高。另外利用該方法進行HPV分型操作比較煩瑣。Southern雜交法優點：該方法靈敏度及特異性均高，適用于HPV 分型、HPV-DNA分子質

4、量鑒定、基因組酶切圖譜建立及物理狀態研究等。缺點：其操作麻煩、耗時、費用高，且必須應用新鮮組織標本，故不宜大規模臨床使用。原位雜交該法利用HPV 探針與組織中的HPV-DNA 雜交，首先將探針和組織中的雙鏈HPV-DNA 變性為單鏈，然后使探針與組織雜交.優點：利于病理學分析缺點：雜交鏈的穩定性不高，在雜交過 程中，部分探針單鏈復性，使雜交率降低，影響HPV-DNA 的檢出率。雜交捕獲法 雜交捕獲(hybridcapturesystem，HCS) 實驗是美國Digene 公司新發展的一種檢測HPV DNA 的技術，其原理是利用對抗體捕獲信號的放大和化學發光信號的檢測。基本實驗步驟如下： 1.

5、樣本DNA 雙鏈被釋放并分解為核苷酸單鏈; 2. DNA 單鏈與RNA 探針結合為RNADNA 雜交體; 3. 特異性抗體將RNADNA 雜交體固定在試管壁或微孔壁上; 4. 結合有堿性磷酸酶的多個第二抗體與RNADNA 雜交體結合,使信號放大; 5. 堿性磷酸酶使酶底物發光,判讀光的強弱可確定堿性磷酸酶的含量,從而確定RNADNA 雜交體的含量。雜交捕獲一代（HC-)試驗可檢測9 種高危型HPV ,包括16 、18 、31 、33 、35 、45 、51 、52 和56 。所用的反應載體是試管；雜交捕獲二代試驗(HC)原來的試管法改為96 孔平板法，能同時檢測13 種高危型HPV (16 、

6、18 、31 、33 、35 、39 、 45 、51 、52 、56 、58 、59 和68) 。優點：其靈敏度和特異性均較好，缺點：存在交叉污染、費用昂貴等問題利用該法進行HPV 分型需要將HPV 常見基因型逐個篩選才能最后確定感染的HPV 型別，成本高。HPV基因芯片檢測方法敏感性高、特異性強、檢測結果準確可靠。有研究報道，HPV 基因芯片的檢測靈敏度是PCR方 法的100 倍。操作簡單：通過1次雜交檢測不僅可以判斷待檢樣品中是否存在HPV 感染，而且可以鑒定出是哪種型別的HPV 感染。針對性強：對樣品中的HPV-DNA 直接進行檢測，可以檢出HPV 的潛伏期感染，克服了血清學及免疫組化檢測法對潛伏感染會產生漏檢的缺點，從而實現對疾病的早期快速診斷。同時檢測多種HPV 型別，對多重HPV. 感染的判斷一目了然，克服了其他HPV. 檢測方法難以判斷混合感染或操作煩瑣的缺點。問題成本高，芯片制作和使用需要較多昂貴的儀器，如用于原位合成寡核苷酸的光刻機器和合成儀，用于合成后點樣的全自動點樣儀，用于信號檢測的激光共聚焦掃描儀或熒光顯微鏡等設備，這些都成為基因芯片檢測成本