1、學習必備歡迎下載課題1微生物的試驗室培育課題目標（一）學問與技能明白有關培育基的基礎學問；把握培育基的制備、高壓蒸汽滅菌和平板劃線法等基本操作技術（二）過程與方法分析試驗思路的確定和形成的緣由，分析試驗流程，對比前面的試驗設計，歸納共性，分析差異，增加印象（三）情感、態度與價值觀形成勇于實踐、嚴謹求實的科學態度和科學精神課題重點無菌技術的操作課題難點無菌技術的操作教學方法啟示式教學教學工具多媒體課件教學過程（一）引入新課在傳統發酵技術的應用中，都利用了微生物的發酵作用，其中的微生物來自于制作過程中的自然感染； 而在工業化生產中，為了提高發酵的質量，需要獲得優良菌種，并保持發酵 菌種的純度；這就

2、要涉及到微生物的培育、分別、鑒別等基本技術；現在我們開頭學習微生物的培育和應用專題；（二）進行新課1基礎學問學習必備歡迎下載1 1 培育基的種類包括固體培育基和液體培育基等；摸索 1瓊脂是從紅藻中提取的多糖，在配制培育基中用作為凝固劑；【補充】培育基的類型及其應用：標準培育基類型配制特點主要應用固體培育基加入瓊脂較多菌種分別 ,鑒定 ,計數物理性質化學組成目的用途半固體培育基加入瓊脂較少菌種儲存合成培育基由已知成安排制而成，培育基成分明確菌種分類、鑒定自然培育基由自然成安排制而成，培育基成分不明確工業生，產降低成本鑒別培育基添加某種指示劑或化學藥劑菌種的鑒別挑選培育基添加（或缺少）某種化學成分

3、菌種的分別液體培育基不加入瓊脂工業生產，連續培育1 2 培育基的化學成分包括水 、 無 機鹽、 碳源、 氮源四類養分成分；摸索 2從細胞的化學元素組成來看，培育基中為什么都含有這些養分成分？c、h 、o、n 、p、s 是構成細胞原生質的基本元素，約占原生質總量的97以上；【補充】碳源：如co2 、糖類、脂肪酸等有機物，構成微生物的結構物質和分泌物，并供應能量；氮源：如n2 、氨鹽、硝酸鹽、牛肉膏、蛋白胨等，主要用來合成蛋白質、核酸及含氮代謝物等；含有c、 h、o、n 的化合物既可以作為碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等；1 3 培育基除滿意微生物生長的ph 、 特別養分物質和 氧氣 等要求；【補

4、充】 生長因子： 某些微生物正常生長代謝過程中必需從培育基中吸取的微量有機小分子，如某些氨基酸、堿基、維生素等；摸索 3牛肉膏和蛋白胨主要為微生物供應糖 、 維 生素和 有機氮等養分物質；摸索 4培育乳酸桿菌時需要添加維生素，培育霉菌時需要將培育基ph 調劑為酸性 ，培育細菌時需要將ph 調劑為中性或微堿性；活動 2：閱讀“無菌技術”，爭論回答以下問題：1 4 獲得純潔培育物的關鍵是防止外來雜菌的入侵；1 5 無菌技術包括：（ 1）對試驗操作空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；（ 2）將培育器皿、接種用具和培育基等器具進行滅菌；學習必備歡迎下載（ 3）為防止四周微生物污染，試驗操作應在酒精燈

5、火焰鄰近旁進行；（ 4）防止已滅菌處理的材料用具與四周物品相接觸；1 6 比較消毒和滅菌（填表）比較項理化因素的作用強度毀滅微生物的數量芽孢和孢子能否被毀滅消毒較為溫順部分生活狀態的微生物不能滅菌摸索 5無菌技術除了防止培育物被污染外，仍具有的目的是防止感染試驗操作者；1 7 消毒方法：（ 1）日常生活常常用到的是煮沸 消毒法；（ 2）對一些不耐高溫的液體，就使用巴氏消毒法（作簡要介紹）；（ 3）對接種室、接種箱或超凈工作臺第一噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強消毒成效，然后使用紫外線進行物理消毒；（ 4）試驗操作者的雙手使用酒精 進行消毒；（ 5）飲水水源用氯氣進行消毒；1 8 滅菌方法：（ 1

6、）接種環、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；（ 2）玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；（ 3）培育基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋；（ 4）表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈；摸索 6對接種環滅菌時要用酒精燈的充分燃燒層火焰灼燒可能伸入試管或培育皿的部位；摸索 7利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時物品不能擺得太擠，目的是防止阻礙熱空氣流通；摸索 8物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要第一打開排氣閥，煮沸并排除鍋內冷空氣，其目的是 有利于鍋內溫度上升 ；隨后關閉排氣閥連續加熱，氣壓升至 100k pa，溫度為 121 ，并維護 15 30

7、 min ；最終切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務必降至 零 時打開鍋蓋，其目的是防止 容器中的液體暴沸 ；【補充】培育基的配制原就：學習必備歡迎下載目的要明確：依據培育的微生物種類、培育的目的等確定培育基的類型和配制量；養分要和諧：培育基中各種養分物質的濃度和比例要相宜；例如：碳氮比4 1 時，谷氨酸棒狀桿菌大量繁衍而產生谷氨酸少；碳氮比為3 1 時，菌體繁衍受抑制而谷氨酸合 成量大增； ph 要相宜：細菌培育基ph 中性或偏堿性，霉菌培育基呈酸性；2試驗操作2 1 運算：依據配方比例，運算100ml 培育基各成分用量；2 2 稱量：精確稱取各成分；稱取牛肉膏和蛋白胨時動作要快速，目的是防止牛

8、肉膏吸取空氣中水分；2 3 溶化：加水加熱熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化鈉連續加熱；加入瓊脂；用蒸餾水定容到100ml ；整個過程不斷用玻棒攪拌，目的是防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂；2 4 調 ph ：用 1mol/lnaoh溶液調劑 ph 至偏堿性；2 5 滅菌：將配制好的培育基轉移到錐形瓶中，加塞包扎后用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌；所用培育皿用報紙包扎后用干熱滅菌箱滅菌；2 6 倒平板：待培育基冷卻至50左右時在酒精燈火焰鄰近操作進行；其過程是：在火焰旁右手拿錐形瓶，左手拔出棉塞；右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口快速通過火焰；左手將培育皿打開一條縫隙，右手將培育基倒入培育皿，馬上蓋上皿蓋；待平板冷卻凝固后

9、，將平板倒過來放置；摸索 1錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是毀滅瓶口的雜菌，防止雜菌感染培育基；摸索 2倒平板的目的是防止培育基冷卻過程中形成的水滴落到培育基表面；摸索 3如皿蓋和皿底之間粘有培育基，就該平板能否培育微生物？為什么？不能；空氣中雜菌會在這些粘附培育基上繁衍，并污染皿內培育基；摸索 4配制斜面培育基中，試管要加塞棉塞的目的是保持通氣并防止雜菌感染；摸索 5試管培育基形成斜面的作用是增大接種面積；學習必備歡迎下載2 7 接種271 微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布法，另外仍有穿刺接種和斜面接種等；272 平板劃線法：通過接種環在瓊脂固體培育基表面連續劃線的操作，將集合的菌種

10、逐步稀釋分散到培育基表面；其操作步驟是：將接種環在酒精燈火焰上灼燒直至燒紅；在酒精燈火焰旁冷卻接種環，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞；將菌種試管口通過火焰達到毀滅試管口雜菌的目的；將冷卻的接種環伸入到菌液中取出一環菌種；將菌種試管口再次通過火焰后塞上棉塞；將皿蓋打開一條縫隙，把接種環伸入平板內劃3 5 條平行線，蓋上皿蓋，不要劃破培育基；灼燒接種環， 冷卻后從第一區劃線末端開頭向其次區域內劃線；重復上述過程， 完成三、四、五區域內劃線；留意不要將第五區的劃線與第一區劃線相連；將平板倒置放在培育箱中培育；摸索 6取菌種前灼燒接種環的目的是毀滅接種環上的微生物；除第一次劃線外，其余劃線前都要灼燒接

11、種環的目的是毀滅接種環上殘留菌種；取菌種和劃線前都要求接種環冷卻后進行， 其目的是防止高溫殺死菌種；最終灼燒接種環的目的是防止細菌污染環境和操作 者；摸索 7在第 1 次劃線后都從上次劃線末端開頭的目的是獲得由單個細菌形成的標準菌落；2 7 3稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布到瓊脂固體培育基上進行培育；當稀釋倍數足夠高時， 即可獲得單個細菌形成的標準菌落；2 74系列稀釋操作：取盛有 9ml 水的無菌試管6 支，編號101、102、 103、104、105、106；用灼燒冷卻的移液管吸取1ml 菌液注入編號為101 試管中， 并吹打 3 次， 使之混勻；從

12、101 倍液中吸取1ml 菌液注入到編號為102 試管內吹打勻稱，獲得102 倍液；依此類推；學習必備歡迎下載摸索 8操作中試管口和移液管應在離火焰12cm 處；整個操作過程中使用了1 支移液管；3結果分析與評判3 1培育未接種培育基的作用是對比，如有菌落形成，說明培育基滅菌不完全；3 2在肉湯培育基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊；3 3培育 12h 和 24h 后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）；緣由是時間越長，菌落中細菌繁衍越多，菌落體積越大；菌落的位置不動，但菌落 數增多；摸索 9在某培育基上顯現了3 種特點不同的菌落，緣由有培育基滅菌不完全或雜菌感染等；摸索 10頻繁使用的菌種利用暫時保藏法儲存，長期儲存菌種的方法是甘油管藏法；前者利用固體斜面培育基培育后，儲存在4冰箱中，每36 個月轉種培育一次，缺點是 儲存時間較短， 簡單發生污染和變異；后者將菌種與無菌體積等量混合后儲存在20冷凍 箱中；（三）課堂總結、點評微培育基生物配制培育基的原就的培育基的配制運算稱量溶化實驗配