生物制藥過程中的細胞系構建與優化考核試卷考生姓名：答題日期：得分：判卷人：

本次考核旨在考察考生在生物制藥過程中，對細胞系構建與優化的掌握程度，包括細胞系的篩選、培養、鑒定、保存及在生物制藥中的應用等方面，以評估考生是否具備相關理論知識和實踐操作能力。

一、單項選擇題（本題共30小題，每小題0.5分，共15分，在每小題給出的四個選項中，只有一項是符合題目要求的）

1.細胞系構建過程中，以下哪項不是常見的篩選方法？（）

A.抗藥性篩選

B.限制性內切酶酶切

C.流式細胞術篩選

D.磁珠分離

2.在細胞培養中，以下哪種物質不是維持細胞生長所必需的？（）

A.葡萄糖

B.胰蛋白胨

C.氨基酸

D.氧氣

3.細胞凍存時，以下哪種保護劑最為常用？（）

A.DMSO

B.甘油

C.乙醇

D.丙酮

4.細胞培養過程中，以下哪項不是細胞污染的常見原因？（）

A.培養基污染

B.儀器污染

C.實驗室環境

D.培養基配比不當

5.以下哪種細胞培養方法適用于大規模生產？（）

A.微生物培養

B.組織培養

C.細胞株培養

D.細胞懸浮培養

6.以下哪種細胞株在生物制藥中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

7.細胞系構建時，以下哪種方法可用于篩選具有特定表型的細胞？（）

A.熒光素酶報告基因

B.抗體檢測

C.RT-PCR

D.Westernblot

8.在細胞培養過程中，以下哪種方法可用于檢測細胞活力？（）

A.比色法

B.流式細胞術

C.電鏡觀察

D.Southernblot

9.細胞凍存時，以下哪個溫度最為適宜？（）

A.-20℃

B.-80℃

C.-196℃

D.4℃

10.以下哪種細胞死亡方式與細胞凋亡無關？（）

A.凋亡

B.壞死

C.自噬

D.線粒體途徑

11.細胞培養過程中，以下哪種物質不是細胞生長抑制因子？（）

A.金屬離子

B.糖類

C.氨基酸

D.有機酸

12.以下哪種細胞培養技術可用于基因編輯？（）

A.CRISPR/Cas9

B.TALEN

C.ZFN

D.重組DNA技術

13.細胞培養過程中，以下哪種方法可用于檢測細胞周期？（）

A.流式細胞術

B.細胞計數

C.染色體分析

D.熒光顯微鏡觀察

14.以下哪種細胞株在腫瘤研究中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

15.細胞培養過程中，以下哪種物質不是細胞生長因子？（）

A.EGF

B.bFGF

C.HGF

D.TNF-α

16.以下哪種細胞株在病毒疫苗生產中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

17.細胞系構建時，以下哪種方法可用于檢測細胞的染色體穩定性？（）

A.流式細胞術

B.Southernblot

C.G-banding

D.RT-PCR

18.以下哪種細胞死亡方式與細胞自噬無關？（）

A.凋亡

B.壞死

C.自噬

D.線粒體途徑

19.細胞培養過程中，以下哪種方法可用于檢測細胞DNA損傷？（）

A.比色法

B.流式細胞術

C.電鏡觀察

D.Southernblot

20.以下哪種細胞株在免疫學研究應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

21.細胞培養過程中，以下哪種物質不是細胞外基質成分？（）

A.纖維連接蛋白

B.膠原蛋白

C.纖維蛋白

D.透明質酸

22.細胞系構建時，以下哪種方法可用于檢測細胞的基因表達？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

23.以下哪種細胞株在神經科學研究中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

24.細胞培養過程中，以下哪種方法可用于檢測細胞的細胞因子分泌？（）

A.比色法

B.流式細胞術

C.電鏡觀察

D.Southernblot

25.以下哪種細胞株在免疫治療中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

26.細胞系構建時，以下哪種方法可用于檢測細胞的藥物敏感性？（）

A.比色法

B.流式細胞術

C.電鏡觀察

D.Southernblot

27.以下哪種細胞株在干細胞研究中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

28.細胞培養過程中，以下哪種方法可用于檢測細胞的細胞因子受體的表達？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

29.以下哪種細胞株在基因治療中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

30.細胞系構建時，以下哪種方法可用于檢測細胞的代謝活性？（）

A.比色法

B.流式細胞術

C.電鏡觀察

D.Southernblot

二、多選題（本題共20小題，每小題1分，共20分，在每小題給出的選項中，至少有一項是符合題目要求的）

1.細胞系構建過程中，以下哪些是常見的細胞篩選方法？（）

A.抗藥性篩選

B.限制性內切酶酶切

C.流式細胞術篩選

D.磁珠分離

2.細胞培養時，以下哪些因素會影響細胞生長？（）

A.培養基成分

B.溫度

C.氧氣濃度

D.實驗室環境

3.細胞凍存時，以下哪些措施有助于保護細胞？（）

A.使用合適的保護劑

B.控制凍存溫度

C.使用無菌技術

D.短時間內完成凍存過程

4.細胞培養中，以下哪些是常見的細胞污染？（）

A.細菌污染

B.真菌污染

C.病毒污染

D.螨蟲污染

5.以下哪些方法可用于檢測細胞活力？（）

A.比色法

B.流式細胞術

C.細胞計數

D.熒光顯微鏡觀察

6.細胞培養過程中，以下哪些是細胞生長抑制因子？（）

A.金屬離子

B.糖類

C.氨基酸

D.有機酸

7.以下哪些細胞培養技術可用于基因編輯？（）

A.CRISPR/Cas9

B.TALEN

C.ZFN

D.重組DNA技術

8.細胞培養中，以下哪些方法可用于檢測細胞周期？（）

A.流式細胞術

B.細胞計數

C.染色體分析

D.熒光顯微鏡觀察

9.以下哪些細胞株在腫瘤研究中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

10.細胞培養中，以下哪些是細胞外基質成分？（）

A.纖維連接蛋白

B.膠原蛋白

C.纖維蛋白

D.透明質酸

11.細胞系構建時，以下哪些方法可用于檢測細胞的基因表達？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

12.以下哪些細胞株在神經科學研究中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

13.細胞培養中，以下哪些方法可用于檢測細胞的細胞因子分泌？（）

A.比色法

B.流式細胞術

C.電鏡觀察

D.Southernblot

14.以下哪些細胞株在免疫治療中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

15.細胞系構建時，以下哪些方法可用于檢測細胞的藥物敏感性？（）

A.比色法

B.流式細胞術

C.電鏡觀察

D.Southernblot

16.以下哪些細胞株在干細胞研究中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

17.細胞培養中，以下哪些方法可用于檢測細胞的細胞因子受體的表達？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

18.以下哪些細胞株在基因治療中應用最為廣泛？（）

A.293細胞

B.HeLa細胞

C.HUVEC細胞

D.3T3細胞

19.細胞系構建時，以下哪些方法可用于檢測細胞的代謝活性？（）

A.比色法

B.流式細胞術

C.電鏡觀察

D.Southernblot

20.以下哪些是細胞培養過程中常見的質量控制措施？（）

A.定期檢測細胞活力

B.定期進行細胞污染檢測

C.定期進行細胞計數

D.定期更換培養基

三、填空題（本題共25小題，每小題1分，共25分，請將正確答案填到題目空白處）

1.細胞系構建的第一步通常是______。

2.細胞培養過程中，維持細胞生長和分裂的培養基通常含有______、______和______。

3.細胞凍存時，常用的保護劑有______和______。

4.細胞培養過程中，細胞污染的主要途徑包括______、______和______。

5.細胞培養的適宜溫度通常為______℃。

6.細胞培養過程中，pH值的理想范圍是______。

7.細胞培養的氧氣需求通常較高，因為細胞需要______。

8.細胞系構建時，常用的篩選方法包括______和______。

9.細胞培養中，細胞周期分為______、______、______和______四個階段。

10.細胞凋亡過程中，細胞膜會形成______。

11.細胞培養過程中，常見的細胞死亡方式包括______、______和______。

12.細胞培養中，細胞活力檢測常用的方法有______和______。

13.細胞培養的培養基中，維生素和激素的作用是______。

14.細胞培養過程中，維持細胞生長的營養物質主要包括______、______、______和______。

15.細胞培養中，細胞密度達到______時，需要傳代。

16.細胞培養過程中，為了防止污染，通常需要______。

17.細胞凍存時，凍存管應置于______溫度保存。

18.細胞培養過程中，無菌操作是防止______的關鍵。

19.細胞系構建時，常用的抗生素有______、______和______。

20.細胞培養中，常用的抗生素抑菌濃度為______。

21.細胞培養過程中，細胞貼壁生長的細胞層稱為______。

22.細胞培養中，細胞貼壁生長的細胞密度達到______時，稱為單層細胞。

23.細胞培養過程中，細胞傳代是指將______。

24.細胞培養中，細胞凍存時，解凍后的細胞需要______。

25.細胞培養過程中，細胞凍存后的復蘇時間一般為______。

四、判斷題（本題共20小題，每題0.5分，共10分，正確的請在答題括號中畫√，錯誤的畫×）

1.細胞系構建過程中，所有細胞都會發生突變。（）

2.細胞培養時，培養基的pH值對細胞生長沒有影響。（）

3.細胞凍存時，DMSO比甘油更適合作為保護劑。（）

4.細胞培養過程中，細胞污染可以通過肉眼觀察發現。（）

5.細胞培養的適宜溫度范圍通常為25-37℃。（）

6.細胞培養中，氧氣濃度對細胞生長沒有影響。（）

7.細胞系構建時，抗藥性篩選是唯一的方法。（）

8.細胞培養過程中，細胞活力可以通過MTT法檢測。（）

9.細胞凋亡是細胞主動死亡的過程，與壞死不同。（）

10.細胞培養中，細胞密度達到90%時，需要傳代。（）

11.細胞培養過程中，無菌操作是防止細胞污染的唯一方法。（）

12.細胞凍存時，凍存管應置于室溫保存。（）

13.細胞培養中，抗生素的添加可以促進細胞生長。（）

14.細胞系構建時，常用的抗生素有青霉素和鏈霉素。（）

15.細胞培養中，細胞貼壁生長的細胞層稱為懸浮細胞層。（）

16.細胞培養過程中，細胞傳代是指將培養的細胞分裝到新的培養瓶中。（）

17.細胞凍存后的復蘇時間越長，細胞活力越低。（）

18.細胞培養中，細胞凍存后的復蘇時間一般為30分鐘。（）

19.細胞培養過程中，細胞凍存后的復蘇應立即進行實驗操作。（）

20.細胞培養中，細胞凍存后的復蘇后，細胞通常需要24小時恢復期。（）

五、主觀題（本題共4小題，每題5分，共20分）

1.請簡述細胞系構建的基本步驟，并說明每個步驟的關鍵點。

2.在生物制藥過程中，為什么需要對細胞系進行優化？請列舉至少三種優化方法及其目的。

3.請解釋細胞系構建過程中可能遇到的常見問題及其解決方法。

4.結合實際案例，說明細胞系構建與優化在生物制藥中的應用及其重要性。

六、案例題（本題共2小題，每題5分，共10分）

1.案例題：某生物制藥公司正在進行一種新型疫苗的研發，需要構建一個能夠高效表達目標抗原的細胞系。請根據以下信息，回答以下問題：

-該公司選擇了HEK293細胞作為構建細胞系的起始細胞。

-研究人員將含有目標抗原基因的重組質粒通過脂質體轉染技術導入HEK293細胞。

-轉染后，研究人員通過篩選方法篩選出穩定表達目標抗原的細胞克隆。

問題：

a.請簡述HEK293細胞作為構建細胞系的起始細胞的原因。

b.在篩選穩定表達目標抗原的細胞克隆時，研究人員可能會采用哪些方法？請至少列舉兩種方法并簡述其原理。

2.案例題：某研究團隊正在進行一種抗腫瘤藥物的開發，該藥物需要通過細胞培養技術進行活性篩選。請根據以下信息，回答以下問題：

-研究團隊從腫瘤組織中分離出原代腫瘤細胞，并成功建立了原代細胞系。

-為了篩選出對腫瘤細胞具有抑制作用的化合物，研究團隊設計了一種基于細胞增殖抑制的篩選方法。

問題：

a.請簡述從腫瘤組織中分離原代腫瘤細胞的過程。

b.在基于細胞增殖抑制的篩選方法中，研究人員可能會如何評估化合物的活性？請簡述評估方法及其依據。

標準答案

一、單項選擇題

1.B

2.D

3.A

4.D

5.D

6.B

7.A

8.A

9.C

10.B

11.B

12.A

13.A

14.B

15.B

16.A

17.C

18.C

19.A

20.B

21.A

22.A

23.D

24.A

25.B

26.A

27.D

28.A

29.B

30.A

二、多選題

1.A,C,D

2.A,B,C,D

3.A,B,C

4.A,B,C

5.A,B,C

6.A,D

7.A,B,C

8.A,C

9.A,B

10.A,B,C,D

11.A,B,C

12.A,B,C

13.A,B,C

14.A,B,C,D

15.A,B,C

16.A,B,C,D

17.A,B,C

18.A,B,C

19.A,B,C

20.A,B,C

三、填空題

1.細胞分離

2.氨基酸、維生素、激素

3.DMSO,甘油

4.培養基污染,儀器污染,實驗室環境

5.37

6.6.5-7.5

7.有氧呼吸

8.抗藥性篩選,限制性內切酶酶切

9.G1期,S期,G2期,M期

10.空泡

11.凋亡,壞死,自噬

12.比色法,流式細胞術

13.促進細胞生長和增殖

14.糖類,脂類,氨基酸,