IntroductionofHistology&Embrology緒論福建醫(yī)科大學(xué)人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)系陳勇2一、組織學(xué)的內(nèi)容和意義研究水平：組織、細胞、亞細胞和分子組織學(xué)（histology）：研究機體微細結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué)

細胞細胞外基質(zhì)組織上皮組織結(jié)締組織肌組織神經(jīng)組織器官和系統(tǒng)人體31.促進了生理學(xué)的進步學(xué)習(xí)組織學(xué)的意義3.促進人類對自身的深入了解2.是病理學(xué)的基礎(chǔ)4二、組織學(xué)的發(fā)展簡史和當(dāng)代組織學(xué)1.光鏡的發(fā)明與細胞、組織概念的提出16世紀末荷蘭人發(fā)明→1665年胡克命名“細胞”→1801年比沙提出“組織”概念2.細胞學(xué)說的提出和組織學(xué)的建立：發(fā)明：1932年盧斯卡、科諾爾，使分辨率提高到0.2nm超薄切片術(shù)（50－80nm）超微結(jié)構(gòu)（ultrastructure）：即細胞膜、細胞器、染色體等亞細胞結(jié)構(gòu)3.電鏡的發(fā)明和超微結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)：4.當(dāng)代組織學(xué)：新儀器、新技術(shù)（免疫組化和原位雜交）使組織學(xué)研究進入分子水平5光鏡電鏡6三、組織學(xué)的學(xué)習(xí)方法1.審視角度組織水平：層次順序、特征性結(jié)構(gòu)和細胞細胞水平：主要細胞的分布、結(jié)構(gòu)特點（含重要細胞的超微結(jié)構(gòu)）及功能2.形態(tài)和結(jié)構(gòu)相統(tǒng)一結(jié)構(gòu)是功能的基礎(chǔ)，功能是結(jié)構(gòu)的必然表現(xiàn)3.培養(yǎng)觀察能力：重視實習(xí)課和圖像觀察4.培養(yǎng)空間思維能力：將二維圖形還原為三維構(gòu)像7四、組織學(xué)的研究技術(shù)光鏡技術(shù)：石蠟切片術(shù)電鏡技術(shù)：透射電鏡和掃描電鏡組織化學(xué)術(shù)：免疫組化和原位雜交放射自顯影術(shù)圖像分析術(shù)細胞培養(yǎng)和組織工程8石蠟切片術(shù)（paraffinsectioning）：取材、固定、脫水、包埋、切片（5～10μm厚）、染色、封片9石蠟切片術(shù)（paraffinsectioning）：取材、固定、脫水、包埋、切片（5～10μm厚）、染色、封片蘇木精（Hematoxylin）伊紅（Eosin）堿性染料使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)和胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色酸性染料使胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosinstaining，HE染色法）嗜堿性嗜酸性10HE染色，垂體遠側(cè)部11涂片：用于液態(tài)組織，如血液，精液12鋪片(Wholemount):用于很薄的組織，如腸系膜。13磨片：用于骨、牙等硬組織14透射電鏡（transmissionelectronmicroscope）：觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)掃描電鏡（scanningelectronmicroscope)：觀察組織或細胞表面的立體結(jié)構(gòu)15漿細胞透射電鏡圖16掃描電鏡圖，血細胞17組織化學(xué)術(shù)（histochemistry）為應(yīng)用化學(xué)、物理、生物化學(xué)、免疫學(xué)或分子生物學(xué)的原理和技術(shù)，與組織學(xué)技術(shù)結(jié)合而產(chǎn)生，在組織切片顯示某種物質(zhì)的存在和分布狀態(tài)分類：一般組織化學(xué)術(shù)免疫組織化學(xué)術(shù)原位雜交術(shù)18一般組織化學(xué)術(shù)：組織中的某種結(jié)構(gòu)成分與所加試劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)、并呈現(xiàn)某種顏色，在顯微鏡下可觀察到糖類：PAS（過碘酸希夫）反應(yīng)，顯示多糖和糖蛋白，呈紫紅色糖多醛品紅硫酸復(fù)合物（希夫試劑，無色）過典酸紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物19圖9PAS反應(yīng)，小腸上皮杯狀細胞的黏原顆粒20免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry）（1）定義：根據(jù)抗原、抗體特異性結(jié)合原理，檢測組織切片中的肽和蛋白質(zhì)（2）原理：用標記的抗體與組織中的抗原結(jié)合，標記物可于顯微鏡下觀察。標記物有熒光素（熒光顯微鏡觀察）、辣根過氧化物酶（光鏡或電鏡觀察）、膠體金（多用于電鏡觀察）21圖10免疫組織化學(xué)原理模式圖22圖11免疫組織化學(xué)（熒光素標記）毛細血管內(nèi)皮細胞呈vWF陽性23圖12免疫組織化學(xué)（辣根過氧化物酶標記）胰島B細胞呈胰島素陽性24圖13免疫組織化學(xué)電鏡圖示上皮細胞膜MAM－6蛋白（A膠體金標記B辣根過氧化物酶標記）25原位雜交術(shù)（insituhybridization）（1）定義：即核酸分子雜交組織化學(xué)術(shù)，檢測基因（DNA片段）的有無、基因的表達活性（mRNA）（2）原理：用帶標記物的已知堿基順序的核酸探針與細胞內(nèi)待測核酸按堿基配對原則進行特異性原位結(jié)合（雜交），并通過對標記物的顯示而獲知待測核酸的有無及相對量（3）常用標記物有放射性核素和地高辛26圖14原位雜交主動脈平滑肌細胞呈彈性蛋白mRNA陽性27放射自顯影術(shù)（autoradiography）概念：通過活細胞對某種放射性物質(zhì)的特異性攝入，以顯示該物質(zhì)在組織和細胞內(nèi)的分布、含量和代謝過程，以反映細胞的功能狀態(tài)應(yīng)用舉例①用3H標記的胸腺嘧啶核苷研究DNA合成和細胞增殖狀態(tài)②用125I觀察甲狀腺濾泡內(nèi)碘化部位28圖15放射自顯影示幽門部胃小凹底的干細胞

（3H標記的胸腺嘧啶核苷標記）29圖像分析術(shù)（imageanalysis）又稱形態(tài)計量術(shù)（morphometry）：應(yīng)用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計學(xué)原理對組織切片提供的平面圖像進行分析，從而獲得立體的組織細胞內(nèi)有形成分的數(shù)量、體積、表面積等參數(shù)，從量的角度顯示結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系體視學(xué)（stereology）：根據(jù)連續(xù)的組織切片應(yīng)用計算機進行三維重建，以獲得微細結(jié)構(gòu)的立體模型30圖16計算機三維重建示肝小葉血管31細胞培養(yǎng)術(shù)（cellculture）（1）定義：把從機體取得的細胞在體外模擬體內(nèi)的條件下進行培養(yǎng)；培養(yǎng)組織塊或器官則稱組織培養(yǎng)術(shù)或器官培養(yǎng)術(shù)（2）用途：用于研究細胞、組織的代謝、增殖、分化、形態(tài)和功能變化，各種理化因子對活細胞的影響（3）培養(yǎng)條件：營養(yǎng)、生長因子、pH值、滲透壓、O2和CO2濃度、溫度，控制污染（4）用相差顯微鏡觀察32圖17體外培養(yǎng)的HeLa細胞相差顯微鏡圖33圖18體外培養(yǎng)的平滑肌細胞（免疫組織化學(xué)染色顯示肌動蛋白）34組織工程（tissueengineering）：用細胞培養(yǎng)術(shù)在體外模擬構(gòu)建機體組織或器官的技術(shù)正在構(gòu)建的有皮膚、軟骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等；其中以組織工程皮膚較為成功，已成為商品用于治療燒傷、皮膚靜脈性潰瘍等疾病35研究包括四個方面：①種子細胞，即增殖旺盛的細胞，多為干細胞②細胞外基質(zhì)，可用生物材料（如牛膠原）和人工合成高分子材