/CNHFA0XX—2022保健食品用原料石斛1范圍本標準適用于保健食品用原料石斛。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。下列文件中所包含的部分條款通過相關標準的引用而成為本標準的部分內容。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版本）適用于本文件。GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》GB2762食品安全國家標準食品中污染物限量GB2763食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量GB16740食品安全國家標準保健食品GB2761食品安全國家標準食品中真菌毒素限量《中華人民共和國藥典》一部《中華人民共和國藥典》四部GB5009.12食品安全國家標準食品中鉛的測定GB5009.11食品安全國家標準食品中總砷及無機砷的測定GB5009.17食品安全國家標準食品中總汞及有機汞的測定3技術要求3.1來源石斛為蘭科植物金釵石斛DendrobiumnobileLindl.、霍山石斛DendrobiumhuoshanenseC.Z.TangetS.J.Cheng、鼓槌石斛DendrobiumchrysotoxumLindl.或流蘇石斛DendrobiumfimbriatumHook.的栽培品及其同屬植物近似種的新鮮或干燥莖。全年均可采收，鮮用者除去根和泥沙；干用者采收后，除去雜質，用開水略燙或烘軟，再邊搓邊烘曬，至葉鞘搓凈，干燥。霍山石斛11月至翌年3月采收，除去葉、根須及泥沙等雜質，洗凈，鮮用，或加熱除去葉鞘制成干條；或邊加熱邊扭成螺旋狀或彈簧狀，干燥。3.2感官要求應符合表1的規(guī)定。表1感官要求項目要求檢驗方法色澤（1）鮮石斛表面黃綠色（2）金釵石斛表面金黃色或黃中帶綠色（3）霍山石斛表面淡黃綠色至黃綠色，偶有黃褐色斑塊。斷面灰黃色至灰綠色。鮮品斷面淡黃綠色至深綠色（4）鼓槌石斛表面金黃色（5）流蘇石斛表面黃色至暗黃色在日光下觀察顏色；如斷面不易觀察，可削平后觀察滋味、氣味（1）鮮石斛氣微，味微苦而回甜，嚼之有黏性（2）金釵石斛氣微，味苦（3）霍山石斛氣微，味淡，嚼之有黏性且少有渣（4）鼓槌石斛氣微，味淡，嚼之有黏性（5）流蘇石斛味淡或微苦，嚼之有黏性滋味可取少量直接口嘗，或加熱水浸泡后嘗浸出液；氣味可直接嗅聞，或在折斷、破碎或搓揉時進行形態(tài)（1）鮮石斛呈圓柱形或扁圓柱形，長約30cm，直徑0.4~1.2cm。表面光滑或有縱紋，節(jié)明顯，色較深，節(jié)上有膜質葉鞘。肉質多汁，易折斷（2）金釵石斛呈扁圓柱形，長20~40cm，直徑0.4~0.6cm，節(jié)間長2.5~3cm。表面有深縱溝。質硬而脆，斷面較平坦而疏松（3）霍山石斛干條呈直條狀或不規(guī)則彎曲形，長20~40cm，直徑1~4mm。表面有細縱紋，節(jié)明顯，節(jié)上有的可見殘留的灰白色膜質葉鞘；一端可見莖基部殘留的短須根或須根痕，另一端為莖尖，較細。質硬而脆，易折斷，斷面平坦，略角質狀。鮮品稍肥大。肉質，易折斷。楓斗呈螺旋形或彈簧狀，通常為2~5個旋紋，莖拉直后性狀同干條（4）鼓槌石斛呈粗紡錘形，中部直徑1~3cm，具3~7節(jié)。表面光滑，有明顯凸起的棱。質輕而松脆，斷面海綿狀（5）流蘇石斛呈長圓柱形，長20~150cm，直徑0.4~1.2cm，節(jié)明顯，節(jié)間長2~6cm。表面有深縱槽。質疏松，斷面平坦或呈纖維性在日光下觀察；長度、寬度及厚度測量時應用毫米刻度尺；質地是指用手折斷時的感官感覺3.3薄層鑒別應符合表2的規(guī)定。表2薄層鑒別項目要求檢驗方法薄層鑒別供試品色譜中，在與石斛堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點a附錄A薄層鑒別供試品色譜中，在與霍山石斛對照藥材和夏佛塔苷對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點b附錄B薄層鑒別供試品色譜中，在與毛蘭素對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點c附錄C薄層鑒別供試品色譜中，在與石斛酚對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點d附錄D注：a為金釵石斛薄層鑒別、b為霍山石斛薄層鑒別、c為鼓槌石斛薄層鑒別、d為流蘇石斛薄層鑒別項3.4特征圖譜應符合表3的規(guī)定。表3特征圖譜項目要求檢驗方法特征圖譜供試品色譜中應呈現(xiàn)5個特征峰，并應與霍山石斛對照藥材參照物色譜峰中的5個特征峰保留時間相對應，其中峰1應與夏佛塔苷對照品參照物峰保留時間相對應*附錄E注：*為霍山石斛特征圖譜3.5理化指標應符合表4的規(guī)定。表4理化指標項目指標檢驗方法水分，%≤12.0《中華人民共和國藥典》2020年版四部0832第二法灰分，%≤5.0《中華人民共和國藥典》2020年版四部2302方法7.0a浸出物（乙醇），%≥8.0a《中華人民共和國藥典》2020年版四部2201熱浸法（乙醇溶劑）鉛（Pb），（mg/kg）≤5.0GB5009.12總砷（As），（mg/kg）≤1.0GB5009.11總汞（Hg），（mg/kg）≤0.3GB5009.17苯醚甲環(huán)唑，（mg/kg）≤1b按照GB2763規(guī)定的方法測定2c吡蟲啉，（mg/kg）≤2b3c井岡霉素，（mg/kg）≤0.1b1c喹啉銅，（mg/kg）≤3b,c咪鮮胺和咪鮮胺錳鹽，（mg/kg）≤15*b20*c噻呋酰胺，（mg/kg）≤2b10c四聚乙醛，（mg/kg）≤0.2b0.5c烯酰嗎啉，（mg/kg）≤20b,c注：a為霍山石斛限度；b為鮮品限度；c為干品限度；*該限量為臨時限量；其他未列的污染物限量應符合GB2762的規(guī)定；其他未列的農藥最大殘留限量應符合GB2763及國家有關規(guī)定和公告。3.6標志性成分指標應符合表5的規(guī)定。表5標志性成分指標項目指標檢驗方法石斛堿（C16H25NO2）含量，%（以干燥品計）a≥0.40附錄F多糖含量，%（以干燥品計）b≥[多糖含量以無水葡萄糖（C6H12O6）含量計]17.0附錄G注：a為金釵石斛標志性成分限度；b霍山石斛標志性成分限度3.7真菌毒素限量真菌毒素限量應符合GB2761中相應類屬食品的規(guī)定和(或)有關規(guī)定。4其他保健食品所用原料為本品的炮制加工品，其炮制加工前的原料應符合本標準。炮制如為凈制、切制的，除另有規(guī)定外，相關項目應符合本標準。炮制如為其他炮制工藝的，炮制加工品應符合相應標準的規(guī)定。T/CNHFA0XX—2022附錄A（規(guī)范性附錄）金釵石斛薄層鑒別檢驗方法A.1一般規(guī)定本標準所用試劑在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。實驗中所用的溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。A.2方法提要本品經甲醇超聲提取后，采用薄層色譜法，以石斛堿對照品為對照對樣品進行鑒別分析。A.3儀器A.3.1分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。A.3.2超聲波清洗儀。A.4試劑和耗材A.4.1甲醇。A.4.2石油醚（60~90℃）。A.4.3丙酮。A.4.4碘化鉍鉀試液。A.4.5硅膠G薄層板。A.4.6對照品石斛堿對照品（購自中國食品藥品檢定研究院）或其他等同對照品，其英文名稱、CAS號、分子式和相對分子量見表A.1。表A.1化學對照品（標準品）信息中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子量石斛堿Dendrobine2115-91-5C16H25NO2263.28A.5色譜條件薄層板：硅膠G；點樣量：供試品溶液20μL，對照品溶液5μL；展開劑：石油醚（60~90℃）-丙酮（7：3）；顯色劑：碘化鉍鉀試液；觀測條件：日光下檢視。A.6操作方法A.6.1對照品溶液的制備：取石斛堿對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，搖勻，備用。A.6.2供試品溶液的制備：取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末1g，加甲醇10mL，超聲處理30分鐘，濾過，備用。A.6.3鑒別分析方法：照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2020年版第四部0502）試驗，吸取供試品溶液20μL，對照品溶液5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60~90℃）-丙酮（7：3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，日光下檢視。T/CNHFA0XX—2022附錄B（規(guī)范性附錄）霍山石斛薄層鑒別檢驗方法B.1一般規(guī)定本標準所用試劑在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。實驗中所用的溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。B.2方法提要本品經無水甲醇超聲提取，提取物回收溶劑后加水溶解，再經水飽和正丁醇振搖萃取，采用薄層色譜法，以霍山石斛對照藥材和夏佛塔苷對照品為對照對樣品進行鑒別分析。B.3儀器B.3.1分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。B.3.2超聲波清洗儀。B.3.3紫外光燈（附365nm波長）。B.4試劑和耗材B.4.1無水甲醇。B.4.2石油醚（60~90℃）。B.4.3乙酸乙酯。B.4.4水飽和正丁醇。B.4.5乙醇。B.4.6丁酮。B.4.7乙酰丙酮。B.4.85%三氯化鋁乙醇溶液。B.4.9聚酰胺薄膜。B.4.10對照藥材和對照品霍山石斛對照藥材（購自中國食品藥品檢定研究院）或其他等同對藥材。夏佛塔苷對照品（購自中國食品藥品檢定研究院）或其他等同對照品，其英文名稱、CAS號、分子式和相對分子量見表B.1。表B.1化學對照品（標準品）信息中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子量夏佛塔苷Schaftoside51938-32-0C26H28O14564.49B.5色譜條件薄層板：聚酰胺薄膜；點樣量：3~5μL；展開劑：乙醇-丁酮-乙酰丙酮-水（4：4：1：7）；顯色劑：5%三氯化鋁乙醇溶液；觀測條件：置紫外燈下（365nm）檢視。B.6操作方法B.6.1對照藥材溶液的制備：取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末1g，加無水甲醇20mL，超聲處理30min，濾過，濾液回收溶劑至干，殘渣加水15mL使溶解，用石油醚（60~90℃）洗滌2次，每次20mL,棄去石油醚液，水液用乙酸乙酯洗滌2次，每次20mL,棄去乙酸乙酯液，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，回收溶劑至干，殘渣加無水甲醇1mL使溶解，搖勻，備用。B.6.2對照品溶液的制備：取夏佛塔苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，搖勻，備用。B.6.3供試品溶液的制備：按照對照藥材溶液制備的方法制備得到供試品溶液，備用。B.6.4鑒別分析方法：照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2020年版第四部0502）試驗，吸取上述三種溶液各3~5μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丁酮-乙酰丙酮-水（4：4：1：7）為展開劑，20℃以下展開，取出，晾干，在105℃烘干，取出，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱約3min，置紫外燈下（365nm）檢視。T/CNHFA0XX—2022附錄C（規(guī)范性附錄）鼓槌石斛薄層鑒別檢驗方法C.1一般規(guī)定本標準所用試劑在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。實驗中所用的溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。C.2方法提要本品經甲醇超聲提取后，采用薄層色譜法，以毛蘭素對照品為對照對樣品進行鑒別分析。C.3儀器C.3.1分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。C.3.2超聲波清洗儀。C.4試劑和耗材C.4.1甲醇。C.4.2石油醚（60~90℃）。C.4.3乙酸乙酯。C.4.410%硫酸乙醇溶液。C.4.5硅膠G薄層板。C.4.6對照品毛蘭素對照品（購自中國食品藥品檢定研究院）或其他等同對照品，其英文名稱、CAS號、分子式和相對分子量見表C.1。表C.1化學對照品（標準品）信息中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子量毛蘭素Erianin95041-90-0C18H22O5318.4C.5色譜條件薄層板：硅膠G；點樣量：供試品溶液5~10μL，對照品溶液5μL；展開劑：石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（3：2）；顯色劑：10%硫酸乙醇溶液；觀測條件：日光下檢視。C.6操作方法C.6.1對照品溶液的制備：取毛蘭素對照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，搖勻，備用。C.6.2供試品溶液的制備：取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，浸漬20分鐘，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）45min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，備用。C.6.3鑒別分析方法：照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2020年版第四部0502）試驗，吸取供試品溶液5~10μL，對照品溶液5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（3：2）為展開劑，展開，展距8cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。T/CNHFA0XX—2022附錄D（規(guī)范性附錄）流蘇石斛薄層鑒別檢驗方法D.1一般規(guī)定本標準所用試劑在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。實驗中所用的溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。D.2方法提要本品經甲醇超聲提取后，采用薄層色譜法，以石斛酚對照品為對照對樣品進行鑒別分析。D.3儀器D.3.1分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。D.3.2超聲波清洗儀。D.4試劑和耗材D.4.1甲醇。D.4.2石油醚（60~90℃）。D.4.3乙酸乙酯。D.4.410%硫酸乙醇溶液。D.4.5硅膠G薄層板。D.4.6對照品石斛酚對照品（購自中國食品藥品檢定研究院）或其他等同對照品，其英文名稱、CAS號、分子式和相對分子量見表D.1。表D.1化學對照品（標準品）信息中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子量石斛酚Gigantol83088-28-2C16H18O4274.31D.5色譜條件薄層板：硅膠G；點樣量：供試品溶液5~10μL，對照品溶液5μL；展開劑：石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（3：2）；顯色劑：10%硫酸乙醇溶液；觀測條件：日光下檢視。D.6操作方法D.6.1對照品溶液的制備：取石斛酚對照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，搖勻，備用。D.6.2供試品溶液的制備：取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末約0.5g，加甲醇25mL，超聲處理45min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5mL使溶解，備用。D.6.3鑒別分析方法：照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2020年版第四部0502）試驗，吸取供試品溶液5~10μL，對照品溶液5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（3：2）為展開劑，展開，展距8cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。T/CNHFA0XX—2022附錄E（規(guī)范性附錄）霍山石斛特征圖譜檢驗方法E.1一般規(guī)定本標準所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。實驗中所用的溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。E.2方法提要本品經甲醇超聲提取，采用高效液相色譜法，以霍山石斛對照藥材和夏佛塔苷對照品為對照對樣品進行特征圖譜分析。E.3儀器E.3.1分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。E.3.2超聲波清洗儀。E.3.3高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。E.4試劑和耗材E.4.1甲醇。E.4.2乙腈：色譜純。E.4.3甲醇：色譜純。E.4.4乙酸銨。E.4.5水。E.4.60.45μm微孔濾膜（有機相）。E.4.7對照藥材和對照品霍山石斛對照藥材（購自中國食品藥品檢定研究院）或其他等同對藥材。夏佛塔苷對照品（購自中國食品藥品檢定研究院）或其他等同對照品，其英文名稱、CAS號、分子式和相對分子量見表E.1。表E.1化學對照品（標準品）信息中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子量夏佛塔苷Schaftoside51938-32-0C26H28O14564.49E.5色譜條件及系統(tǒng)適用性E.5.1色譜條件色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：A相：乙腈-甲醇溶液（1：1）；B相：0.01mol/L乙酸銨溶液，梯度洗脫，梯度程序見表E.2；檢測波長：340nm；進樣量：5~20μL；柱溫：40℃；流速：0.8mL/min。表E.2梯度條件時間/minA相/%B相/%01486201882352278452674553070E.5.2系統(tǒng)適用性理論板數按夏佛塔苷峰計算應不低于5000。E.6操作方法E.6.1參照物溶液的制備取霍山石斛對照藥材約1g，加入甲醇50mL，超聲處理30min（功率250W，頻率50kHz），取出，放冷，濾過，濾液濃縮至5mL，經0.45μm濾膜（E.4.6）濾過，取續(xù)濾液，作為對照藥材參照物溶液，備用。另取夏佛塔苷對照品加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，搖勻，備用。E.6.2供試品溶液的制備取供試品（鮮品干燥后粉碎）粉末約1g，同對照藥材參照物溶液制備方法，制成供試品溶液，備用。E.6.3供試品溶液的測定照高效液相色譜法（《中華人民共和國藥典》2020年版四部0512）試驗，分別精密吸取上述參照物溶液與供試品溶液各5~20μL,注入液相色譜儀，記錄色譜圖。T/CNHFA0XX—2022附錄F（規(guī)范性附錄）標志性成分石斛堿檢驗方法F.1一般規(guī)定本標準所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。實驗中所用的溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。F.2方法提要本品經0.05%甲酸的甲醇溶液回流提取，采用氣相色譜法，以石斛堿的峰面積為對照，以萘的峰面積為內標，計算得到校正因子，以內標法測定金釵石斛中石斛堿的含量。F.3儀器F.3.1分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。F.3.2玻璃回流裝置。F.3.3電熱恒溫水浴。F.3.4氣相色譜儀。F.4試劑和耗材F.4.1甲醇。F.4.2甲酸。F.4.30.45μm微孔濾膜（有機相）。F.4.4對照藥材和對照品石斛堿對照品（購自中國食品藥品檢定研究院）或其他等同對照品，其英文名稱、CAS號、分子式和相對分子量見表F.1。表F.1化學對照品（標準品）信息中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子量石斛堿Dendrobine2115-91-5C16H25NO2263.28F.5色譜條件及系統(tǒng)適用性F.5.1色譜條件色譜柱：DB-1毛細管柱（100%二甲基聚硅氧烷為固定相）（柱長為30m，內徑為0.25mm，膜厚度為0.25μm）；程序升溫：初始溫度為80℃，以每分鐘10℃的速率升溫至250℃，保持5分鐘；進樣口溫度：250℃；檢測器溫度：250℃。F.5.2系統(tǒng)適用性理論板數按石斛堿峰計算應不低于10000。F.6操作方法F.6.1對照品溶液的制備取石斛堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，搖勻，備用。F.6.2內標溶液的制備取萘對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含25μg的溶液，搖勻，備用。F.6.3供試品溶液的制備取鮮品干燥后粉碎，取粉末約0.25g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入0.05%甲酸的甲醇溶液25mL，稱定重量，加熱回流3小時，放冷，再稱定重量，用0.05%甲酸的甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，經0.45μm濾膜（F.4.3）濾過，取續(xù)濾液，備用。F.6.4校正因子的計算精密量取對照品溶液2mL，置5mL量瓶中，精密加入內標溶液1mL，加甲醇至刻度，搖勻，吸取lμL，注入氣相色譜儀，計算校正因子。F.6.5供試品溶液的測定照氣相色譜法（《中華人民共和國藥典》2020年版四部0521）試驗，精密量取供試品溶液2mL，置5mL量瓶中，精密加入內標溶液1mL，，加甲醇至刻度，搖勻，吸取lμL，注入氣相色譜儀，測定。F.7測定結果的計算F.7.1計算公式內標法校正因子按公式（F.1）計算：f=AS/式中：f：內標法校正因子；ASARCSCR金釵石斛中石斛堿的含量以質量分數計，數值以%表示，按公式（F.2）計算：W=AX×式中：W：供試品中石斛堿的質量分數（%）AXA'C'S：內標物質的濃度m：供試品的稱樣量（g）；V：供試品溶液的稀釋體積（mL）；f：內標法校正因子。F.7.2重復性每個試樣取兩個平行樣進行測定，以算數平均值為測定結果，小數點后保留2位。在重復條件下兩次獨立測定的結果絕對差值不得超過算數平均值的10%。T/CNHFA0XX—2022附錄G（規(guī)范性附錄）標志性成分石斛多糖檢驗方法G.1一般規(guī)定本標準所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級水。實驗中所用的溶液在未注明用何種溶劑配制時，均指水溶液。G.2方法提要本品使用水提醇沉方法提取石斛中的多糖成分。多糖在硫酸作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后和苯酚縮合成有色化合物，用紫外分光光度法于適當波長處對其吸光度值進行測定，最終以無水葡萄糖為對照品，采用標準曲線法計算石斛多糖的含量。G.3儀器G.3.1分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。G.3.2分光光度計，用10mm比色杯，在488nm下測吸光度。G.3.3玻璃回流裝置。G.3.4電熱恒溫水浴。G.4試劑和耗材G.4.15%苯酚溶液：取苯酚5g，加水100mL，置于棕色瓶中，搖勻，即得。G.4.2硫酸。G.4.380%乙醇溶液：用95%或無水乙醇加適量水配制。G.4.4對照品無水葡萄