左旋肉堿又稱L－肉堿，是一種促進人體脂肪轉換為動能的類碳水化合物，不僅可用于減肥類的保健食品，也可用于嬰幼兒食品。奶粉中的左旋肉堿是促進奶粉中的脂肪分解、代謝、供能的重要營養素，可以促進體內脂肪的代謝和利用。嬰幼兒飲食結構比較單一，其主要飲食來源為各種乳制品，主要能量來源為乳制品中的脂肪。添加左旋肉堿，可以提高嬰幼兒對奶粉中脂肪的利用率[1]。因此，本文依據SN/T5146—2019第二法[2]液相色譜-質譜法測定嬰幼兒奶粉中左旋肉堿的含量。同時，分析嬰幼兒奶粉中的左旋肉堿含量不確定度，以供參考[3]。1材料與方法1.1試劑乙腈（色譜純，Merck）；甲醇（色譜純，Merck）；氨水（AR，湖南匯虹）；鹽酸（GR，國藥集團）；甲酸（HPLC，科密歐），左旋肉堿（壇墨，批號2362012；含量99.90%；U=0.5%）；D3-左旋肉堿（TRC，批號：5-BKS-60-2）。1.2標準溶液配制1.2.1標準儲備液稱取左旋肉堿標準品7.30mg，乙腈溶解，配制成濃度為729.27μg·mL-1的標準儲備溶液，4℃以下避光保存。1.2.2標準中間液準確吸取標準儲備液（729.27μg·mL-1）0.10mL，用乙腈稀釋至10mL，搖勻，制成7.2927μg·mL-1的標準中間液，4℃以下避光保存。1.2.3D3-左旋肉堿內標標準儲備液準確稱取標準品5.00mg，用乙腈溶解，配制成濃度為500μg·mL-1的標準儲備液，4℃以下避光保存。1.2.4D3-左旋肉堿內標標準中間液準確吸取D3-左旋肉堿內標標準儲備液（500μg·mL-1）0.20mL，用乙腈稀釋至10mL，搖勻，制成10μg·mL-1的標準中間液，4℃以下避光保存。1.2.5標準工作液準確移取標準中間液和內標標準中間液適量，用0.1%甲酸水溶液溶解并稀釋，配制成內標濃度為100ng·mL-1，以及左旋肉堿濃度分別為0.3646、1.8232、18.2312、72.927、145.854、364.635ng·mL-1的系列標準溶液，現用現配。1.3儀器與設備AB-3500液質聯用儀（美國AB）；十萬分之一電子天平（XS205，梅特勒）；萬分之一電子天平（AR224CN，奧豪斯）；ASE-12固相萃取裝置；TG18G-Ⅱ離心機；WD-12氮吹儀；SHA-C(A）恒溫水浴振蕩器；SPE固相萃取柱（OasisMCX柱，60mg/3mL，Waters）。1.4測定方法1.4.1樣品提取與凈化稱取試樣1g→50mL離心管→加內標標準中間液100μL→加入20mL的0.1mol·L-1鹽酸溶液→搖勻，超聲5min→加入5mL的1mol·L-1氫氧化鉀溶液，混勻→60℃水浴皂化30min→冷卻至室溫→加5mL的1mol·L-1鹽酸溶液→渦旋1min→移至50mL容量瓶→用0.1mol·L-1鹽酸溶液潤洗離心管，合并潤洗液至容量瓶→用0.1mol·L-1鹽酸溶液定容至刻度→取1.00mL提取液于15mL離心管→加入9.0mL乙腈→渦旋混勻1min→離心→取1.00mL上清液過OasisMCX固相萃取小柱（依次使用3mL甲醇、3mL水和3mL10mmol·L-1鹽酸活化）→用3mL的10mmol·L-1鹽酸溶液淋洗→棄去淋洗液→抽干小柱→加2mL4%氨水甲醇溶液洗脫→收集洗脫液→40℃氮吹干→加入1.0mL0.1%甲酸水溶液溶解殘渣→過0.22μm濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀測定。1.4.2標準曲線建立以左旋肉堿和D3-左旋肉堿濃度比為橫坐標，左旋肉堿和D3-左旋肉堿內標峰面積比值為縱坐標，繪制標準曲線。1.5建立數學模型式中，X為樣品中左旋肉堿的含量，mg·kg-1；V為樣品定容體積，mL；n為樣品稀釋倍數；m為試樣質量，g；1000為換算系數。1.6不確定度來源的識別對過程分析可知，左旋肉堿含量測定的不確定度主要有以下4個方面[4]：樣品稱量過程引入的標準不確定度urel（m）；樣品測試液中左旋肉堿濃度引入的不確定度urel（C）；樣品稀釋體積引入的不確定度urel（V）；重復性引入的不確定度urel（r）。2不確定度分量的評定與合成2.1A類不確定度重復性引入的不確定度urel（r），主要受操作過程、樣品特性和儀器本身性能等因素的影響，獨立測定6次，結果如下：35.88、36.27、36.59、35.57、36.59、36.50mg·kg-1。6次測量標準偏差：實際檢測時，進行平行實驗，標準不確定度：重復性引入的相對標準不確定度：2.2B類不確定度2.2.1樣品稱量過程引入的標準不確定度urel（m）樣品平均質量為1.0344g，稱量范圍內的最大允許誤差為±0.5mg，按均勻分布考慮（k=），則稱量引入的標準不確定度：其相對標準不確定度：2.2.2樣品測試液中左旋肉堿濃度引入的不確定度urel（c）（1）標準曲線擬合的相對不確定度分量urel（C1）。對6個標準系列溶液各進樣1次，共計6次，得到左旋肉堿峰面積A1和D3-左旋肉堿A2，結果見表1。表1左旋肉堿標準曲線方程數據表以左旋肉堿和內標濃度之比為橫坐標，左旋肉堿峰面積和內標峰面積之比為縱坐標，繪制標準曲線。標準工作曲線為：Y=2.15416X+0.00759，相關系數R=0.9999。標液中左旋肉堿和內標濃度之比的平均值：峰面積比值的殘差標準偏差：對被測樣品的提取液共測量1次，即p=1，測得提取液中左旋肉堿濃度和D3-左旋肉堿濃度比值X=0.72868。于是其標準不確定度u（c1）：（2）儲備液與標準系列溶液的配制引入的不確定度urel（c2）。標準溶液配制時的不確定度主要來源為標準品的稱量、標準品純度和定容。①標準物質純度引入的不確定度urel（c21）本次使用的左旋肉堿標準品的證書標識純度為99.90%；urel=0.5%，則urel（c21）=0.005；D3-左旋肉堿帶入的不確定度不予考慮。②標準品稱量引入的不確定度urel（c22）本次左旋肉堿標準品配制時采用的是十萬分之一電子天平，其質量為7.30mg，該天平準確度等級為Ⅰ級，在（0g≤m≤50g）稱量范圍內的最大允許誤差為±0.05mg，可按均勻分布考慮（k=），則標準品稱量引入的相對標準不確定度：③標準溶液配制過程量器具及溫度變化引入的不確定度urel（c23）標準儲備液、中間液和標準系列溶液配制中，均用到了移液槍和容量瓶，實驗過程中使用的移液槍經校準合格，玻璃量器具均為A級，根據其最大允差計算；實驗室溫度在±5℃范圍內變動，溫度對體積的影響可以通過體積膨脹系數進行計算。因溶液的體積膨脹系數大于容量瓶體積的膨脹，故只考慮前者的影響。水的膨脹系數為2.1×10-4℃-1，均假設為三角分布，各量器具帶入的相對標準不確定度如下：合成，得到：將以上3個分量進行合成，urel（c2）為：2.2.3樣品稀釋體積引入的不確定度urel（V）本實驗樣品處理過程中，用到50mL容量瓶（A級）1次，1mL移液槍移取1.00mL溶液3次，10mL刻度移液管（A）移取9.0mL溶液1次，按照JJG196—2006《常用玻璃量器檢定規程》[5]和JJG646—2006《移液器檢定規程》[6]的要求，按三角分布考慮，則由量器具體積不準引入的相對標準不確定度如下。50mL容量瓶（A級）體積不準帶入的相對標準不確定度：10mL刻度移液管（A級）量取9.0mL體積不準帶入的相對標準不確定度：1mL移液槍量取1.00mL體積不準帶入的相對標準不確定度：由量器具帶入的相對標準不確定度：2.3相對標準不確定度的合成與擴展2.3.1不確定度的合成根據以上結果，將urel（m）、urel（c）、urel（V）、urel（r）進行合成，即2.3.2不確定度的擴展擴展不確定度是標準不確定度u（X）乘以包含因子k。取包含因子P95=2，則所測結果擴展不確定度：U=2×1.18mg·kg-1=2.36mg·kg-1。3結論嬰幼兒奶粉中