ICS11.120.01

CCSC27

團體標準

T/HZBXXXXX—2024

藥品微生物菌種管理技術規范

Practicesfordrugmicrobiome

（征求意見稿）

XXXX-XX-XX發布XXXX-XX-XX實施

惠州市標準化協會發布

T/HZBXXXXX—2024

藥品微生物菌種管理技術規范

1范圍

本文件規定了實驗室菌種的購進、復活、確認、保藏、使用、銷毀、記錄等內容。

本文件適用于藥品微生物限度檢查、無菌檢查的菌種處理和保藏。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB4789.28-2013食品安全國家標準食品微生物學檢驗培養基和試劑的質量要求

GB19489實驗室生物安全通用要求

《中國藥典》2020年版四部

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

標準菌株referencestraine

來自于國內或國際菌種保藏機構的，遺傳學特性得到確認和保證并可追溯，并至少定義到屬或種水

平的菌株。

商業派生菌株Commerciallyderivedstrain

由標準菌株的商業衍生物，來自于其它供應商，所有特性與標準菌株等效，具有可溯源性的菌株，

分為定性商業派生菌株和定量商業派生菌株。商業派生菌株僅可用作工作菌株。

標準儲備菌株referencereservestrain

標準菌株復活后，再轉種至適宜的培養基生長，重新恢復原來的優良特性，即為標準儲備菌株。標

準儲備菌株可用于制備下一代標準儲備菌株或工作菌株。

工作菌株Workingstrain

標準儲備菌株轉種至適宜的培養基生長，即為工作菌株。工作菌株一般不用來進行傳代培養。

代數algebra

從菌種保藏機構獲得的標準菌株為第0代。1代是指將活的培養物接種到微生物生長的新鮮培養基

中培養，任何形式的轉種均被認為是傳代1次。

4菌種購進

標準菌株應來自認可的國內或國外菌種保藏機構。商業派生菌株應來自能提供溯源性報告和菌種

證明，保證其溯源性以及與標準菌株的等效性的生產廠家。

5菌種復活

1

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使處于休眠狀態的菌種恢復其生物特征，也稱為復蘇。通常接種于胰酪大豆胨液體培養基（TSB）

中適宜時間進行復活，或按供應商提供的說明。

6菌種確認和保藏

復壯

標準菌株復活后，再轉種至適宜的培養基生長，使衰退的菌種重新恢復原來的優良特性。

復壯后的菌種方可用于進行確認。

定期確認

驗證菌株的特性和純度，可檢查微生物形態、革蘭氏染色或用生化試驗、分子生物學手段進行鑒定。

保藏

標準菌株經過復壯、確認符合要求后，即可作為標準儲備菌株用于保藏。

可將培養物等份懸浮于抗冷凍的培養基中并分裝于小瓶中，采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫

冷凍（低于-30℃）等方法保藏。

冷凍的標準儲備菌株一旦解凍轉種制備工作菌株后，不得重新冷凍或再次使用。

7菌種使用

工作菌株可用于制備菌懸液。

金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌：取工作菌

株新鮮培養物，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度，即為菌懸液。

黑曲霉：標準儲備菌株轉種至沙氏葡萄糖瓊脂培養基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面，20℃～25℃培養

至獲得豐富的孢子，加入適量稀釋劑（含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液

或含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液），將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢

子懸液至無菌試管內，用稀釋劑制成適宜濃度，即為菌懸液。

8銷毀

廢棄菌株的銷毀應符合GB19489的要求。

9記錄

實驗室應建立菌種管理的文件和記錄，內容包括菌株的購進、轉種、確認、使用、銷毀全過程。

2

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A

A

附錄A

（資料性）

標準菌株到菌懸液工作流程

A.1圖A.1給出了從標準菌株到菌懸液工作流程。

圖A.1標準菌株到菌懸液工作流程圖

B

B

3

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附錄B

（資料性）

實驗室常用的標準儲備菌株保藏方法

B.1瓊脂斜面低溫保藏法

用接種環挑取少量純菌從斜面底部培養基（不要穿進斜面底部培養基中）表面劃線，按規定的溫度

和時間培養，待充分生長后，把培養好的新鮮菌種管用牛皮紙包好，為減緩培養基的水分蒸發，延長保

藏時間，可將菌種保藏管塞換成無菌橡膠塞。放在4℃左右的冰箱中保藏，每隔2～3個月轉接一次，繼

續進行保藏。

銅綠假單胞菌在10℃以下易發生菌體自溶而死亡，不宜在冰箱中保藏。

B.2甘油冷凍管保藏法

將待保藏菌接種于瓊脂斜面上，在適宜的溫度培養，待充分生長后，加入無菌蒸餾水，用無菌接種

環輕輕刮取菌苔，制成菌懸液，在菌懸液中加入等體積無菌的含20%甘油的胰酪大豆胨液體培養基（TSB）

溶液，輕輕振搖試管，使內容物充分混勻，分裝無菌小管，置-80℃～-20℃貯存（1～5年）。在不高

于-70℃低溫冷凍保存可延長保藏時間。

B.3磁珠保藏法

將待保藏菌接種于瓊脂斜面上，在適宜的溫度培養，挑取生長旺盛時期的菌落，接入磁珠保藏管中

（通常需要接入4-7環，對于苛養菌應多接一些），擰上蓋子，充分均勻搖晃后用無菌吸管吸走溶液，

盡可能吸干，然后置-80℃～-20℃貯存。在不高于-70℃低溫冷凍保存可延長保藏時間。

具體操作可按磁珠保藏管廠家說明書。

4

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C

C

附錄C

（資料性）

微生物限度檢查常用菌懸液制備

C.1金黃色葡萄球菌

標準儲備菌株的甘油冷凍管，解凍后吸0.5mL轉種至10mL胰酪大豆胨液體培養基（TSB）中，32.5℃

培養24h，以10倍稀釋或100倍稀釋步驟稀釋至10-7，菌懸液濃度102～103cfu/mL。

C.2大腸埃希菌

標準儲備菌株的甘油冷凍管，解凍后吸0.5mL轉種至10mL胰酪大豆胨液體培養基（TSB）中，32.5℃

培養24h，以10倍稀釋或100倍稀釋步驟稀釋至10-7，菌懸液濃度102～103cfu/mL。

C.3銅綠假單胞菌

標準儲備菌株的甘油冷凍管，解凍后吸0.5mL轉種至10mL胰酪大豆胨液體培養基（TSB）中，32.5℃

培養24h，以10倍稀釋或100倍稀釋步驟稀釋至10-7，菌懸液濃度102～103cfu/mL。

C.4沙門氏菌

標準儲備菌株的甘油冷凍管，解凍后吸0.5mL轉種至10mL胰酪大豆胨液體培養基（TSB）中，32.5℃

培養24h，以10倍稀釋或100倍稀釋步驟稀釋至10-6，菌懸液濃度102～103cfu/mL。

C.5白色念珠菌

標準儲備菌株的甘油冷凍管，解凍后吸0.5mL轉種至1