T/SSF0002-2021PAGEIIICS65.150CCSB52山東水產學會發布ICS65.150CCSB52山東水產學會發布XXXX-XX-XX實施XXXX-XX-XX發布T/SSF山東水產學會團體標準T/SSFXXX-XXXX中間球海膽苗種繁育技術規范TechnicalspecificationofseedinglingsbreedingforJapaneseseaurchinT/SSFxxxx-xxxxPAGE4前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由山東水產學會提出并歸口。本文件主要起草單位：魯東大學、萊州市海洋發展和漁業服務中心、萊州市力洋水產開發有限公司、山東藍色海洋科技股份有限公司、煙臺市海洋經濟研究院。本文件主要起草人：王曉通、張國光、張建柏、姜芳超、劉鴿、王德鑫、王維忠、李汶薈、施娜娜、王林棟、陳偉、田德陽、高雁、徐棟、劉雅瓊、韓怡靜、張學開。中間球海膽苗種繁育技術規范1范圍本文件規定了中間球海膽[Strongylocentrotusintermedius(Agassiz,1863)]苗種繁育的環境條件、培育設施以及親膽選擇、采卵與授精、孵化與選優、幼體培育、采苗、稚膽培育、中間培育等技術要求。本文件適用于中間球海膽苗種繁育。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。GB11607漁業水質標準GB/T18407.4水產品安全質量無公害水產品產地環境要求GB/T22213水產養殖術語NY5071無公害食品漁用藥物使用準則SC/T2094中間球海膽DB33/T2300-2020單胞藻規模化培養技術規范3術語和定義GB/T22213界定的術語和定義適用于本文件。4環境條件4.1場地選擇育苗場選址的場地環境應符合GB/T18407.4的要求。4.2水質條件水源水質應符合GB11607的規定。水溫﹣2℃～26℃；鹽度27～33；pH7.6～8.6；溶解氧＞5mg/L。5培育設施5.1育苗室通風條件好、光線柔和，室內光線應采用自然光。5.2培育池長方形、圓形水泥池或玻璃鋼水槽，池表面積宜為15m2~20m2，池深宜不低于0.8m。5.3單胞藻培養單胞藻培養水體與育苗水體比例應在1∶1～1∶2，符合DB33/T2300-2020的要求。5.4設施設備包括熱量交換器、海水源熱泵機組、生物質鍋爐、配水池，充氧機具備供電系統、供水系統、供氣系統、控溫系統等。沉淀池與蓄水池的總納水量應高于日用水量的1倍。6親膽選擇6.1來源在海區內養殖或底播增殖且檢疫合格的中間球海膽，良種場通過人工選育獲得的成體。應經過嚴格的質量控制，且符合SC/T2094的規定。6.2規格2齡～4齡，殼徑≥60.00mm，個體重≥70.00g。6.3質量個體完整，大棘針形完整、短而尖銳，體質健壯，管足活力強，生殖腺指數20%～25%，雌雄比例10∶1。7采卵與授精7.1采卵親膽生殖腺指數達到20%以上開始采卵，應采用陰干1.5h～2.0h，同溫度水流刺激1.0h～1.5h；或在體腔中注入0.5mol/L的氯化鉀溶液1.0mL～1.5mL。采卵應直接在浮式網箱進行或將每個親膽單獨放置在盛水的容器口上，使其生殖孔向下，采卵密度應≤30ind/mL。7.2授精親膽單個排放時，精卵排出后1.0h以內，分別收集精卵，進行人工授精。低倍鏡觀察每個卵子周圍有3～5個精子即可。8孵化與選優8.1孵化受精卵的孵化密度應不大于30粒/mL。孵化水溫18℃～22℃，鹽度27～35，pH7.6～8.6。孵化過程應微量充氣，每隔1.0h攪起池底的池水。8.2選優采用拖網法或濃縮法，將浮于中上層的幼體選入培育池中進行培育。9幼體培育9.1培育密度幼體密度應控制在0.2ind/mL～0.5ind/mL。9.2餌料投喂餌料應為浮游單細胞藻類，以角毛藻為主，等鞭金藻和小新月菱形藻為輔。每日投餌4次，日投餌量應為4腕期之前1×104cell/mL～2×104cell/mL，6腕期增至2×104cell/mL～4×104cell/mL，8腕期增至4×104cell/mL～6×104cell/mL。應根據幼蟲的密度、攝食情況等因素確定實際投餌量。9.3水質調控9.3.1每日換水1次～2次，每次換1/3～1/2。視水質情況，宜采用吸底或倒池的方法改善水質。采取微充氣的方式，每3m2～5m2分布一個氣石；9.3.2水溫18℃～22℃，溶氧量≥3.5mg/L，鹽度在27～33，光照≤500Lx。10采苗10.1采苗時間幼體發育到八腕后期，出現海膽原基約2d～3d后，幼體有管足伸出時投放附著基。10.2附著基采用透明聚乙烯薄膜、透明聚乙烯波紋板及60目～80目聚乙烯網片，投放前應先清洗消毒干凈，消毒藥物應符合NY5071的要求，并在采苗前在附著基接種、培養底棲硅藻。10.3采苗密度密度以0.2ind/cm2～0.3ind/cm2為宜。11稚膽培育11.1換水每日應換水1次～2次，也可常流水培育，換水量一般為池水容積的1/3～1/2。11.2餌料稚膽以攝食采苗板上的底棲硅藻為主，光照強度應提高到1000lx～3000Lx，每次換水后施肥，施肥量：氮1×106mg/L、磷0.2×106mg/L、鐵0.01×106mg/L、硅0.1×106mg/L。11.3剝離剝離規格為海膽苗殼徑3.0mm以上，底棲硅藻不足時進行。采用軟毛刷直接剝離。剝離過程中動作要輕，盡量避免機械損傷。12中間培育12.1培育方式從采苗板上剝離后的幼海膽，應移到網箱內，內放黑波紋板。12.2培育密度培育密度見表1。表1培育密度殼徑（mm）密度（ind/m2）3.0~5.02000~50005.0~7.01000~20007.0~10.0500~100012.3餌料投喂應以新鮮的海帶、裙帶菜、石莼等大型藻類為主，每日投喂1次，投餌量為體重的10%～20%，視攝食量及殘餌量適當調整，每日清除殘余餌料及死亡個體。12.4水質控制應流水飼育或換水，每日2次，換水量宜為1個全量，連續充氣。每隔3d～5d應清底1次。_________________________________團體標準中間球海膽苗種繁育技術規范編制說明一、項目背景中間球海膽(Strongylocentrotusintermedius(A.Agassiz,1863))，隸屬于棘皮動物門、海膽綱，原產于日本北海道及俄羅斯遠東的沿海地帶。其生殖腺，被廣大食客親切地稱為“海膽黃”，因其富含蛋白質及對人體有益的生理活性物質，成為了一種備受歡迎的高檔保健營養品。除了令人垂涎的食用價值，中間球海膽同樣擁有不容忽視的藥用價值，使其在海洋生物資源中占據重要地位。自1989年起，大連水產學院成功將中間球海膽引入我國，并在北方沿海地區逐步推廣養殖。多年來，中間球海膽的養殖方式不斷創新和完善，形成了包括陸上工廠化養殖、海上筏式養殖及底播增殖等在內的多元化養殖模式。這些養殖方式不僅豐富了海膽的養殖技術，也為中間球海膽的規模化、產業化發展奠定了堅實基礎。中間球海膽作為寒溫帶生物，其生存水溫嚴格控制在2-25℃，而適宜的生長鹽度則維持在27-33‰。這些特定的生長條件對苗種繁育技術提出了更高要求，需要我們在繁育過程中精準控制環境條件，確保苗種的健康生長。近年來，隨著中間球海膽養殖業的快速發展，其產量也呈現出穩步增長的態勢。據中國漁業統計年鑒數據顯示，2021年全國海膽總產量達到了驚人的13590.73噸，其中山東省的海膽養殖總產量更是占據了總量的41.14%，高達5591.01噸。這一數據不僅展示了中間球海膽養殖業的蓬勃生機，也凸顯了制定一套科學、規范的苗種繁育技術規程的迫切性和重要性。因此，為了推動中間球海膽養殖業的持續健康發展，提高苗種質量，降低養殖風險，我們亟需制定一套全面、系統的中間球海膽苗種繁育技術規程。通過科學指導繁育過程，優化繁育技術，我們有望培育出更多優質、高產的中間球海膽苗種，為養殖業的繁榮發展注入新的活力。對中間球海膽苗種繁育技術的研究具有如下意義：1.促進科研與生產的結合：中間球海膽苗種繁育技術規程的制定，有助于推動科研與生產的緊密結合，將科研成果轉化為生產力，為海膽養殖業提供技術支撐。2.提升行業標準化水平：通過制定和實施繁育技術規程，可以推動海膽養殖業的標準化、規范化進程，提高整個行業的生產效率和產品質量。3.增強國際競爭力：優化繁育技術，提高苗種質量，有助于提升我國海膽在國際市場上的競爭力，擴大出口份額，增加外匯收入。總之，中間球海膽苗種繁育技術規程標準制定的意義在于推動海膽養殖業的健康發展，提高經濟效益和生態效益，促進海洋資源的可持續利用。二、工作簡況本標準由山東水產學會提出、魯東大學主編，萊州市海洋發展和漁業服務中心、萊州市力洋水產開發有限公司以及煙臺市海洋經濟研究院等協作編制。魯東大學王曉通團隊對中間球海膽親本的來源與質量進行了嚴格把控，并與合作單位共同深入研究采卵、授精、孵化、苗種培育等一系列繁育技術。同時，團隊還針對水質管理、餌料投喂等關鍵環節進行了深入探討和優化，以確保繁育過程的高效性和海膽苗種的質量。另外，萊州市力洋水產開發有限公司提供了中間球海膽育苗過程中的場地、設施與設備，為繁育工作提供了堅實基礎。主編單位魯東大學及聯合編制單位萊州市海洋發展和漁業服務中心、萊州市力洋水產開發有限公司以及煙臺市海洋經濟研究院共同籌集了600萬的經費，用于中間球海膽的繁育工作。這筆經費的分配與使用主要涵蓋了以下幾個方面：首先，為了確保繁育工作的順利進行，一部分經費將用于改善和升級繁育場地、設施與設備。這包括建設或改造育苗室、采購先進的育苗設備、改善水質處理系統等，為中間球海膽提供一個良好的繁育環境。其次，繁育過程中所需的各項費用，如親本采購、餌料采購、水質監測等，也將從這筆經費中支出。這些都是確保繁育工作正常進行所必需的開支。此外，繁育技術的研發與創新也是經費的重要使用方向。這包括支持科研人員開展相關科研項目，探索新的繁育技術，提高繁育效率和苗種質量。最后，一部分經費還將用于培訓繁育技術人員，提高他們的專業技能和素質，確保繁育工作的專業性和高效性。主編單位及聯合編制單位將能夠有力推動中間球海膽的繁育工作，促進海膽產業的健康發展。三、標準編制原則和確定標準主要內容（一）標準編制原則本標準編制遵循以下幾個原則:1.科學性和合理性標準基于科學原理和實證研究，確保其內容的準確性和可靠性。標準應考慮實際應用的可行性，避免過于嚴格或過于寬松；2.協調性標準應與其他相關標準和法規協調一致，避免沖突；3.可操作性和經濟性標準應易于理解和應用，確保用戶能夠正確實施。標準應考慮成本效益，避免給企業和消費者帶來不合理的經濟負擔。（二）標準主要內容確定1.適用范圍本標準適用于中間球海膽[Strongylocentrotusintermedius(Agassiz,1863)]苗種繁育的環境條件、培育設施、親膽選擇、采卵與授精、孵化與選優、幼體培育、采苗、稚膽培育、中間培育技術要求。2.規范性引用文件按照標準規范要求，將本標準所有規范性引用的文件按照國標、行標和地標的順序依次列出，如下：GB11607漁業水質標準GB/T18407.4水產品安全質量無公害水產品產地環境要求GB/T22213水產養殖術語NY5071無公害食品漁用藥物使用準則SC/T2094中間球海膽DB33/T2300-2020單胞藻規模化培養技術規范3術語和定義GB/T22213界定的術語和定義適用于本文件。4.環境條件：包括場地選擇、水質條件。4.1場地選擇是參考了“GB/T18407.4水產品安全質量無公害水產品產地環境要求”的部分要求。4.2水質條件各個參數確定的依據如下：水溫范圍溫度-2℃～26℃，是中間球海膽的生存溫度范圍，此標準的水溫范圍是育苗場取水的海域溫度范圍，育苗場都裝備溫度調控設施。鹽度范圍27～33，主要根據中間球海膽海區養殖鹽度及保種生產數據確定的。pH值7.6～8.6，是結合中間球海膽繁育生產數據和養殖海域的實際海水pH值調研數據確定。溶解氧含量＞5mg/L，是結合中間球海膽保種生產試驗數據和養殖海域的實際海水溶解氧調研數據確定。5.培育設施5.1中間球海膽幼蟲培育階段要求適當遮光，光照強度控制在500Lx，利于幼蟲在水層中均勻分布，而在投放附著基幼蟲變態附著后，需要適當的光照，有利于附著基上的底棲硅藻繁殖，底棲硅藻適宜生長的光照強度采用自然光即可，既有利硅藻生長，又可抑制綠藻的繁殖。經過項目合作企業萊州市力洋水產開發有限公司育苗生產實踐驗證。5.3由于中間球海膽育苗需要培養單胞藻和底棲硅藻，而底棲硅藻的培養需要較大的表面積接受光照，所以育苗場的育苗水體和單胞藻培育水體的比例確定面積比例在1∶1～1∶2，參考了“DB33/T2300-2020單胞藻規模化培養技術規范”的部分要求。5.4其它設施都是水產育苗場正常應該配套的設備。6.親膽選擇親膽規格及質量：通過養殖發現，中間球海膽殼徑越大，性腺發育成熟越早，且持續時間較長。而較小殼徑（＜4.5cm）的雌性親膽排除的卵子受精能力較差，孵化出的幼蟲易出現畸形。當檢測生殖腺指數為20%以上時，此時鏡檢卵細胞已經成熟，卵圓形，卵徑90μm;精子經海水激活后運動活躍，具備生殖繁育能力，可以用于育苗生產。綜合考慮親膽性腺發育的同步性和較大排放量，我們選用2～4齡，殼徑≥60mm，個體重≥70g，生殖腺指數為20%～25%的成體為親膽，取得很好的育苗效果，并為項目合作企業萊州市力洋水產開發有限公司近幾年的育苗生產實踐驗證。在此規格下，一般雌膽個體排卵量在500萬粒以上，雄膽個體排精量上億個。本標準按照受精過程，一個卵子匹配4～5個精子，并考慮雌、雄膽同步排放率等因素，確定雌雄比例10∶1，生產實踐證明可以滿足育苗生產所需。7.采卵與授精7.1采卵分為物理刺激和化學刺激兩種方法，在生殖腺指數達到25%左右時，兩種方法均能有效地促使親膽排放，獲取成熟的卵子和精子，進行人工授精或自然受精。采卵密度不易過大，否則影響受精卵的孵化率，本標準確定在30粒/ml以內均可以正常孵化。7.2受精過程最好在1小時內盡快完成，時間延長，降低精卵活性，影響孵化率。上述這些數據均為項目合作企業萊州市力洋水產開發有限公司近幾年的育苗生產實踐驗證。8.孵化與選優孵化密度為采卵密度，孵化水質指標參考中間球海膽生物學最適生長范圍。9.幼體培育9.1幼蟲培育密度要考慮幼蟲變態時附著基的采苗密度，以常用的附著基-聚乙烯波紋板為例，每片波紋板表面積為1200cm2，每個框20片為2.4m2，有效水體20m3的育苗池放雙層框采苗，可放150個框，總共360m2，以每張波紋板附苗300枚～500枚左右為宜，采苗數90萬～150萬枚/池，幼蟲培育密度0.2個/ml～0.5個/ml，幼蟲總數400萬～1000萬/池，按照幼蟲浮游階段至變態附著率10%～30%計，可獲變態稚膽100萬枚～120萬枚左右，滿足生產需要。9.2幼蟲階段的單胞藻投喂量主要以每次投餌前、后的鏡檢觀察幼蟲胃中餌料量進行調節，標準中的投餌量均是經過項目合作企業萊州市力洋水產開發有限公司近幾年的育苗生產實踐總結和驗證。9.3幼蟲階段的水質條件以滿足幼蟲正常發育為準，均是采用育苗生產實踐中的數據，取得了較好的育苗效果。10.采苗10.1采苗時機：培育水溫18℃～20℃條件下，在出現海膽原基約2d～3d后，以幼體伸出管足為標志。10.3采苗密度是在幾年的育苗生產過程中，綜合考慮了附著基上底棲硅藻的繁殖速度與稚膽的攝食量、稚膽的生長速度而確定的，此密度下生長的海膽苗個體均勻，生長較快，附著基上的底棲硅藻能滿足海膽苗2～3個月的攝食需求。11.稚膽培育11.1稚膽階段的以換水量滿足稚膽生長的水質條件要求為主，指標數據是項目合作企業萊州市力洋水產開發有限公司近些年生產實踐確定的。11.2此項指標數據都是底棲硅藻正常繁殖需要的營養液配方和光照強度。11.3當稚膽殼徑達到3.0mm時，附著基的底棲硅藻已經被攝食完，其上苗的密度隨著稚膽個體增長而變大，出現大小不一的現象，需要及時剝離、疏苗進入幼膽的中間培育階段。12.中間培育12.2培育密度中的“表1培育密度”，是根據幼膽生長速度、水體的養殖容量和單位水體出苗量的經濟效益的綜合考慮而確定，經過項目合作企業萊州市力洋水產開發有限公司和山東藍色海洋科技股份有限公司生產實踐驗證。表1培育密度殼徑（mm）密度（個/m2）3.0~5.02000~50005.0~7.01000~20007.0~10.0500~100012.3餌料投喂：包括餌料種類、投喂方法、投喂量。餌料種類參考海膽在自然海區的攝食藻類的種類、易獲性（不同季節不同藻類的生長盛期）和經濟性進行綜合考慮。投喂方法、投喂量根據項目合作單位萊州市力洋水產開發有限公司近幾年的幼膽中間培育生產實踐經驗確定。四、主要試驗分析及預期經濟效果在中間球海膽的繁育工作上，我們已經有了部分工作基礎。早在2017年5月，我們從大連市旅順區引進了約1000枚中間球海膽，但鑒于其譜系不明，為避免近交衰退的風險，我們于2018年3月再次從榮成市海域采集了約1100只中間球海膽。通過兩者的雜交，并以生長速度為篩選標準，我們成功建立了快速生長品系，目前這一品系已經繁衍至第五代。為了進一步提升繁育效率，我們自主研發了適配中間球海膽的配合飼料和軟度適宜的塑料薄膜，研究成果發表于核心期刊。同時，我們承擔了2023年煙臺市級統籌涉農項目“中間球海膽與刺參生態養殖技術研發及應用”，深入研究了中間球海膽與仿刺參的室內集約化混養技術，整合優化了室內工廠化養殖池塘的設施配置，探究了影響中間球海膽和仿刺參生長的關鍵技術因素。通過改造大菱鲆車間進行中間球海膽養殖，我們發現相比養殖大菱鲆，這種方法不僅可以節約用水10倍，減少尾水排放，還能縮短養殖周期，提高效益4倍，為新舊動能轉換和綠色健康養殖提供了示范。自2019年起，我們啟動了中間球海膽耐高溫品系的選育工作。每年，我們都會利用升溫脅迫篩選出約500只耐高溫的中間球海膽親本，用于高溫品系的選育。經過連續三代的選育，耐高溫性狀已逐漸穩定。子三代對高溫環境的耐受能力提高了1.2-1.5℃，培育水溫可達26.1℃，高溫苗種的育成存活率更是高達85%以上。與普通群體相比，推廣后的中間球海膽在高溫期的存活率提高了15%。此外，從2020年開始，我們還進行了中間球海膽短棘品系的篩選工作。每年，我們都會從1000只相近規格的中間球海膽親本中，篩選出平均棘刺最短的200只個體，用于短棘品系的選育。經過連續兩代的選育，短棘性狀已逐漸穩定。子二代的平均棘刺長度縮短了20%，稚膽的運輸成活率提高了15%以上。在海上吊籠養殖中，推廣的短棘品系中間球海膽相比普通群體的存活率提高了10%。這些已有的工作基礎為我們進一步深入研究中間球海膽的繁育技術，提升其養殖效益，促進海膽產業的健康發展奠定了堅實的基礎。該標準預計達到以下效果：首先，在經濟效益方面，項目預期能夠顯著提升中間球海膽的繁殖成功率和后代品質，進而增加單位面積的養殖產量，直接提高養殖戶的經濟收入。同時，通過優化親本挑選與淘汰標準，減少不良遺傳特性的傳遞，降低養殖成本，提高養殖效率，進一步增加經濟收益。此外，培育出的優良品種將具備更高的市場價值，增強市場競爭力，擴大市場份額，為養殖戶帶來更多收益。其次，在生態環境方面，項目將減少不良品種的產生，降低