ICS65.020.20

CCSB05

DB1308

承德市地方標準

DB1308/T316—2022

香菇固體轉液體菌種生產技術規程

2022-10-31發布2022-11-01實施

承德市市場監督管理局發布

DB1308/T316—2022

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定

起草。

本文件由承德市農業農村局歸口。

本文件起草單位：平泉市希才應用菌科技發展有限公司。

本文件主要起草人：梁希才、張永峰、柳鳳玉、劉海軍、王麗波、劉紹蒼、梁宏麗、張亞紅、張晨

光、孟凡飛、王彥玲、石建軍、王帥。

I

DB1308/T316—2022

香菇固體轉液體菌種生產技術規程

1范圍

本文件規定了香菇固體轉液體菌種生產的前期準備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。

本文件適用于香菇固體轉液體菌種生產過程管理。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引

用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改單）適用于本文件。

本文件沒有規范性引用文件。

3術語和定義

本文件沒有需要界定的術語和定義。

4前期準備

4.1培養基

小米谷粒、0.5%食品級甘油、葡萄糖粉、食品級酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。

4.2儀器設備

高壓滅菌鍋、超凈工作臺、液體發酵罐、生化培養箱、搖床、pH酸度計、比重計、打漿機、液體

接種槍、0.9立方塑料桶、50目網篩、750ml塑料原種瓶、PDA平板培養基、無棉蓋體、搖瓶、接種工具

等。

5操作流程

谷粒選擇→谷粒浸泡→濾水→添加石膏→裝瓶→滅菌→接菌→菌絲培養→搖瓶→后續養菌→低溫

處理→谷粒菌種懸浮液制備→懸浮液過濾→轉罐擴大培養→檢驗→備用。

6操作方法

6.1谷粒選擇

選擇帶皮小米谷粒，籽粒飽滿、無雜質、直徑為0.1cm～0.15cm，破碎率控制在2%以內。

6.2谷粒浸泡

使用塑料桶或箱作為容器，將谷粒倒入容器中，加水浸泡，水與谷粒的體積比為2:1。環境溫度20℃

１

DB1308/T316—2022

左右，浸泡4h；環境溫度15℃左右，浸泡10h；環境溫度10℃左右，浸泡24h。以谷粒浸透無白心為

宜。

6.3濾水

浸泡完成后濾水，將谷粒置于50目篩子上進行濾水；以篩底沒有水滴滴下，且手抓谷粒不粘手為

宜。

6.4添加石膏

按照谷粒干重的1%比例添加石膏，攪拌均勻。

6.5裝瓶

選擇750ml塑料原種瓶，采用機械或手工裝瓶，裝料高度至瓶肩；裝瓶后的重量在1.3kg～1.4kg。

使用無棉蓋體扣蓋封口，作為培養基。

6.6滅菌

裝瓶后的培養基在4h內進行滅菌，防止培養基變酸；采用高壓滅菌方式滅菌，溫度達到121℃時保

持4h，確保滅菌徹底。

6.7接菌

滅菌完成后，待培養基溫度降到25℃左右時在超凈工作臺無菌的條件下進行接菌，每支20mm×200

mm的斜面試管PDA培養基母種轉接4瓶培養基。

6.8菌絲培養

接菌完成后，在培養溫度為22℃，空氣相對濕度為60%，二氧化碳濃度不超過0.2%的條件下進行培

養。

6.9搖瓶

當菌絲長到培養基1/4左右時進行搖瓶，使得長有菌絲部分的培養基與沒長菌絲的培養基再次混合，

以加快菌種的生長速度。

6.10后續養菌

待培養基中長滿菌絲后，繼續培養10d～12d，令菌絲長入培養基內部，充分分解谷粒培養基，使

谷粒充分軟化，培養成為谷粒原種。該階段的管理要加強通風換氣，二氧化碳濃度不要高于0.15%。

6.11低溫處理

將長好菌絲的谷粒菌種在4℃環境下放置6h。

6.12谷粒菌種懸浮液制備

在無菌的條件下，使用打漿機對低溫處理的谷粒菌種進行充分破碎，在破碎過程中加入溫度為4℃

的0.5%的無菌甘油溶液，使破碎后的谷粒菌種變成懸浮漿液，其中谷粒菌種與甘油溶液的體積比為1:1。

打漿機對谷粒菌種進行破碎時采用間歇模式，每旋轉30s停頓10s，以旋轉10次為限，防止打漿過程中

溫度升高。

２

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6.13懸浮液過濾

三角瓶消毒，安裝消毒后的50目篩片，打漿結束后倒入三角瓶中過濾。

6.14轉罐擴大培養

在無菌條件下，將過濾后的谷粒菌種懸浮液轉入到盛裝培養液的液體發酵罐中進行液體發酵培養，

懸浮漿液與培養液的體積比為1:1200。發酵罐培養液成分按質量配比為：玉米粉2%、豆粕粉2%、葡萄

糖1.5%、酵母粉0.5%和94%的無菌水。發酵罐內培養條件為溫度25℃，罐內壓力0.01兆帕，培養6d。

6.15檢驗

6.15.1取樣

在擴大培養即將結束時檢驗一次即可，即在培養6d取樣檢驗。

6.15.2感官檢查

6.15.2.1看

將樣品靜置桌上觀察。一看菌液顏色和透明度；二看菌絲形態和大小；三看上清液與沉淀的比例中

菌絲體占比達到80%以上；

6.15.2.2旋

手提樣品瓶輕輕旋轉一下，觀其菌絲體的特點。醪液的粘稠度高，說明菌種性能好；稀薄表明菌球

少，不宜使用。菌絲的懸浮力好，放置5min不沉淀，表明菌種生長力強；反之，如果菌絲極易沉淀，

說明菌絲已老化或死亡。

6.15.2.3嗅

在旋轉樣品后，打開瓶蓋嗅氣味。培養好的優質液體菌種，均具有芳香氣味；染雜菌的培養液則散

發出酸、甜、霉、臭等各種異味。

6.15.3理化試驗

6.15.3.1菌絲干重

量取液體菌種10ml，用水分測試儀烘干至含水量18%，然后稱量，菌絲干重≥2g為合格。

6.15.3.2液體粘稠度

將液體菌種置于量筒中，使用比重計進行粘稠度測量，比重超過1.2為合格。

6.15.3.3pH值測定

將液體菌種取出后，使用pH值酸度計進行精準測量，pH值在4～4.2范圍值內為合格；

6.15.3.4菌絲活力

將液體菌種菌絲球轉接與平板PDA培養基上，28℃恒溫培養24h，菌絲球正常萌發菌絲為合格菌種。

３

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6.16備用

液體菌種經檢驗合格可備用。

_________________________________

４

DB1308/T316—2022

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定

起草。

本文件由承德市農業農村局歸口。

本文件起草單位：平泉市希才應用菌科技發展有限公司。

本文件主要起草人：梁希才、張永峰、柳鳳玉、劉海軍、王麗波、劉紹蒼、梁宏麗、張亞紅、張晨

光、孟凡飛、王彥玲、石建軍、王帥。

I

DB1308/T316—2022

香菇固體轉液體菌種生產技術規程

1范圍

本文件規定了香菇固體轉液體菌種生產的前期準備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。

本文件適用于香菇固體轉液體菌種生產過程管理。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引

用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改單）適用于本文件。

本文件沒有規范性引用文件。

3術語和定義

本文件沒有需要界定的術語和定義。

4前期準備

4.1培養基

小米谷粒、0.5%食品級甘油、葡萄糖粉、食品級酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。

4.2儀器設備

高壓滅菌鍋、超凈工作臺、液體發酵罐、生化培養箱、搖床、pH酸度計、比重計、打漿機、液體

接種槍、0.9立方塑料桶、50目網篩、750ml塑料原種瓶、PDA平板培養基、無棉蓋體、搖瓶、接種工具

等。

5操作流程

谷粒選擇→谷粒浸泡→濾水→添加石膏→裝瓶→滅菌→接菌→菌絲培養→搖瓶→后續養菌→低溫

處理→谷粒菌種懸浮液制備→懸浮液過濾→轉罐擴大培養→檢驗→備用。

6操作方法

6.1谷粒選擇

選擇帶皮小米谷粒，籽粒飽滿、無雜質、直徑為0.1cm～0.15cm，破碎率控制在2%以內。

6.2谷粒浸泡

使用塑料桶或箱作為容器，將谷粒倒入容器中，加水浸泡，水與谷粒的體積比為2:1。環境溫度20℃

１

DB1308/T316—2022

左右，浸泡4h；環境溫度15℃左右，浸泡10h；環境溫度10℃左右，浸泡24h。以谷粒浸透無白心為

宜。

6.3濾水

浸泡完成后濾水，將谷粒置于50目篩子上進行濾水；以篩底沒有水滴滴下，且手抓谷粒不粘手為

宜。

6.4添加石膏

按照谷粒干重的1%比例添加石膏，攪拌均勻。

6.5裝瓶

選擇750ml塑料原種瓶，采用機械或手工裝瓶，裝料高度至瓶肩；裝瓶后的重量在1.3kg～1.4kg。

使用無棉蓋體扣蓋封口，作為培養基。

6.6滅菌

裝瓶后的培養基在4h內進行滅菌，防止培養基變酸；采用高壓滅菌方式滅菌