Q/LB.□XXXXX-XXXXT/SASXXXX—XXXX前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由中國科學院上海高等研究院提出。本文件由上海市標準化協會歸口。本文件起草單位：中國科學院上海高等研究院，上海交通大學、中國科學院長春應用化學研究所、上海師范大學、西南科技大學、中石化（北京）化工研究院有限公司、國家藥品監督管理局疫苗及生物制品質量監測與評價重點實驗室、上海藥品評審核查中心、賽諾普（蘇州）科學儀器有限公司、安徽國科儀器科技有限公司、花安堂生物科技集團有限公司。本文件主要起草人：李怡雯、李娜、劉廣峰、宋攀奇、張建橋、李秀宏、滑文強、魏曉慧、門永鋒、鄒愛華、田強、唐毓婧、陸家海、葉宇翔、周一萌、宋良益、程薇、盧永杰。本文件首期承諾執行單位：上海交通大學、中國科學院長春應用化學研究所、上海師范大學、西南科技大學、中石化（北京）化工研究院有限公司、國家藥品監督管理局疫苗及生物制品質量監測與評價重點實驗室、上海藥品評審核查中心、賽諾普（蘇州）科學儀器有限公司、安徽國科儀器科技有限公司、花安堂生物科技集團有限公司。脂質體脂膜結構的測定X射線小角散射檢測法范圍本文件規定了利用X射線小角散射技術測定脂質體的脂質雙分子層及其修飾磷脂層的厚度與分布的方法。本文件適用于脂膜特征結構在納米尺寸范圍內的各向同性的稀疏樣品體系，主要包括包載藥物等成分的脂質體溶液樣品。規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T13221納米粉末粒度分布的測定X射線小角散射法GB/T38944無損檢測中子小角散射檢測方法ISO17867粒度分析-X射線小角散射方法(Particlesizeanalysis-SmallangleX-rayscattering(SAXS))ISO20804X射線小角散射方法測量多孔及顆粒體系內比表面積(Determinationofthespecificsurfaceareaofporousandparticulatesystemsbysmall-angleX-rayscattering)ISO23484X射線小角散射方法測量粒子濃度(Determinationofparticleconcentrationbysmall-angleX-rayscattering)ISO26824顆粒體系的粒子表征-術語(Particlecharacterizationofparticulatesystems–Vocabulary)術語和定義ISO26824界定的以及下列術語和定義適用于本文件。3.1脂質體liposome由脂質雙分子層形成的微小囊泡。3.2稀疏體系dilutesystem所包含的待測粒子濃度低，粒子間相互作用可以忽略不計的體系。符號本文件使用的符號如表1所示。表1符號含義及單位符號含義單位q散射矢量的大小nm-1I(q)散射強度-T透射率-P(q)形狀因子-F(q)散射振幅-ρ(z)電子密度分布-方法原理X射線小角散射是由樣品中電子密度不均勻性分布所引起的、位于入射X射線束附近（通常小于5°）的散射現象。對于溶液樣品而言，其散射圖像源于X射線照射到的所有溶劑和溶質分子散射信號的疊加。因此，為得到脂質體粒子的散射強度，需從總散射強度中扣除溶劑等本底散射強度。在稀疏樣品體系中，粒子間的相互作用忽略不計，脂質體粒子的散射強度直接反映了其內部結構特征。因此，可以通過結構模型擬合計算得到脂質雙分子層及其修飾磷脂層的厚度和分布等參數。試樣的制備和要求濃度要求脂質體樣品濃度過低會導致散射信號太弱，而濃度過高可涉及粒子間的相互作用，影響數據分析。樣品制備時宜通過建立濃度梯度確定散射強度與濃度的依賴關系。分散性要求樣品制備宜保證其均一性或單分散性，如采用特定孔徑的聚碳酸酯膜擠出。輔助性測試要求宜結合動態光散射、透射電鏡等表征技術確定樣品的尺寸、形貌等基本特征，輔助X射線小角散射技術進行結構模型的建立。對于包載藥物等成分的脂質體樣品，宜同時制備其未包載的空白脂質體作為檢測對照組。檢測系統和裝置檢測系統X射線小角散射檢測系統應包括光源、準直系統、真空系統、樣品臺、探測器等，可選用實驗室X射線小角散射儀或同步輻射X射線小角散射線站進行檢測。前者通常采用金屬靶產生X射線，后者則依托更高強度的同步輻射X射線光源。樣品池裝置樣品池應滿足X射線散射的光路要求，如自身不能產生明顯的散射信號、X射線透過率高等。通常可以將樣品注入薄壁毛細管（如外徑為1mm，壁厚為0.01mm的石英玻璃毛細管）內進行檢測。宜選擇便于重復使用的樣品池裝置，以避免因樣品池間差異所造成的本底散射扣減的不準確。檢測區間及校正在檢測之前，應根據脂質體脂膜結構的尺寸范圍對所需的散射矢量區間按照公式（1）進行估算， q=2πd (式中：d——樣品的目標結構尺寸，單位為納米（nm）。估算出所需要的散射矢量檢測區間后，即可在一定的入射X射線波長條件下，通過改變樣品到探測器距離來調節實際的檢測范圍。應選擇校準樣品（如山崳酸銀粉末）對當前檢測條件下的散射矢量進行標定。檢測步驟步驟一將樣品池裝置固定在樣品臺上，調整樣品池中心與X射線光路位置一致。步驟二將樣品注入樣品池中。根據樣品對X射線的吸收情況以及散射信號接收探測器的靈敏度和飽和度，選擇合理的曝光時間。若采用同步輻射X射線光源測試，曝光時間宜設置為1s～100s；采用金屬靶X射線源測試，曝光時間宜設置為30min～60min。步驟三開始測試樣品，保存及記錄樣品的散射圖像以及光強度計數。應進行多次曝光測試，取平均值以提高散射數據信噪比。步驟四清洗樣品池后，將與樣品相匹配的緩沖溶劑注入樣品池中。測試過程中的光路狀態、曝光時間等應與樣品的測試條件保持一致。步驟五清洗樣品池后，從步驟二開始測試下一個樣品。檢測數據分析步驟一利用軟件標出探測器損壞及無效的像素單元（例如不能正常感光、束流阻擋器位置處的像素單元等），并在后續計算過程中忽略該單元的數據。步驟二脂質體溶液樣品為各向同性體系，無需選取特定方向，全探測器的數據均可用于徑向平均轉化為一維散射強度數據。注：絕對散射強度校正非本標準數據分析必要步驟，如有需要，可參考ISO20804-2022執行。步驟三按公式（2）對樣品吸收、本底進行校正，得到修正后的散射強度， Imeasq=Isq式中：Imeasq——實驗測得的IsqIbqTsTb透射率由光強度計數比值計算而得。步驟四宜根據檢測樣品的脂膜特征信息（如雙分子層層數等），選擇合適的結構模型以及尺寸分布函數進行散射強度曲線擬合。注：附錄A示出了一種脂膜多層結構模型及其表達式。步驟五基于公式（3）進行優化搜索，定量解析出脂質體的脂質雙分子層及其修飾磷脂層的厚度等參數。簡化的卡方值χr2 χr2=1N?式中：Imeasq——通過公式（2）修正后的散射強度；ImodelqN——數據點個數；M——擬合參數個數；?Ii——數據點的索引。檢測數據分析結果擬合結果的曲線表示宜采用實驗散射強度與模型擬合散射強度的對比關系圖表達，橫坐標為散射矢量，縱坐標為散射強度，如圖1所示。圖1實驗散射強度與模型擬合散射強度對比相關參數表示可根據需要，采取表格形式展示擬合參數、結構參數等。誤差分析主要包含散射強度數據轉化時的統計誤差、數據處理過程中的誤差傳遞等。檢測報告檢測報告應至少包括以下內容：儀器設備的型號；測試條件；樣品信息；所依據的分析方法文件及其編號，如標準名稱及編號等；分析結果；檢測人員及日期等。

附錄A（資料性）一種脂膜多層結構模型根據溶液散射理論，在稀疏溶液體系中可以忽略粒子間的相互作用，那么完成本底校正后的粒子散射強度Iq可近似為其形狀因子Pq，即將散射振幅的平方F( Pq=F(以單層脂質體為例，如果忽略脂質體整體形貌及尺寸對散射數據的影響，只關注脂膜結構特征，那么可以在一定的散射矢量范圍內，選擇如下脂膜多層結構模型進行結構擬合計算。圖A.1一種脂膜多層結構模型示意圖在該模型中，平行于膜層的同一平面內的電子密度均一，但是在每個膜層內，沿垂直于脂膜平面方向上的電子密度分布函數為高斯函數，用公式（A.2）表示： ρz=式中：z——沿平面結構的法線方向的坐標位置；ρz——單個脂質體在zi——片層結構模型中各膜層所在的層數；ρiexp?ρi——第iεi——電子密度為ρσi——第i層膜層的電子密度分布標準差。對公式（A.2）電子密度分布函數進行傅立葉變換并進行取向平均后，得到該結構模型的形狀因子，用公式（A.3）表示： Pq=q?2通過上述計算模型，擬合實驗測得的散射數據與理論散射曲線，使得兩者盡可能接近。進一步地，通過此優化求解后的電子密度分布情況，可以得到脂質體脂質雙分子層及其修飾磷脂層的厚度與分布特征。各膜層厚度的定義可參考現有技術，根據實際情況進行說明并體現在報告中，如定義膜層的邊界位置為該層電子密度衰減至最大值的10%位置處。

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