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沉淀反應(yīng)(precipitationreaction)鄧念華臨床免疫學(xué)教研室沉淀反應(yīng)6可溶性抗原+相應(yīng)抗體→肉眼可見的沉淀一、定義:凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)抗原性質(zhì)顆粒性抗原/可溶性抗原致敏顆粒可溶性抗原反應(yīng)時(shí)間幾分鐘至十幾分鐘數(shù)小時(shí)至數(shù)天反應(yīng)產(chǎn)物凝集塊沉淀物稀釋物稀釋抗體稀釋抗原沉淀反應(yīng)6形成肉眼可見的大的免疫復(fù)合物。沉淀線(環(huán))的觀察以及免疫比濁法中的終點(diǎn)法就是測(cè)定此階段形成的復(fù)合物
第一階段第二階段二、沉淀反應(yīng)分兩個(gè)階段抗原抗體特異性結(jié)合,快速但不可見。免疫比濁法中的速率法就是利用此階段測(cè)定免疫復(fù)合物形成的速率。沉淀反應(yīng)61897年Kraus就發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)液(毒素)與相應(yīng)抗血清混合出現(xiàn)沉淀1905年Bechhold把抗體放在明膠中,將抗原加于其中,發(fā)現(xiàn)沉淀反應(yīng)可在凝膠中進(jìn)行1946年Oudin報(bào)告了試管免疫擴(kuò)散技術(shù)1965年Mancini提出單向免疫擴(kuò)散技術(shù),使定性免疫試驗(yàn)向定量化發(fā)展1959年Schultze建立透射比濁法1967年Ritchie建立散射比濁法1977年Sternberg建立速率散射比濁法
發(fā)展趨勢(shì):快速、微量、自動(dòng)化。三、發(fā)展史:沉淀反應(yīng)6液體內(nèi)沉淀試驗(yàn)?zāi)z內(nèi)沉淀試驗(yàn)?zāi)z免疫電泳技術(shù)沉淀反應(yīng)可分三類免疫濁度測(cè)定絮狀沉淀試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)流免疫電泳火箭免疫電泳免疫固定電泳沉淀反應(yīng)6
第一節(jié)液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)一、絮狀沉淀試驗(yàn):(flocculationtest)二、環(huán)狀沉淀試驗(yàn):(ringprecipitationtest)三、免疫濁度試驗(yàn):(immunoturbidimetry)沉淀反應(yīng)6
原理
一、絮狀沉淀試驗(yàn)(flocculationtest)方法評(píng)價(jià):
敏感度較低、簡(jiǎn)便、易受抗原抗體比例影響最適比臨床意義:
測(cè)定抗原抗體反應(yīng)的最適比。37℃抗原抗體康氏試驗(yàn):梅毒抗體沉淀反應(yīng)6康氏試驗(yàn)康氏試驗(yàn)是又稱非特異類脂質(zhì)抗原試驗(yàn),可用于梅毒篩查。原理:使用酒精浸泡牛心粉,提取磷脂部分做為抗原,加入膽固醇以增加靈敏度,與待測(cè)血清中抗體(反應(yīng)素),在電解質(zhì)作用下,抗原抗體形成可見的沉淀反應(yīng)。請(qǐng)問目前常用的梅毒篩查有哪些方法?梅毒感染的確證實(shí)驗(yàn)有哪些?沉淀反應(yīng)6抗原稀示意圖釋1:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀釋加入抗血清各管抗體量不變振搖混勻、37℃孵育沉淀量不同出現(xiàn)沉淀量最多的管為最適比例管。輕搖
絮狀沉淀試驗(yàn)AgAbAg沉淀反應(yīng)6抗體稀釋度抗原稀釋度1/101/201/401/801/1601/3201/640對(duì)照1/5+++++++++++++/--1/10+++++++++++++-1/20+++++++++++++-1/40-+/-+++++++++-1/80----+++-方陣滴定法沉淀反應(yīng)6
原理
二、環(huán)狀沉淀試驗(yàn)(ringprecipitationtest)方法評(píng)價(jià):
敏感度較低、簡(jiǎn)便、快速、實(shí)用、只能定性不能定量、缺乏多對(duì)分辨力。臨床意義:
鑒定血跡、診斷炭疽AbAg沉淀管內(nèi)徑1.5~2mm陽性:1~5min出現(xiàn)沉淀環(huán)陰性:30min不出現(xiàn)沉淀環(huán)沉淀反應(yīng)6
三、免疫濁度試驗(yàn)1.透射比濁法(transmissionturbidimetry)2.免疫膠乳比濁法(immunolatexturbidimetry)3.散射比濁法(nephelometry)
①速率散射比濁法(ratenephelometry)
②終點(diǎn)散射比濁法(endpointnephelometry)返回沉淀反應(yīng)6海德堡進(jìn)行的沉淀分析
1、在抗體濃度過量時(shí),隨著抗原濃度不斷上升免疫沉淀逐漸增多(如右圖)原理:抗原抗原抗體復(fù)合物沉淀反應(yīng)6檢測(cè)器檢測(cè)器透射測(cè)定散射比濁
2.抗原抗體復(fù)合物,在一定光線照射下,可產(chǎn)生散射光及透射光,并用儀器檢測(cè)這些光的強(qiáng)度,可反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物的量。原理:沉淀反應(yīng)6I0入射光
透射光I吸光度A=lgI0/I=k1bC復(fù)合物Ag-Ab復(fù)合物1.原理:一)透射比濁法C復(fù)合物=k2C抗原(Ab過量)吸光度A
=k3C抗原足夠大(35-100nm),要形成一定濁度沉淀反應(yīng)6稀釋待檢樣品和標(biāo)準(zhǔn)品(5ul)ApoB抗血清1m(過量)(1∶32~1∶64)孵育一定時(shí)間測(cè)定吸光度(A340nm)值A(chǔ)吸光度抗原濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線2.技術(shù)要點(diǎn)(載脂蛋白B的檢測(cè))按log-logit轉(zhuǎn)換或y=ax3+bx2+cx+d方程進(jìn)行曲線擬合,制備劑量-反應(yīng)曲線沉淀反應(yīng)64.方法評(píng)價(jià):
操作簡(jiǎn)單、快速、易于自動(dòng)化;敏感度比單擴(kuò)高10倍,但比散射比濁低(數(shù)量多而大的抗原抗體復(fù)合物才適用本方法);反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)(測(cè)定的是第二反應(yīng)階段);抗體用量較大。3.影響因素:注意抗原的稀釋;標(biāo)本應(yīng)避免混濁。沉淀反應(yīng)6代表性儀器:全自動(dòng)系列化分析儀:olympusAU560,日立7600全自動(dòng)生化分析儀。特定蛋白分析儀檢測(cè)前白蛋白、載脂蛋白A、B等。沉淀反應(yīng)61.原理入射光I0透射光I吸光度A=lgI0/I=k1bC復(fù)合物C復(fù)合物=k2C抗原(抗體過量)二)免疫膠乳比濁法吸光度A
=k3C抗原沉淀反應(yīng)62.技術(shù)要點(diǎn)稀釋待檢樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加抗體致敏膠乳溶液
孵育一定時(shí)間測(cè)定吸光度(A340nm)值制備劑量-反應(yīng)曲線A吸光度抗原濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線沉淀反應(yīng)63.方法評(píng)價(jià):敏感度高(達(dá)ng/L);穩(wěn)定、可靠,特異性好;不需特殊儀器設(shè)備;
血清中的RF可與IgGFc段結(jié)合,使IgG致敏膠乳顆粒出現(xiàn)非特異性凝集,用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干擾。
沉淀反應(yīng)6代表性儀器:普通分光光度計(jì)自動(dòng)生化分析儀:olympusAU560沉淀反應(yīng)6三)散射比濁法I0入射光
散射光Iα(5°—96°)I=I0[4π2(dn/dc)2Mc(1+cosα)]
Nγ2λ4散射光強(qiáng)度顆粒含量正相關(guān)顆粒大小正相關(guān)入射光波長(zhǎng)負(fù)相關(guān)測(cè)量散射光的角度正相關(guān)沉淀反應(yīng)6顆粒直徑<<入射光波長(zhǎng)顆粒直徑>或=入射光波長(zhǎng)散射角度盡可能大:提高靈敏度;排除大顆粒的干擾沉淀反應(yīng)6第一階段第二階段速率散射比濁終點(diǎn)散射比濁沉淀反應(yīng)6I0入射光
I=K1C復(fù)合物散射光Iα(5°—96°)C復(fù)合物=K2C抗原(Ab濃度恒定)I=K3C抗原1.原理:抗原與過量抗體反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí),形成復(fù)合物不再增加,并在形成絮狀沉淀前,測(cè)定此時(shí)的溶液濁度。抗原抗體作用30-120min內(nèi)比濁,形成較小復(fù)合物(一)終點(diǎn)散射比濁法沉淀反應(yīng)62.技術(shù)要點(diǎn)稀釋待檢樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加最適工作濃度的抗體
孵育測(cè)定散射光強(qiáng)度I(450nm)繪標(biāo)準(zhǔn)曲線濁度抗原濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線沉淀反應(yīng)64secI2I2-I1抗原濃度I1>閥值7.5s-120sI1I1<閥值稀釋標(biāo)本全量標(biāo)本1/10標(biāo)本量沉淀反應(yīng)6定時(shí)散射比濁法測(cè)定原理示意圖沉淀反應(yīng)64.方法評(píng)價(jià):可自動(dòng)化;敏感度達(dá)ug/L水平,高于透射比濁法;但反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)(第二階段)。3.抗原過量檢測(cè):抗體過量:閾值限:。沉淀反應(yīng)6代表性儀器:DadeBehing公司:
BN-100
BN-Prospec
BN-Ⅱ特定蛋白系統(tǒng)。沉淀反應(yīng)6BNProSpec全自動(dòng)特定蛋白分析儀沉淀反應(yīng)6(二)速率散射比濁法1.原理:
是抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)測(cè)定法;速率是指抗原抗體反應(yīng)在單位時(shí)間內(nèi)形成免疫復(fù)合物的量;連續(xù)測(cè)定各時(shí)間復(fù)合物形成的速率與其產(chǎn)生的散射光信號(hào)聯(lián)系在一起,形成動(dòng)態(tài)的速率散射比濁法,每項(xiàng)檢測(cè)僅1~2min即可完成。沉淀反應(yīng)6抗原抗體復(fù)合物形成的速率
累計(jì)時(shí)間(s)形成IC總量速率累計(jì)時(shí)間(s)形成IC總量速率5
8-10
13
515
25
1220
60
3525
150
9030
230
8035
300
7040
360
6045
415
5550
450
4555
480
3060
500
20沉淀反應(yīng)6抗原抗體反應(yīng)速率的動(dòng)態(tài)變化沉淀反應(yīng)6沉淀反應(yīng)62.技術(shù)要點(diǎn)稀釋待檢樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加最適工作濃度的抗體孵育立即比濁(速率單位RU)繪標(biāo)準(zhǔn)曲線RU抗原濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線沉淀反應(yīng)6全量標(biāo)本量適量標(biāo)本稀釋標(biāo)本ARRAY360:自動(dòng)進(jìn)行1:6、1:36、1:216和1:1296等稀釋度稀釋,也可以根據(jù)需要臨時(shí)設(shè)定稀釋度。
沉淀反應(yīng)63.方法評(píng)價(jià):可自動(dòng)化,快速;(在第一階段檢測(cè)、60s內(nèi)完成測(cè)定)敏感度高,最小檢出量達(dá)μg/L水平;重復(fù)性好(CV<5%);但抗體的質(zhì)量要求高,儀器和試劑較貴。沉淀反應(yīng)6代表性儀器:美國(guó)BECKMAN公司:全自動(dòng)特定蛋白分析系統(tǒng)ARRAY360IMMAGE全自動(dòng)特定蛋白分析儀
沉淀反應(yīng)6IMMAGE全自動(dòng)特定蛋白分析儀沉淀反應(yīng)6
1.抗原抗體比例:抗體過量;抗原過量監(jiān)測(cè)
2.抗體的質(zhì)量:特異性高、親和力好、效價(jià)高
3.增濁劑的使用:(提高反應(yīng)速度)
PEG6000,tween-20
(一)免疫比濁分析的影響因素
四)、免疫比濁分析的影響因素和臨床應(yīng)用沉淀反應(yīng)64.偽濁度:
標(biāo)本(高血脂、反復(fù)凍融)抗體:效價(jià)低、特異性差
PEG濃度過高器材不清潔
5.入射光光源和波長(zhǎng):氦氖光源,633nm6.標(biāo)準(zhǔn)曲線制備與質(zhì)量控制
沉淀反應(yīng)6(二)臨床應(yīng)用免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、κ鏈、λ鏈、免疫球蛋白亞類;補(bǔ)體C3、C4;血漿蛋白:前白蛋白(PAB)、白蛋白(ALB)、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)、β2-微球蛋白(β2-MG)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)、銅藍(lán)蛋白(CER)、結(jié)合珠蛋白(HP)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、載脂蛋白ApoAI、ApoB、脂蛋白(a)、類風(fēng)濕因子(RF)、尿微量蛋白系列和某些治療性藥物濃度等。
沉淀反應(yīng)6原理:將可溶性抗原與相應(yīng)分別放入凝膠(如瓊脂、瓊脂糖等)內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)散,形成濃度梯度,在抗原抗體濃度比例恰當(dāng)?shù)奈恢茫纬扇庋劭梢姷拿庖叱恋砭€、沉淀環(huán)。第二節(jié)凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)分類:①單相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(singlegeldiffusiontest)
②雙相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(doublegeldiffusiontest)③凝膠免疫電泳(gelimmuno-electrophoresis)沉淀反應(yīng)6抗體+瓊脂一、單相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(一)原理Ag沉淀環(huán)的大小與抗原濃度呈正相關(guān)。沉淀反應(yīng)637℃24-48h(二)技術(shù)要點(diǎn)系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)本測(cè)量沉淀環(huán)直徑抗體+1.5%瓊脂56度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線沉淀反應(yīng)6
T1為16~24h;T2為24~48h;T3為48h以上,可見T3為直線,T1為反拋物線
t1為16~24h;t2為24~48h;t3為48h以上,可見t1為直線,t3為反拋物線Mancini曲線大分子抗原Fahey曲線小分子抗原沉淀反應(yīng)6C(mg/ml)d2(mm)Mancini曲線擴(kuò)散>48h、大分子抗原d
(mm)Fahey曲線擴(kuò)散<24h、小分子抗原logC繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:沉淀反應(yīng)6(三)影響因素1.抗原分子量
分子量大,擴(kuò)散慢,沉淀環(huán)較小;分子量小,擴(kuò)散快,沉淀環(huán)相對(duì)較大。要求待檢血清和抗原標(biāo)準(zhǔn)品在血清學(xué)上具有均一性,否則可能出現(xiàn)結(jié)果偏高或偏低。
2.抗體種類
實(shí)驗(yàn)證明馬抗血清為1-10IU/ml,羊?yàn)?.4-4IU/ml,兔抗血清可測(cè)抗原0.1-1IU/ml,為提高實(shí)驗(yàn)敏感度,應(yīng)選兔抗血清。沉淀反應(yīng)63.抗體稀釋度
抗體濃度易小,因相應(yīng)沉淀環(huán)增大,不同濃度抗原間的差別較顯著,方法敏感度較高。但沉淀環(huán)過大,常造成邊緣糊不清,致使測(cè)量誤差也增大。因此要求在沉淀環(huán)清晰的基礎(chǔ)上加大稀釋度以提高敏感度。沉淀反應(yīng)64.擴(kuò)散時(shí)間與溫度
擴(kuò)散時(shí)間赿長(zhǎng),擴(kuò)散溫度在4-37℃范圍內(nèi),升高溫度,反應(yīng)時(shí)間縮短。注意擴(kuò)散要達(dá)到終點(diǎn)后,其沉淀環(huán)直徑才與抗原含量呈一定關(guān)系。抗原含量越高,達(dá)到一定關(guān)系所用擴(kuò)散時(shí)間越長(zhǎng)。沉淀反應(yīng)65.每次都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線,并必須加測(cè)質(zhì)控血清;6.雙環(huán)現(xiàn)象(重鏈病);7.單克隆抗體測(cè)正常人多態(tài)性抗原,則抗體相對(duì)過量,結(jié)果降低;8.多克隆抗體測(cè)定單克隆蛋白,則抗原相對(duì)過量,結(jié)果增加。沉淀反應(yīng)6(四)方法評(píng)價(jià)一種簡(jiǎn)便、實(shí)用的定量方法;不需特殊儀器制備;靈敏度稍差為1.25mg/L;耗時(shí)長(zhǎng),影響因素多(操作規(guī)范時(shí),重復(fù)性和線性尚可依賴),目前臨床中少用。
沉淀反應(yīng)6(一)原理:AbAg染色標(biāo)本圖1.抗原抗體雙向自由擴(kuò)散2.24小時(shí)出結(jié)果3.呈現(xiàn)沉淀線或弧
二、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(doublegeldiffusiontest)沉淀反應(yīng)6(二)操作步驟制板1.5%瓊脂、4ml/每片打孔孔徑3mm,孔間距3~5mm加樣孵育37℃、24-48h沉淀反應(yīng)6
應(yīng)用(三)雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的應(yīng)用抗原或抗體的有無及純度;估算抗原及抗體的相對(duì)含量及相對(duì)分子量;分析抗原的性質(zhì);滴定抗體的效價(jià)。沉淀反應(yīng)64.抗原抗體純度鑒定
“1”
為單一抗原抗體系統(tǒng)。
“n”
為多個(gè)抗原抗體系統(tǒng)。*可以用混合抗原鑒定抗體純度。抗原抗體純度鑒定*可以用混合抗體鑒定抗原純度。沉淀反應(yīng)61.檢測(cè)未知抗原或抗體AgAbABCDEF
A:濃度Ag、Ab及擴(kuò)散率近似;B:濃度Ag、Ab近似,擴(kuò)散率Ag>Ab;C:濃度Ag、Ab近似,擴(kuò)散率Ag<Ab;D:濃度Ag>Ab,擴(kuò)散率近似;E:濃度Ag>Ab,擴(kuò)散率Ag>Ab;F:濃度Ag<Ab,擴(kuò)散率Ag<Ab;估計(jì)相對(duì)含量及分子量沉淀反應(yīng)62表示標(biāo)準(zhǔn)Ag1表示待檢Ag待檢Ag與標(biāo)準(zhǔn)抗原完全吻合;待檢Ag中含有與標(biāo)準(zhǔn)Ag相同的Ag;還有另外的Ag與Ab相對(duì)應(yīng);待檢Ag有與Ab相對(duì)應(yīng)的Ag,但與標(biāo)準(zhǔn)Ag不同;待檢Ag與標(biāo)準(zhǔn)Ag性質(zhì)相同;但含量較低;抗原性質(zhì)分析沉淀反應(yīng)61.周圍6個(gè)孔放不同稀釋度的相應(yīng)Ab。2.以出現(xiàn)沉淀線的血清最高稀釋倍數(shù)為該抗體的效價(jià)。3.可進(jìn)行任意稀釋。抗體效價(jià)滴定沉淀反應(yīng)6三、免疫電泳技術(shù)
(immunoelectrophoresistechnique)電泳技術(shù)+免疫擴(kuò)散技術(shù)特點(diǎn):1.高特異性;2.高分辨率、快速、微量。沉淀反應(yīng)6
電泳原理pH8~8.6
緩沖液中陰粒離子多等電點(diǎn)pH3~4分子量較小等電點(diǎn)pH5~6分子量較大陰粒離子少向正極電泳力小向正極電泳力大沉淀反應(yīng)6影響因素1.電場(chǎng)強(qiáng)度:恒定電流2~4mA/cm,恒定電壓2~10V/cm4.電滲作用:在電場(chǎng)中液體相對(duì)于固體的移動(dòng)。2.溶液pH值:緩沖液偏堿性,蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷3.離子強(qiáng)度:高,泳動(dòng)慢;低,泳動(dòng)快,緩沖能力↓0.05mol/L、pH8.6的巴比妥緩沖液沉淀反應(yīng)6
電滲作用帶負(fù)電的瓊脂靜電感應(yīng)-+--------------------++++++++++++++AV0-----------V沉淀反應(yīng)6一)、對(duì)流免疫電泳(counterimmunolelctrophresis,CIEP)(一)原理在pH8.6的瓊脂凝膠中:
抗體球蛋白:帶少量負(fù)電荷且分子較大,因此電泳力<電滲力,泳向負(fù)極,放(+);
抗原蛋白質(zhì):帶較強(qiáng)負(fù)電荷且分子較小,因此電泳力>電滲力,泳向正極,放(-);電泳一定時(shí)間后,二者相向運(yùn)動(dòng),形成肉眼可見的沉淀線。沉淀反應(yīng)6
示意圖I=3~4mA/cm、30min+1:Ag與Ab對(duì)應(yīng);2:Ab>Ag,Ag為弱陽性3:Ag>>>Ab,
Ag強(qiáng)陽性4:Ag>>Ab,Ag含量較高;(二)操作步驟-1.2%巴比妥瓊脂凝膠沉淀反應(yīng)6(三)方法評(píng)價(jià)
簡(jiǎn)便、快速;敏感度較雙相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)高8~10倍,但分辨力較其低;可測(cè)出ug/ml級(jí)的蛋白質(zhì);目前已不推薦使用。沉淀反應(yīng)6三、火箭免疫電泳
(rocketimmunoelectrophoresis,RIE)單向免疫擴(kuò)散+電泳技術(shù)原理+-AbAg峰形高低與抗原量成正比沉淀反應(yīng)61.制板:56度將抗體混于凝膠中2.打孔:3.加樣4.電泳:抗原向正極泳動(dòng)5.觀察沉淀峰6.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線+6~8mm5mm二)操作步驟沉淀反應(yīng)6沉淀峰高抗原濃度1.測(cè)定沉淀峰高度2.在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找相應(yīng)抗原濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線
標(biāo)準(zhǔn)曲線沉淀反應(yīng)6注意事項(xiàng)2.瓊脂應(yīng)為無電滲或電滲很小1.電泳頂部云霧狀或圓形,應(yīng)繼續(xù)電泳3.標(biāo)本多時(shí),應(yīng)將瓊脂板置于電泳槽上,搭橋并開啟電源后加樣,否則形成寬底。4.IgG在pH8.6的緩沖條件下凈電荷為零,因此需經(jīng)甲醛化處理
注意事項(xiàng)沉淀反應(yīng)6(四)方法評(píng)價(jià):
與雙擴(kuò)比較:敏感
較單擴(kuò)散敏感10-16倍(達(dá)ug/ml以上);
快速
僅需1h左右。但敏感度仍不高,方法繁瑣,影響因素較多。用途
適用快速診斷檢測(cè)。如乙型肝炎抗原的快速檢測(cè)。沉淀反應(yīng)6(一)原理觀察沉淀弧根據(jù)沉淀弧的數(shù)量、位置和形態(tài),可分析樣品中所含抗原成分及其性質(zhì)。雙相免疫擴(kuò)散:區(qū)帶電泳:電泳抗原抗體四、免疫電泳
(immunoelectrophoresis,IEP)沉淀反應(yīng)6
(二)操作步驟莊榮輝(1985)博士論文.p.81+
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