一種溫度敏感型肝細胞培養支架材料及其制備方法專利名稱：一種溫度敏感型肝細胞培養支架材料及其制備方法技術領域：本發明涉及一種智能型組織工程支架材料及技術，特別涉及一種溫度敏感型肝細胞培養支架材料以及方法技術。背景技術：我國是肝病的高發區，其中重型肝炎/肝衰竭是病情最重、死亡率最高的肝臟疾病之一。治療重型肝炎/肝衰竭的三種常用方法為內科治療、肝移植和人工代用品治療。由于肝供體的缺乏及手術費用的昂貴，在我國肝移植難以得到普遍應用，而人工代用品由于不能完全替代人體器官的所有功能，不能根據人體自身要求進行相應的自動調節，所以不能治愈疾病，只能暫時緩解癥狀或者短期延續病人的生命。組織工程概念的提出，為解決這一難題提供了寶貴的理論依據。組織工程學的方法是將特定的組織細胞“種植”于一種生物相容性良好、可被人體逐步降解吸收的生物材料(組織工程材料)上，形成細胞-生物材料復合物；生物材料為細胞的增長繁殖提供三維空間和營養代謝環境；隨著材料的降解和細胞的繁殖，形成新的具有與自身功能和形態相應的組織或器官；這種具有生命力的活體組織或器官能對病損組織或器官進行結構、形態和功能的重建，并達到永久替代。其中生物材料在組織工程中占據非常重要的地位，它不僅影響細胞的生物學行為和培養效率，而且還決定著移植后能否與機體很好的適應、結合和修復，是限制組織工程能否真正應用于臨床的一個關鍵因素。目前組織工程支架材料有兩類一類是天然基質材料，如膠原、纖維連接蛋白、層連蛋白、透明質酸、海藻酸鹽、殼聚糖等，它們均具有較好的生物相容性，但所形成的支架材料穩定性和機械性能較差；一類是合成高分子聚合物，如聚ε"己內酯乙烷基乙烯基磷酸鹽共聚物(PCLEEP)、聚乙酰內酯(PVLA)、聚乳酸一羥基乙酸共聚物(PLGA)等，它們具有良好的力學性能和生物降解性能，但在生物相容性方面仍有一定的缺陷。為了解決以上材料問題，當前的研究多采用復合修飾和改性的方法，用于揚長避短，以獲得一種良好的生物材料。如馬祖偉，高長友等發表的文章1型膠原在聚-L-乳酸(PLLA)表面的化學接枝和涂層及其對軟骨細胞生長的促進作用；雜志為.高等學校化學學報(2004，25(4):749-752)。采用接枝一涂層技術，在聚-L-乳酸(PLLA)膜表面接枝聚甲基丙烯酸(PMAA)，利用水溶性碳化二亞胺作為縮合劑，使表面的羧基和膠原分子中的氨基發生縮合反應，從而將I型膠原接枝在PLLA表面，并對軟骨細胞在其表面的生長行為進行了研究，結果表明，改性表面有效地提高了細胞在材料表面的粘附、增殖和鋪展。浦鳴，計劍等發表的文章反應性梳狀聚乙二醇改性聚酯薄膜表面及其內皮細胞相容性的研究。雜志為高等學校化學學報(2006，27(5):951-955)。將高密度梳狀PEG(CPEG)端羥基轉化為反應活性較高的醛基，通過表面接枝方法對氨基化的聚酯膜進行表面改性，用整合素配體多肽片段(RGD)和氨基酸修飾CPEG，獲得了細胞相容性優良的功能化仿生表面。半乳糖由于具有與肝細胞表面去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)進行特異性結合的功能，多被引入材料以增加肝細胞的粘附率。Inn-kyuKang等發表的文章Graftingoflactose-carringstyreneontopolystyrenedishesusingplasmaglowdischargeandtheirinteractionwithhepatocytes.雜志為J.Mater.Sci.:Mater.M(2003,14:611-616)通過輝光放電等離子體方法將半乳糖基苯乙烯類化合物(VLA)接枝到聚苯乙烯板表面，并對肝細胞在此載體表面的培養情況作了研究。Yoon等發表的文章Surfaceimmobilizationofgalactoseontoaliphaticbiodegradablepolymersforhepatocyteculture.雜志為BiotechnolBioeng(2002，78:1_10)將半乳糖引入聚乳酸乙醇酸(PLGA)膜，將之用于肝細胞培養研究，結果表明，隨膜表面半乳糖濃度的增加，肝細胞的吸附能力和活性增強οHigashiyama等發表的文章:Mixed-ligandmodificationofpolyamidoaminedendrimerstodevelopaneffectivescaffoldformaintenanceofhepatocytespheroids.雜志為J.Biomed.Mater.Res(2003,64A475-82)將果糖和半乳糖的復合配體修飾到聚苯乙烯表面，制備了能保持肝細胞球形結構的改性表面°卓仁禱等發表了文章Immobilizationofgalactoseligandsonacrylicacidgraft-copolymerizedpoly(ethyleneterephthalate)filmanditsapplicationtohepatocyteculture.雜志為Biomacromolecules(2003，4:157-165)將半乳糖修飾到PET表面，研究了肝細胞在此改性表面的吸附能力和細胞功能等。關于肝組織工程支架材料方面雖然取得很多有意義的研究成果，但按照傳統的組織工程方法，當細胞在體外培養擴增后形成細胞片層或組織，要連同支架材料一起移植入主體，這樣會引起很多復雜的問題(1)支架材料在體內降解后，其先前所占據的空間會被細胞外基質充滿，從而使細胞不能緊密聚集，肝臟是一種細胞緊密聚集的器官，這樣就使移植入主體的細胞在體內的生長不能很好的模擬本體組織；(2)對于較大的結構，在支架材料周圍，移植細胞會健康成長且與本體組織很相似，但由于是被動傳輸，營養物質的輸送和代謝廢物的排出較慢，導致結構中心部位的細胞活性喪失，從而形成一個壞死的中心；(3)一些支架材料，如聚乳酸(PLA)、甲殼素等的降解產物的酸堿會對細胞產生一定的毒性；(4)一些支架材料，如聚乳酸(PLA)、聚乙酸醇(PGA)等，降解成小分子碎片，會引起主體內巨噬細胞、嗜中性粒細胞的聚集，這些免疫細胞也會吞噬植入細胞。OkanoΤ.,etal..Biomaterials,2005,26=415-6422.這些問題的存在，大大限制了組織工程的發展。高分子材料表面改性方法包括化學法、輻射接枝法、等離子體方法、紫外光固定法，其中化學法接枝工藝復雜，試劑浪費大，有的試劑還有毒，而且反應時間長；輻射接枝法會將放射性引入反應體系；等離子體方法需要真空、高溫條件，需要設備復雜，投資成本高。采用紫外光固定法對高聚物表面接枝改性的研究很多，但大多為對聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、滌綸(PET)等的改性，如李斌，周曉工等的文章聚丙烯表面接枝PNIPAAm膜I.光接枝反應和表面形態結構研究，雜志為高分子學報(2002,6:780-785)。通過紫外光照射法在聚丙烯薄膜上接枝PNIPAAm，研究了不同反應條件對接枝反應的影響。金朝鋒申屠寶卿等的文章高密度聚乙烯表面光接枝丙烯酸行為研究，雜志為化學反應工程與工藝(2004，20(2)146-150)，通過紫外光照，在高密度聚乙烯表面接枝丙烯酸，研究了光照時間、單體濃度、光敏劑濃度等因素對其接枝率和接枝效率的影響。而以紫外光固定法將異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)接枝到聚苯乙烯表面，且用于組織工程，幾乎未見報道。發明內容針對現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種溫敏型肝細胞培養支架材料及其制備方法。本發明的溫敏型肝細胞培養支架材料，含有N-異丙基丙烯酰胺，在聚苯乙烯細胞培養板上接枝N-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和丙烯酸(AAc)，丙烯酸的羧基通過縮合連接胺基乳糖酸(L-NH2)的胺基。本發明溫敏型肝細胞培養支架材料具有如下特性37°C時表面相對疏水，適于細胞黏附/鋪展和增殖，但在32°C下呈現親水性，細胞自動從表面脫附。本發明的溫敏型肝細胞培養支架材料，以紫外光固定化法在聚苯乙烯細胞培養板上接枝N-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和丙烯酸(AAc)，然后以Sulf0-NHS(N-羥基硫代琥珀酰亞胺)和EDOHCL(l-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽)為活化劑和羧合劑，使胺基乳糖酸(L-NH2)的胺基與丙烯酸的羧基發生縮合作用，將具有肝細胞特異結合作用的L-NH2鍵合到聚苯乙烯細胞培養板表面。本發明溫敏型肝細胞培養支架材料制備方法包括以下步驟(1)表面清洗將聚苯乙烯細胞培養板(TCPS)用無水乙醇沖洗，蒸餾水沖洗數遍，55-65°C真空干燥備用。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將N-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和丙烯酸(AAc)溶于二甲基亞砜(DMSO)，再加入蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入上述反應液中，通N215分鐘密封，高壓汞燈處理，然后依次以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將乳糖酸(LA)和乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于二甲基亞砜(DMSO)中，溫度為7080°C反應24h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物胺基乳糖酸真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將胺基乳糖酸(L-NH2)和N-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=6.09.4的磷酸鹽緩沖溶液；將TCPS-NIPA-AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩13d，每天向反應體系加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDOHCL)；以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。所述步驟(1)中聚苯乙烯細胞培養板(TCPS)為IcmXIcm或其他規格的表面積；所述步驟(2)中N-異丙基丙烯酰胺與丙烯酸摩爾比為10.1l，NIPAAm和丙烯酸在DMSO中的混合濃度為1020wt%；所述步驟(2)中蒽醌-2-磺酸鈉與N-異丙基丙烯酰胺的摩爾比為0.11；所述步驟(2)中高壓汞燈處理條件為所述高壓汞燈λ=360nm，功率為200W1000W,照射0.5h4.5h，高壓汞燈距離樣品3040cm，反應液深度為12cm；所述步驟(2)中無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，用以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物；所述步驟(3)中乳糖酸和乙二胺質量比為146，乳糖酸和乙二胺在DMSO中混合濃度為0.5lg/ml；所述步驟(4)中將胺基乳糖酸與N-羥基硫代琥珀酰亞胺質量比為11，胺基乳糖酸與N-羥基硫代琥珀酰亞胺混合溶液濃度為0.5mg/ml2mg/ml。5所述步驟(4)中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC-HCL)每天添加濃度為1030mg/ml。有益效果本發明利用溫度敏感性材料N-異丙基丙烯酰胺(OTPAAm)的溫度響應性，得到完整的細胞片層或組織，將細胞片層或組織植入體內，不必將支架材料一同植入體內，這樣就可以避免主體對支架材料性能的限制。OTPAAm的化學結構中具有親水基團和疏水基團，其水溶液的最低臨界溫度(Lowercriticalsolutiontemperature，LCST)為32°C。當溫度低于32°C時，PNIPAAm高分子鏈伸展，親水基團暴露，表現親水性；當溫度高于32°C時，PNIPAAm高分子鏈收縮，疏水基團暴露，表現疏水性。將POTPAAm修飾到聚苯乙烯細胞培養板(TCPS)表面，37°C時表面相對疏水，適于細胞黏附/鋪展和增殖，但在32°C下呈現親水性，細胞自動從表面脫附，用此溫度響應細胞培養板可回收溶合細胞片層，不影響細胞與細胞間的連接和沉積，避免了傳統酶解法對細胞功能造成的損傷，得到了完整的細胞片層，此二維細胞片層可直接轉移至受損部位，無需將材料植入主體，這樣就避免了對支架材料免疫學等方面的要求。本發明所設計的溫敏型肝細胞培養支架材料具有良好的綜合性能，一方面由于L-NH2中存在半乳糖基，半乳糖具有與肝細胞表面去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)進行特異性結合的功能，它的引入增強了肝細胞在材料表面的吸附力，從而促進肝細胞在材料表面的增殖分化；另一方面，溫敏性材料NIPAAm的引入，實現了細胞脫附智能化，通過控制環境溫度，達到了細胞的自然脫附，可以得到完整的細胞片層，避免了傳統酶解法對細胞功能造成的損傷，同時由于可將得到的細胞片層直接植入主體，不必連同支架材料植入主體，從而避免了支架材料必須可生物降解以及主體對材料的免疫學等方面的限制。由于所述的良好綜合特性，本發明溫敏型肝細胞培養支架材料在組織工程支架材料、細胞培養基質材料等方面可以得到廣泛應用。本發明通過紫外光照射方法對TCPS進行溫敏改性，以蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)作光敏劑，AQS吸收光能后，成為激發態分子，它可以奪取TCPS大分子鏈上的氫，產生大分子自由基，大分子自由基攻擊不飽和單體NIPAAm(N-異丙基丙烯酰胺)和AAc，引發接枝聚合.AAc通過紫外光照接枝到TCPS表面，使其表面產生羧基，然后以Sulfo-NHS(N-羥基硫代琥珀酰亞胺)和EDC·Ηα(1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽)作活化劑和羧合劑，與L-NH2的胺基反應，得糖化溫敏改性表面。選擇乳糖酸作為引入半乳糖基配體是因為乳糖酸成本合理，毒性低，生物相容性良好；將丙烯酸作為含羧基成分引入，以便完成表面的糖化改性，是因為丙烯酸在光引發條件下容易形成自由基，可促進光化反應的進行，且成本低廉，屬于常規藥品，反應殘余物容易去除。本發明將與肝細胞具有特異結合性的半乳糖與OTPAAm共同修飾到TCPS表面，增強支架材料的生物相容性和細胞結合位點，增加細胞在材料表面的吸附率，得到一種新型適用于肝組織工程的智能型支架材料。紫外光接枝方法采用高壓汞燈或石英汞燈作為引發源，不需要特殊設備，投資成本低，工藝方法簡單，技術要求不太苛刻，反應易于控制，可操作性強，適用范圍廣、安全，易在工業生產中普及應用。具體實施例方式以下給出本發明的具體實施例，但本發明不受實施例的限制.實施例1(1)表面清洗將切割成IcmXIcm的聚苯乙烯細胞培養板(TCPS)樣品，用無水乙醇沖洗，除去表面的雜質，再用蒸餾水沖洗數遍，60°C真空干燥備用。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.OlmolN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.Olmol丙烯酸(AAc)溶于6.8mL二甲基亞砜(DMSO)，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,IOOOW)照射0.5h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將2g乳糖酸(LA)和IOg乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于20ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為70°C時反應2h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將3mgL-NHdP3mgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulf0-NHS)溶于pH=8.0的3mL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS-NIPA-Mc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩3d，每天向反應體系加入30mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC-HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。實施例2(1)表面清洗同實例1(1)。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.OlmolN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.OOlmol丙烯酸(AAc)溶于6.8mL二甲基亞砜(DMSO)，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,IOOOW)照射3h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將3g乳糖酸(LA)和18g乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于30ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為80°C時反應4h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將3mgL-NH2和3mgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=9.4的3mL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS-NIPA-AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩3d，每天向反應體系加入60mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。實施例3(1)表面清洗同實例1(1)。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.OlmolN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.005mol丙烯酸(AAc)溶于6.8mL二甲基亞砜(DMSO)，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,1000W)照射0.5h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將2g乳糖酸(LA)和8g乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于20ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為70°C時反應4h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將ImgL-NH2和ImgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=6.O的2mL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS-NIPA-AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩3d，每天向反應體系加入20mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。實施例4(1)表面清洗同實例1(1)。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.0ImoIN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.Olmol丙烯酸(AAc)溶于13.6mL二甲基亞砜(DMSO)，，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,IOOOW)照射3h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將2g乳糖酸(LA)和8g乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于20ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為80°C時反應2h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將ImgL-NH2和ImgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=8.O的2mL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS-NIPA-AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩3d，每天向反應體系加入30mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。實施例5(1)表面清洗同實例1(1)。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.OlmolN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.OOlmol丙烯酸(AAc)溶于13.6mL二甲基亞砜(DMSO)，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,200W)照射4.5h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將3g乳糖酸(LA)和15g乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于30ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為80°C時反應2h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將2mgL-NH2和2mgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=7.4的ImL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS-NIPA-AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩3d，每天向反應體系加入30mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。實施例6(1)表面清洗同實例1(1)。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.OlmolN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.005mol丙烯酸(AAc)溶于13.6mL二甲基亞砜(DMSO)，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,200W)照射4.5h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將3g乳糖酸(LA)和12g乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于30ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為70°C時反應4h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將2mgL-NH2和2mgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=9.4的ImL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS-NIPA-AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩3d，每天向反應體系加入20mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。實施例7(1)表面清洗同實例1(1)。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.OlmolN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.Olmol丙烯酸(AAc)溶于6.8mL二甲基亞砜(DMSO)，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,IOOOW)照射4.5h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將2g乳糖酸(LA)和12g乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于20ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為70°C時反應2h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將3mgL-NH2和3mgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=7.4的3mL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS-NIPA-AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩ld，每天向反應體系加入30mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。實施例8(1)表面清洗同實例1(1)。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.OlmolN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.OOlmol丙烯酸(AAc)溶于13.6mL二甲基亞砜(DMSO)，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,IOOOW)照射0.5h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將3g乳糖酸(LA)和18g乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于30ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為70°C時反應2h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將ImgL-NH2和ImgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=8.0的2mL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS-NIPA-AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩ld，每天向反應體系加入30mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。實施例9(1)表面清洗同實例1(1)。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.OlmolN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.Olmol丙烯酸(AAc)溶于13.6mL二甲基亞砜(DMSO)，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,200W)照射0.5h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將2g乳糖酸(LA)和IOg乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于20ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為80°C時反應4h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將2mgL-NH2和2mgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=9.4的ImL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS-NIPA-AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩ld，每天向反應體系加入30mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。實施例10(1)表面清洗同實例1(1)。(2)TCPS表面的溫敏羧基化修飾將0.OlmolN-異丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和0.OOlmol丙烯酸(AAc)溶于6.8mL二甲基亞砜(DMSO)，再加入0.OOlmol蒽醌-2-磺酸鈉(AQS)做光敏劑，滴入幾滴異丙醇。將處理好的TCPS樣品放入所述反應液中，通N215min密封，以高壓汞燈(λ=360nm,200W)照射4.5h，高壓汞燈距離樣品40cm，反應液深度為Icm.光照接枝完畢后，以無水乙醇、蒸餾水沖洗接枝樣品，以除去未反應的小分子和沒有修飾上的聚合物，然后真空干燥ld，得TCPS溫敏羧基化表面TCPS-NIPA-AAc。(3)制備胺基乳糖酸(L-NH2)將3g乳糖酸(LA)和12g乙二胺(NH2CH2CH2NH2)分別溶于30ml二甲基亞砜(DMSO)中，在溫度為80°C時反應4h，將混合物溶液傾入氯仿中沉析，然后將產物L-NH2真空干燥。(4)TCPS表面的糖化修飾將ImgL-NH2和ImgN-羥基硫代琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)溶于pH=6.O的ImL磷酸鹽緩沖溶液，將TCPS_NIPA_AAc樣品放入其中，置于搖床上室溫下震蕩ld，每天向反應體系加入30mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCL)。反應完畢，以大量蒸餾水浸泡洗滌，真空干燥，得目標肝細胞培養支架材料。權利要求一種溫度敏感型肝細胞培養支架材料，含有N異丙基丙烯酰胺，其特征在于聚苯乙烯細胞培養板上接枝N異丙基丙烯酰胺和丙烯酸，丙烯酸的羧基通過縮合連接胺基乳糖酸的胺基；所述肝細胞培養支架材料具有如下特性37℃時表面相對疏水，適于細胞