1.2微生物的培養技術及應用（第2課時）教學目標1.概述培養基的營養構成和種類2.概述無菌技術的原理和方法，掌握無菌操作3.通過配制培養酵母菌的馬鈴薯蔗糖培養基，初步掌握配制培養基的基本技能4.概述分離和純化微生物的平板劃線法和稀釋涂布平板法5.概述測定微生物數量的稀釋涂布平板法和顯微鏡計數法(1)概念：由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養物，獲得純培養物的過程就是純培養。(2)方法步驟配制培養基滅菌倒平板接種和分離培養微生物群分散或稀釋單個細胞單個菌落繁殖3.微生物的純培養一

微生物的基本培育技術不同菌落的形狀、大小、顏色等不同。菌落是鑒定菌種的重要依據。（1）配制培養基配制培養基：稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml。表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培養基的營養組成組分含量提供的主要營養牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機鹽H2O定容至1000ml水4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術稱取去皮的馬鈴薯200g切成小塊加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛用紗布過濾濾液中加入20g葡萄糖，15~20g瓊脂用蒸餾水定容至1000mL得到濾液（1）配制培養基4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術（2）滅菌將配制好的培養基轉移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內，在160-170℃滅菌2h。4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術將配制好的培養基轉移到錐形瓶中，加棉塞包上牛皮紙，并用皮筋勒緊壓力100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15~30min取5~8套培養皿培養皿疊成一束用幾層牛皮紙包緊放入干熱滅菌箱內，160~170℃滅菌2h（1）配制培養基4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術倒平板：待培養基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。倒平板的具體操作步驟如下：①拔出錐形瓶的棉塞。②將瓶口迅速通過火焰。③用拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養基（10～20mL）倒入培養皿，立即蓋上皿蓋。④等待培養基冷卻凝固后，將培養皿倒過來放置。仔細看圖：在倒平板的過程中，為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。（3）倒平板4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術待培養基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰旁附近倒平板。倒平板的具體操作步驟如下。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。不要完全打開，以免雜菌污染培養基既可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染，又可以使培養基中的水分較快地蒸發。瓊脂是一種多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板時高于50℃會燙手，低于50℃時，若不及時操作，瓊脂會凝固。4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術（3）倒平板接種：指在無菌條件下將微生物或含菌材料轉移到合適其生長繁殖的培養基中的過程。接種工具：接種針——用于穿刺接種；接種環——用于斜面接種或平板劃線接種；玻璃涂布器——用于涂布平板接種；（4）接種和分離4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術接種的方法：涂布平板法、穿刺接種法、斜面接種法、平板劃線法（4）接種和分離4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術平板劃線法：通過接種環在固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基表面。經過數次劃線后培養，可以分離得到單菌落。單個細胞微生物群單個菌落連續劃線稀釋分散生長繁殖（4）接種和分離4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術連續劃線法分區劃線法①將接種環放在火焰上灼燒，直到接種環的金屬絲燒紅。②在火焰旁冷卻接種環，并拔出裝有酵母菌培養液的試管的棉塞③將試管口通過火焰④將已冷卻的接種環伸入菌液中，蘸取一環菌液⑤將試管口通過火焰，并塞上棉塞⑥在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環在培養基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養基⑦灼燒接種環，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次劃線相連。平板劃線法的操作步驟：一

微生物的基本培育技術第1次劃線灼燒接種環滅菌第2次劃線灼燒接種環滅菌第3次劃線灼燒接種環滅菌灼燒接種環滅菌12345【平板劃線法注意事項】①接種環只蘸一次菌液，但要在培養基不同位置連續劃線多次；②劃線首尾不能相接；③每次劃線前灼燒接種環進行滅菌；④劃線操作結束后，仍需灼燒接種環，培養皿倒置培養。分區劃線法（4）接種和分離4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術培養：完成平板劃線后，待菌液被培養基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養箱中培養24~48h。（4）培養4.酵母菌的純培養一

微生物的基本培育技術1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結束后殺死接種環上原有微生物。殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。2.在灼燒接種環之后，要等其冷卻后再進行劃線的原因？以免接種環溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線的原因？

使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，以便獲得單個菌落。一

微生物的基本培育技術分析評價：1.在未接種的培養基表面是否有菌落生長？如果有，說明了什么？2.在接種酵母菌的培養基上，你是否觀察到了單菌落？這些菌落的顏色、大小是否一致？如果你觀察到了不同形態的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？1.在未接種的培養基表面應該沒有菌落生長，如果有，說明培養基被雜菌污染。2.提示如果觀察到了不同形態的菌落，可能是接種的菌種不純或者無菌操作不規范等原因引起的。3.是否進行了及時細致的觀察與記錄？培養12h與24h后的酵母菌菌落的大小會有明顯不同。（培養時間越長，菌落越大、顏色越深）一

微生物的基本培育技術酵母菌的純培養2.接種和分離酵母菌1.制備培養基3.培養酵母菌①配制培養基（馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、水）②滅菌③倒平板（在酒精燈火焰附近操作）培養基：濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌鍋）培養皿：干熱滅菌（干熱滅菌鍋）用接種環在固體培養基上用平板劃線法接種平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養箱培養小結小結即時練習一、概念檢測1.微生物的純培養既需要適宜的培養基，又要防止雜菌污染。判斷下列相關表述是否正確。(1)培養基中的營養物質濃度越高，對微生物的生長越有利。()(2)消毒和滅菌的殺菌程度存在差異。()(3)微生物的純培養物就是不含有代謝廢物的微生物培養物。()××√即時練習2.日常生活中保存食品的方法有哪些？這些方法是如何阻止或抑制微生物生長的？日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低溫儲存等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通過食鹽、糖等制造高滲環境，從而抑制微生物的生長和繁殖；低溫則是通過降低微生物的代謝速率來抑制微生物的生長和繁殖。即時練習二、拓展應用1.某同學將5個手指尖在貼有“洗手前”標簽的培養基上輕輕按一下。然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個指尖在貼有“洗手后”標簽的同種培養基上輕輕按一下。將這兩個培養皿放入37℃恒溫培養箱中培養24h后，發現貼有“洗手后”標簽的培養皿中菌落較少。請分析冋答下列問題。(1)這個實驗中需要進行滅菌處理的材料用具有______________。培養皿和培養基。(2)“將指尖在培養基上輕輕按一下”相當于微生物培養中的哪一步操作？接種。即時練習二、拓展應用1.某同學將5個手指尖在貼有“洗手前”標簽的培養基上輕輕按一下。然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個指尖在貼有“洗手后”標簽的同種培養基上輕輕按一下。將這兩個培養皿放入37℃恒溫培養箱中培養24h后，發現貼有“洗手后”標簽的培養皿中菌落較少。請分析冋答下列問題。(3)從實驗結果來看，洗手后我們就能進行無菌操作了嗎？操作時，我們可以采用什么方法來避免手上微生物的污染？通過實驗結果可以看到，洗手后手上還有一些微生物，不能直接進行無菌操作。可以通過用酒精棉球擦拭雙手，或戴消過毒的手套等方法來避免手上微生物的污染。即時練習二、拓展應用2.某生物興趣小組將從葡萄皮上成功分離來的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養，搖床轉速分別為210r/min、230r/min和250r/min，培養時間與酵母菌種群密度的關系如下圖所示。請分析回答下列問題。(1)搖床轉速不同，意味著培養條件有什么不同？意味著培養液中O2含量不同。(2)從圖中數據你可以得出什么結論？其原因是什么？培養液中O2含量越高,酵母菌種群密度越大。即時練習二、拓展應用2.某生物興趣小組將從葡萄皮上成功分離來的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養，搖床轉速分別為210r/min、230r/min和250r/min，培養時間與酵母菌種群密度的關系如下圖所示。請分析回答下列問題。(3)為什么培養8h后，其中2個錐形瓶中酵母菌的種群密度基本達到穩定？這時候已經達到了環境容納量。（1）倒平板后，待平板冷凝之后需將其倒置