食品安全快速檢測原理和技術

第一章概述

第二節(jié)生物與實驗室安全等級

和生物安全柜

趙廣英學時數(shù)：2節(jié)0.5學時＋3節(jié)0.5學時第二節(jié)0.5學時教學目的：了解和掌握生物危害等級，大多數(shù)食品主要有害微生物所屬的生物危害等級級別；實驗室的安全等級，食品安全快速檢測需要哪個安全等級級別的實驗室；生物安全柜及其級別，超凈工作臺。重點：大多數(shù)食品主要有害微生物所屬的生物危害等級級別；食品安全快速檢測常需要哪個安全等級級別的實驗室；和生物安全柜？難點：真正系統(tǒng)掌握并學會應用上述知識。目錄一.生物危害等級二.實驗室的安全等級三.生物安全柜及其級別四.超凈工作臺

一.生物危害等級生物危害等級分級依據(jù)GB19489－2008《實驗室生物安全通用要求》和世界衛(wèi)生組織（WHO）《實驗室生物安全手冊》（第3版）根據(jù)生物因子對個體和群體的危害程度將其危害等級分為4級，其劃分僅僅適用于食源性病原微生物實驗室工作。并對各個等級明確了相應的定義和所屬的微生物種類。生物危險標志生物危害等級定義包含微生物種類危害等級Ⅰ（低個體危害，低群體危害）不會導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子細菌、大腸菌群和糞大腸菌群危害等級Ⅱ（中個體危害，低群體危害）能引起人或動物發(fā)病但一般情況下對健康工作者、群體、家畜和環(huán)境不會引起嚴重危害的病原體，實驗室感染不會導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。沙門氏菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、單核細胞增生李斯特菌、假單胞菌、大腸桿菌O157H7、空腸彎曲菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌、創(chuàng)傷弧菌、溶藻弧菌、氣單胞菌、多種致病真菌、病毒如輪狀病毒、杯狀病毒和腸道腺病毒等危害等級Ⅲ（高個體危害，低群體危害）能引起人或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能用抗生素抗寄生蟲藥治療的病原體。肉毒梭菌、炭疽桿菌、肝炎病毒等危害等級Ⅳ（高個體危害，高群體危害）鼠疫耶爾森氏菌、埃爾托生物性霍亂弧菌等食源性病原微生物生物危害程度分級定義種類二、實驗室生物安全級別根據(jù)實驗室處理的食源性病原微生物危害級別，可將實驗室分為：基礎實驗室-一級生物安全水平BSL-1基礎實驗室-二級生物安全水平BSL-2防護實驗室-三級生物安全水平BSL-3最高防護實驗室-四級生物安全水平BSL-4根據(jù)操作不同危險度等級微生物所需的實驗室設計特點、建筑構造、防護設施、儀器、操作以及操作程序來決定實驗室的生物安全水平。食品致病菌大都為生物安全一、二級，只有少數(shù)為三、四級，如霍亂弧菌、鼠疫耶爾森氏菌等。三.生物安全柜及其級別生物安全柜是為操作原代培養(yǎng)物、菌毒株以及診斷性標本等具有感染性的實驗材料時，用來保護操作者本人、實驗室環(huán)境以及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設計的柜式裝置。三.生物安全柜及其級別主要幾級生物安全柜：國際標準的規(guī)定，安全柜可分為一級、二級和三級三大類以滿足不同的生物研究和防疫要求。安全柜的分類級別與生物安全等級無關。

生物安全柜可保護工作人員和環(huán)境而保護樣品不定。氣流原理和實驗室通風櫥一樣，不同之處在于排氣口安裝有HEPA過濾器。所有類型的生物安全柜都在排氣和進氣口使用HEPA過濾器。生物安全柜一級生物安全柜本身無風機，依賴外接通風管中的風機帶動氣流，由于不能保護柜內產(chǎn)品，目前已較少使用。二級生物安全柜是目前應用最為廣泛的柜型。按照NSF49的中的規(guī)定，二級生物安全柜依照入口氣流風速、排氣方式和循環(huán)方式可分為4個級別：A1型，A2型(原B3型),B1型和B2型。所有的二級生物安全柜都可提供工作人員、環(huán)境和產(chǎn)品的保護。美國國家科學基金會（NationalScienceFoundation，NSF）。二級生物安全柜

三級生物安全柜是為3-4級實驗室生物安全等級而設計的，柜體完全氣密，工作人員通過連接在柜體的手套進行操作，俗稱手套箱(Glovebox)，試驗品通過雙門的傳遞箱進出安全柜以確保不受污染，適用于高風險的生物試驗三級生物安全柜四.超凈工作臺超凈工作臺(cleanbench)是為了適應現(xiàn)代化工業(yè)、光電產(chǎn)業(yè)、生物制藥以及科研試驗等領域對局部工作區(qū)域潔凈度的需求而設計的。工作原理：通過風機將空氣吸入，經(jīng)由靜壓箱通過高效過濾器過濾，將過濾后的潔凈空氣以垂直或水平氣流的狀態(tài)送出，使操作區(qū)域持續(xù)在潔凈空氣的控制下達到百級潔凈度，保證生產(chǎn)對環(huán)境潔凈度的要求超凈臺中的無菌室應定期用70%酒精或0.5%苯酚噴霧降塵和消毒，用2%新潔爾滅抹拭臺面和用具（70%酒精也可），用福爾馬林（40%甲醛）加少量高錳酸鉀定期密閉熏蒸，配合紫外線滅菌燈（每次開啟15分鐘以上）等等消毒滅菌手段，以使無菌室經(jīng)常保持無菌狀。接種箱內部也應裝有紫外線燈，使用前開燈15分鐘以上照射滅菌，但凡是照射不到之處仍是有菌的。在紫外線燈開啟時間較長時，可激發(fā)空氣中的氧分子締合臭氧分子，這種氣分有很強的殺菌作用，可以對紫外線沒有直接照到的角落產(chǎn)生滅菌效果。由臭氧有礙健康，在進入操作之前應先關掉紫外線燈，之后十多分鐘即可入內。超凈工作臺

復習思考題1.僅適用于食品有害微生物而非醫(yī)學的生物危害劃分等級的主要劃分依據(jù)？分為幾級？各個等級的定義？舉例所屬的微生物種類？大多數(shù)食品有害微生物所屬的生物危害等級級別？2.生物實驗室的安全等級？食品安全快速檢測需要哪個安全等級級別的實驗室？3.生物安全柜及其級別，食品安全快速檢測最常用哪個級別的生物安全柜？食品安全快速檢測原理和技術

第一章概述第三節(jié)：檢驗操作基礎知識趙廣英第三節(jié)：檢驗操作基礎知識學時數(shù)：0.5學時教學目的：了解和掌握GLP的內容概要；食品質量安全快速檢測/驗技術的基本原則和要求。重點：快速檢測/驗技術的基本原則和要求。難點：真正理解GLP，系統(tǒng)掌握并學會遵循和應用食品質量安全快速檢測/驗技術的基本原則和要求。目錄一、良好的實驗室操作規(guī)范二、檢驗技術基本原則三、樣本采集與保存四、采樣方法八、樣本前處理五、采樣記錄九、實驗設計六、樣本保存十、數(shù)據(jù)處理七、樣本制備

快速檢驗方法都應該達到符合食品安全快速檢測技術要求的、科學的食品檢測實驗室管理方法，符合或力爭符合GLP的要求。

AfacultyresearchlabinWhitewaterHall一、良好的實驗室操作規(guī)范

(goodlaboratorypractice，GLP)GLP內容概要

GLP廣義是指“非臨床安全性研究管理規(guī)定”的發(fā)展GLP的內容涉及相應實驗室的組織、人員、設施、儀器、設備和實驗材料等各個方面。

實驗設施是基礎人員管理是關鍵標準操作是重點監(jiān)督體制是保障

1、

檢驗技術基本原則質量原則：準確靈敏安全原則快速原則可操作原則經(jīng)濟原則

二、檢驗技術基本原則和要求2、檢驗技術操作的一般要求（8）

1）．名詞及單位制：采用的名詞及單位制按國標。2）．試劑：、優(yōu)級純、分析純、化學純和實驗試劑；

水：蒸餾水或軟化水等等3）．計量器：按國家規(guī)定及規(guī)程計量和校正。

4）．稱量表示：用數(shù)值的有效數(shù)位；用精度為土0.0001g的精密天平稱量液體用移液管、刻度吸量管吸取。

96孔板手動移液一步到位

5）．檢驗有關要求：檢驗時必須做空白、對照和平行試驗。6）．檢驗方法的選擇：可根據(jù)條件選擇方法，只能作為初篩方法必須以國家/國際公認的標準(GB)方法為第一仲裁方法。7）．采樣：

記錄齊全生產(chǎn)日期、批號、代表性和均勻性；采樣量要滿足采樣原則。

8）．保留好樣品：1－3個月（檢驗報告單簽發(fā)日算起），以備需要時復查。

1、基本概念2、采樣基本程序3、采樣原則4、采樣方法5、采樣記錄6、樣本保存三、樣本采集與保存1、基本概念1）采樣(又稱取樣、抽樣)：就是從原料或產(chǎn)品的總體(通常是一批食品)中抽取一部分樣本，通過分析一個或數(shù)個樣本，對整批食品的質量進行估計。2）原始樣本：混合小樣,量大。3）平均樣本：用3cm的平頂錐形四分對角法分出的原始樣本2、采樣基本程序：3、采樣的原則（6項）(補加微生物的采樣原則)

1）代表性原則：

取樣必須考慮各種影響因素，使樣本具代表性，通過監(jiān)測結果能客觀推測食品的質量。

2）典型性原則：

采集能充分說明達到監(jiān)測目的的典型樣本，包括污染或懷疑污染的樣本、中毒或懷疑中毒的食品、摻假或懷疑摻假的食品。

3）適時性原則：

如中毒要盡快趕到現(xiàn)場采樣。4）適量性原則：依檢驗項目和目的而定

①總體：>3倍檢驗需要量,

理化檢驗樣本：固體：>0.5kg/份，液體、半液體：0.5-1L/份，

微生物學檢驗：按GB,一般>250g。

②包裝:<100包按10％抽樣>100包：取12-36包/批號－－>3份，每份是3-4個包裝內采取的樣本混合物。

③特殊需要：按計劃設計取樣量④對被污染食品采樣：先感官分重、中、輕3類污染度各類取1—3份樣本，分別進行檢驗。5）無污染的原則檢測微生物樣本檢測微量有害元素的樣本容器和器具試劑采樣操作過程檢測過程都要無污染

6）程序原則：

采樣

送檢

留樣

出具報告均按規(guī)定的程序進行各階段都要有完整的手續(xù)，責任分明。常規(guī)采樣方法：

散裝食品、大包裝、小包裝、液體、固體等都有相應要求。

微生物檢驗采樣：最主要的是無菌方法，所用的一切物品、用具和過程都要無菌。成份檢測所有接觸的

物品都應無成份污染化學檢驗采樣：避免被待檢成份污染四、采樣方法

1．現(xiàn)場采樣記錄2．樣本簽封和編號3．填寫采樣單

六、樣本保存1．要保持樣本原來的狀態(tài)2．易變質的樣本要冷藏3．特殊樣本要在現(xiàn)場進行處理五、采樣記錄

總的樣本制備方法是：去掉不能吃的部分；固體、液體分開、不同部分分開；弄碎磨細；按四分法縮分。七、樣本制備八、樣本前處理

1、粉碎：用絞肉機、磨粉機、糧谷粉碎機等將塊狀的或顆粒較大的動植物樣本細化的過程，目的是增大樣本表面積，有利于待測組分的提取。

2、提取：有靜置法、勻漿法、振蕩提取法、專用裝置提取法等。

3．凈化：

凈化是將待測組分與雜質分離的過程。該步驟是樣本前處理的技術難點，也是關系到檢測結果的真實性及檢測方法可靠性的重要步驟。化學成分檢測的主要凈化方法

固相萃取法液—液分配法化學處理法低溫冷凍凈化法前置色譜柱凈化法等。細菌檢測樣本凈化的主要方法預增菌選擇性增菌鑒別分離培養(yǎng)4、濃縮

濃縮是指去除部分或全部溶劑及進行溶劑轉換的過程為濃縮或富集。

主要通過旋轉蒸發(fā)器蒸干或惰性氣體(如氮氣)吹干除去溶劑。

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