植物生理學設計性實驗上課時間：周二第五組乙烯利對油桃生理指標的影響一、實驗目的1、通過本實驗了解乙烯利對果蔬生理指標的影響。2、掌握呼吸強度的測定方法。3、掌握多酚氧化酶的測定方法及分光光度計的使用方法。二實驗原理乙烯利，是一種有機化合物，純品為白色針狀結晶，工業品為淡棕色液體，易溶于水，甲醇、丙酮、乙二醇、丙二醇，微溶于甲苯，不溶于石油醚。用作農用植物生長刺激劑，乙烯利是優質高效植物生長調節劑,一分子乙烯利可以釋放一分子的乙烯，具有促進果實成熟，刺激傷流，調節性別轉化等效應，本實驗主要研究的是乙烯利對果實成熟的影響，通過測定乙烯利處理后的果蔬呼吸強度及多酚氧化酶的活性，了解其對果蔬生理指標的影響。呼吸強度的測定通常是采用定量堿液吸收果蔬在一定時間內呼吸所釋放出來的CO2，再用酸滴定剩余的堿，即可計算出呼吸所釋放出的CO2量，求出其呼吸強度。其單位為每kg每小時釋放出CO2毫克數。反應如下：2NaOH+CO2→Na2CO3+H2ONa2CO3+BaCl2→BaCO3↓+2NaCl2NaOH+H2C2O4→Na2CO4+2H2O測定可分為氣流法和靜置法兩種。氣流法設備較復雜，結果準確。靜置法簡便，但準確性較差。由于實驗條件限制，本實驗采用靜置法

多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化生成醌。多酚氧化酶活性可以用比色法測量產物的形成，常用的底物如兒茶酚（鄰苯二酚）和多巴（3，4-二羥苯丙氨酸）。三、實驗儀器、材料及試劑1、實驗儀器：冰箱1臺、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL各一支）、洗耳球1個、培養皿1個、干燥器1臺、三角瓶2個、刀片、燒杯50mL2個、研缽1套、離心機1臺、離心管2支、恒溫水浴鍋1臺、分光光度計1臺、電子天平1臺、試管2支，酸式滴定管1支。2、材料：油桃【（1）、冷庫貯藏；（2）、室溫貯藏5天（乙烯利0.1%處理3天）】3、試劑：0.1%乙烯利、0.4mol/LNaoH、Bacl2溶液、酚酞試劑、0.1mol/L草酸溶液、0.2mol/L磷酸緩沖溶液、蒸餾水、0.1mol/L鄰苯二酚。四實驗內容1、呼吸強度的測定采用靜止法。吸取0.4mol?L-1的氫氧化鈉溶液25ml于培養皿中，立即放入干燥器中，把已稱重的果實（約1kg）放到干燥器中的隔架上，密封并記時，1h后，吸取10mLNaOH轉移到三角瓶中，再加入1.0ml的Bacl2溶液和兩滴酚酞，用以標定好的0.1mol?L-1的草酸溶液滴定至終點，以不放樣品的空白組為對照，每個樣品重復三組，操作同上。呼吸強度的單位表示為CO2，mg?kg-1?h-1。按下式計算：呼吸強度（CO2，mg?kg-1?h-1）=0.1×（V樣品-V空白）×44×25/（w×1）式中：v樣品為樣品所消耗草酸的體積，單位mLv空白為空白組所消耗草酸的體積，單位mL44為co2的質量分數25為NaoH的體積，單位mLw為樣品鮮重，單位g1為所用時間，1h實驗結果記錄在下表樣品樣品質量v樣品V空白呼吸強度未經乙烯利處理經乙烯利處理2、多酚氧化酶(PPO)活性測定

稱取果肉3.0g加8.0ml預冷的0.2mol?L-1pH=6.2Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液冰浴研磨成勻漿，于4500rpm離心10min，取上清液1.0mL加4.5mL緩沖液和0.5mL0.1mol?L-1鄰苯二酚震蕩搖勻，于37℃水浴恒溫反應15min，取出立即于沸水浴煮沸5min，冷卻后測其525nm吸光度。以煮沸5min的滅活酶液作空白對照。以每分鐘內吸光度變化0.01為1個PPO活力單位（U）。