章序名稱第九章吸光光度法周次第15周至第16周授學時間11月14日至11月28日教學目的要求1.理解朗伯－比爾定律的數(shù)學體現(xiàn)式及意義；2.掌握摩爾吸光系數(shù)的意義和計算；3.理解選擇顯色劑的原理及及影響顯色反映的因素；4.初步掌握分光光度法的基本原理應用；5.掌握光度法的基本原理，理解光度分析條件的控制，分光光度法的應用范疇。教學重點1、辦法特點：光的性質和選擇性的吸取。2、吸光光度法的基本原理：朗伯比爾分離定律；偏離比爾定律的因素。4、分光光度計的構造及應用。5、顯色反映及影響因素。6、光度測量誤差及條件的選擇。7、吸光光度法的應用。教學難點1．吸光光度法的基本原理：朗伯比爾分離定律；偏離比爾定律的因素。2.光度測量誤差及條件的選擇。教學場合環(huán)境教室授課方式課堂講授（√）；實驗（）；實踐（）；雙語（）學時分派8學時教學方法講授、討論教學手段網絡教學（）；多媒體（√）教學用具電子投影儀教學內容提要備注§9-1光的性質和物質對光的吸取光的性質物質對光的吸取§9-2光吸取的基本規(guī)律朗伯-比爾定律偏離朗伯-比爾定律的因素§9-3分光光度計的構造分光光度計的重要部件分光光度計§9-4顯色反映及其影響因素顯色反映和顯色劑影響顯色反映的因素三元配合物顯色體系§9-5廣度測量誤差及其測量條件的選擇儀器測量誤差測量條件的選擇§9-6分光光度法的應用多組分的同時測定差示分光光度計酸和堿離解常數(shù)的測定溶液中配合物構成的測定日程及課時分配節(jié)序內容學時第九章吸光光度分析法8學時第一節(jié)光的性質和物質對光的吸取1第二節(jié)光吸取的基本規(guī)律1第三節(jié)分光光度計的構造1第四節(jié)顯色反映及其影響因素1第五節(jié)廣度測量誤差及其測量條件的選擇2第六節(jié)分光光度法的應用第七節(jié)第節(jié)習題課2第節(jié)第節(jié)第節(jié)第節(jié)第節(jié)復習思考題1．有50.0mL含Cd2+5.0μg的溶液,用10.0mL二苯硫腙-氯仿溶液萃取(萃取率≈100%)后,在波長為518nm處,用1cm比色皿測量得T=44.5%。求吸取系數(shù)a、摩爾吸取系數(shù)κ和桑德爾敏捷度S各為多少?2.鋼樣0.500g溶解后在容量瓶中配成100mL溶液。分取20.00mL該試液于50mL容量瓶中,將其中的Mn2+氧化成MnO4-后,稀釋定容。然后在λ=525nm處,用b=2cm的比色皿測得A=0.60。已κ525=2.3×103L·mol-1·3．某一光度計的讀數(shù)誤差為0.005,當測量的透射比分別為9.5%及90%時,計算濃度測量的相對誤差各為多少?討論練習1．與化學分析法相比,吸光光度法的重要特點是什么?2．簡述朗伯-比爾定律成立的前提條件及物理意義,寫出其數(shù)學體現(xiàn)式。3．吸取光譜曲線和原則曲線的實際意義是什么?如何繪制這兩種曲線?4．為了提高測量成果的精確度,應當從哪些方面選擇或控制光度測量的條件?5．簡述用摩爾比法測定絡合物絡合比的原理。拓展學習吸光光度法的應用中學習絡合物構成和酸堿解離常數(shù)的測定:絡合物構成：摩爾比法、等摩爾持續(xù)變化法。酸堿解離常數(shù)：PKa=PH+lgA-AB-課程作業(yè)P.301，15，17，P.302，18，19，21，24，25P.303，28，29.完畢方式書面版（√）電子版（）提交時間課程結束交必讀書目1.武漢大學化學系編，儀器分析，北京：高等教育出版社，.2.朱明華編，儀器分析，北京：高等教育出版社，1994.學生學習質量監(jiān)控與評價從完畢作業(yè)狀況看，本章內容部分掌握較好，有少數(shù)學生對光度計算掌握的不夠好。教學后記本章內容是儀器分析的基礎，打好基礎很重要，在授課中突出吸光光度法的基本原理，朗伯比爾分離定律的學習；吸光光度條件的選擇，可配合實驗課加深學生的理解和掌握。第九章吸光光度法本章介紹的吸光光度法是一種儀器分析辦法(其中目視比色法不必用儀器)。一種辦法能用來進行物質的定量分析，測量的物理量與被測組分的濃度之間必須存在擬定的定量的關系。這是定量測量辦法的理論基礎。另首先，還需要考慮儀器設備的設計和測試條件的選擇，以確保辦法符合定量基本關系式，并確保有較高的精確度和可操作性。運用光信號測定物質含量的辦法諸多，基于物質對光含有選擇吸取的特性而建立起來的分析辦法，稱為吸光光度法。根據(jù)產生光吸取的質點不同，又可分為分子吸取光譜法和原子吸取光譜法。本章中討論的紫外-可見吸光光度法是分子吸取光譜法的一種。9.1概述9.1.1光是一種電磁波，按照波長(或頻率)排列，可得到電磁波譜圖：光含有波粒二象性，一定波長的光含有一定的能量，波長越長(頻率越低)，光量子的能量越低。含有相似能量(相似波長)的光為單色光，由不同能量(不同波長)的光組合在一起的稱為復合光。若兩種不同顏色的單色光按一定的強度比例混合得到白光，那么就稱這兩種單色光為互補光，這種現(xiàn)象稱為光的互補。白光是復合光，讓一束白光通過分光元件，它將分解成紅、橙、黃、綠、青、藍、紫等多個顏色的光。即可見光譜。9.1.2當光照射到物質上時，會產生反射、散射、吸取或透射現(xiàn)象，若被照射的物質為溶液，光的散射能夠無視。當一束白光照射某一有色溶液時，某些波長的光被溶液吸取，另某些波長的光則透過，溶液的顏色由透射光的波長所決定。吸取光與透射光互為補色光。如硫酸銅溶液吸取白光中的黃色光而呈現(xiàn)藍色；高錳酸鉀溶液吸取黃綠色的光而呈紫紅色。分子、原子和離子，都含有不持續(xù)的量子化能級，在普通狀況下分子處在最低能態(tài)(基態(tài))。當入射光照射物質時，分子會選擇性地吸取了某些波長的光，由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)(較高能級)，其能級差E激發(fā)態(tài)－E基態(tài)與選擇性吸取的光子能量h的關系為： h=E激發(fā)態(tài)－E基態(tài)分子運動涉及分子的轉動、分子的振動和電子的運動。分子轉動、振動能級間隔普通不大于1ev，其光譜處在紅外和遠紅外區(qū)。電子能級間的能量差普通為1～20ev，由電子能級躍遷而產生的吸取光譜位于紫外及可見光區(qū)，其實驗辦法為比色法和可見、紫外吸光光度法。9.1.31.定性分析基礎吸取光譜取決于分子的構造，以及分子軌道上電子的性質，不同的物質含有不同的吸取光譜，因此，吸取光譜可提供定性分析的信息。2.定量分析基礎對同一物質而言，濃度不同，對特定波長光的吸取強度不同，因此，吸取強度可提供定量分析的信息。從不同濃度的高錳酸鉀溶液的吸取光譜圖可知，在波長535nm處的吸光強度與濃度間存在定量的關系，可由此進行定量分析。9.1.4吸取定律1.朗伯—比爾定律一束平行單色光通過任何均勻、非散射的固體、液體或氣體介質時，一部分被吸取，一部分透過介質，一部分被器皿的表面反射。設入射光強度為I0'，吸取光強度為Ia，透過光強度為It，反射光強度為Ir。則在吸光光度法中，普通將試液和空白溶液分別置于同樣材質及同樣厚度的吸取皿中，因此反射光的強度基本相似，其影響能夠互相抵消，故能夠無視反射光的影響，可得到下式：。即光強為I0的入射光通過試液皿后，一部分光被吸取，一部分光被透射。It與I0之比稱為透光率或透光度T，T=It/I0 吸光物質對光的吸取程度，還慣用吸光度A表達： A=-lgT=lg(I0/It) 實驗證明，當一束平行單色光垂直照射某一均勻的非散射吸光物質溶液時，溶液的吸光度A與溶液濃度c和液層厚度b的乘積成正比，此即朗伯—比爾（Lambert—Beer）定律，其數(shù)學體現(xiàn)式為： 2.摩爾吸取系數(shù)和桑德爾敏捷度當溶液濃度以mol/L為單位時，液層厚度以cm為單位時，K慣用替代，稱為摩爾吸取系數(shù)，其單位為L.mol-1.cm-1。此時朗伯-比爾定律可寫為： A=bc 摩爾吸取系數(shù)是吸光物質在給定波長和溶劑下的特性常數(shù)，數(shù)值上等于1mol/L吸光物質溶液和液層厚度為1cm時溶液的吸光度，它表達吸光物質對指定頻率的光子的吸取本領。越大，表達該物質對某波長光的吸取能力越強，該測定辦法的敏捷度也就越高。普通認為，<104，則辦法的敏捷度較低；在104~5104時，辦法的敏捷度為中檔；在5104~105時，敏捷度高；>105，屬超高敏捷度。還可用桑德爾敏捷度（敏捷度指數(shù)）S表達辦法的敏捷度，Sandell對S的定義是：在一定的波長下，測得的吸光度A=0.001時，1cm2截面積內所含的吸光物質的量，其單位為mg/cm2S與e的關系的推導：A＝0.001＝ebc，bc＝0.001/eb為吸取池的厚度，單位為cm，c的單位為mol/L，bc乘以待測物的摩爾質量M(g/mol)，就是單位截面積內待測物的質量，即S=b(cm)′c(mol/dm3)′M(g/mol)′106mg/g＝(mg/cm2例1.某試液用2cm比色皿測量時，T=60%，若改用1cm或3cm比色皿，T及A分別等于多少？解：設某試液用2cm比色皿測量時的吸光度為Ao,用1cm和3cm比色皿測得的吸光度為A1和A2。由于A與T之間的關系是A=-lgT，因此Ao=0.22。根據(jù)朗伯-比爾定律可知：A=εb1c，因此A1=A0b1/bo=0.11,T1==0.78.

A2=A0b2/bo=0.33,T3==0.47.例2.已知含F(xiàn)e2+濃度為500g/L的溶液，用鄰二氮菲比色測定鐵，比色皿厚度為2cm，在波長508nm處測得吸光度A=0.19，計算摩爾吸取系數(shù)。解： 例3.雙硫腙顯色法測定鉛的e＝6.8′104，求桑德爾敏捷度S。解：S＝M/e＝207/6.8′104=0.0030(mg/cm2)9.2目視比色法與分光光度法朗伯—比爾定律是光度法定量分析的基礎。能夠通過儀器測吸光度，然后通過與原則的比較法或原則曲線法得到被測組分的濃度。也可通過肉眼直接觀察顏色的深淺判斷組分含量。9.2.1目視比色法是用眼睛觀察、比較溶液顏色深度以擬定物質含量的辦法。普通采用原則系列法。即在一套等體積的比色管中配備一系列濃度不同的原則溶液，并按同樣的辦法配備待測溶液，待顯色反映達平衡后，從管口垂直向下觀察(對于高含量的試樣，也可從管側面觀察)，比較待測溶液與原則系列中哪一種原則溶液顏色相似，便表明兩者濃度相等。如果待測試液的顏色介于某相鄰兩原則溶液之間，則待測試樣的含量可取兩原則溶液含量的中間值。優(yōu)點是操作簡便，適宜于野外或現(xiàn)場快速測定，可在復合光-白光下進行測定，某些不符合朗伯-比爾定律的顯色反映，仍可用該法進行測定。重要缺點是精確度不高，原則系列不能久存，需要在測定時臨時配制。9.2.21.分光光度計分光光度計按工作波長范疇分類，可分為紫外-可見分光光度計和可見光分光光度計。按照光路的設計方式可分為單光束、雙光束和單波長、雙波長分光光度計等。盡管分光光度計的種類和型號繁多，但它們都是下列基本部件構成的。(1)分光光度計的重要構成部件：光源、單色器、吸取池、檢測器和顯示裝置。光源：(Lightsource)：光源的作用是提供所需波長范疇內的持續(xù)光譜，光源要有足夠的光強度，能量分布均勻，穩(wěn)定。電源電壓的微小波動會引發(fā)燈光強度的很大變化，因此需要用穩(wěn)壓電源。可見分光光度計的光源多屬熱光源，如鎢燈、碘鎢燈等，鎢燈發(fā)射光譜波長范疇為400～1000nm，在可見和近紅外區(qū)。碘鎢燈發(fā)射光譜波長范疇320～2500nm。紫外區(qū)使用氫燈或氘燈(180～375nm)。單色器：(monochromator)：將光源發(fā)出的持續(xù)光譜分解為單色光的裝置。比色計的單色器普通是濾光片，分光光度計的單色器普通由棱鏡或光柵等色散元件及狹縫和透鏡等構成。可見分光光度計慣用玻璃棱鏡，玻璃棱鏡適合的波長為350～3200nm；紫外-可見分光光度計慣用石英棱鏡，這是由于玻璃對紫外光有較強吸取的緣故，石英棱鏡適合的波長為185～4000nm。光柵是運用光的衍射與干涉作用制成的色散元件，它含有合用波長范疇寬、分辨性能好和色散均勻等優(yōu)點。吸取池也稱比色皿(coloritrough)：吸取池用來盛放試液。按制作材料可分為石英和玻璃吸取池，前者用于紫外和可見區(qū)，后者僅用于可見區(qū)。檢測器(detector)：運用光電效應，將光能轉成電流訊號。慣用的有光電池，光電管，光電倍增管、光電二極管、光導攝象管等。顯示裝置：檢流計、微安表、數(shù)字顯示統(tǒng)計儀等。(2)幾個不同類型分光光度計單光束分光光度計(singlebeamspectrophotometer)，如721型分光光度計為可見光單光束分光光度計的類型。儀器光路示意圖以下。雙波長分光光度計(doublewavelengthspectrophotometer)、雙光束分光光度計(doublebeamspectrophotometer)或雙波長—雙光束分光光度計：雙光束分光光度計是將單色光分成兩束，一束通過參比池，另一束通過樣品池，經一次測量，檢測器直接得到的是樣品池與參比池吸光度的差，即。雙波長分光光度計是將同一光源發(fā)出的光分成兩束，以一定的頻率交替照射同一吸取池，經光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，由批示器顯示出兩個波優(yōu)點的吸光度之差，即。運用雙波長光度計可消除干擾組分或混濁試樣背景對測定的影響，往往可提高辦法的敏捷度和選擇性。該類型儀器與單光束儀器的比較以下圖。光學多通道分光光度計(opticalmultichannelspectrophotometer)是20世紀80年代問世的產品，是一種含有全新光路系統(tǒng)的儀器。由鎢燈或氘燈發(fā)射的復合光先通過樣品池后再經全息光柵色散，色散后的單色光由光二極管陣列中的光二極管接受，一種光二極管陣列普通能容納數(shù)百個光二極管，可覆蓋190~900nm波長范疇。全部波長同時被檢測，因此響應非常快。這種類型光度計特別適合進行快速反映動力學研究及多組分混合物的分析在環(huán)境及過程分析中也非常重要，并可用作高效液相色譜儀和毛細管電泳儀的檢測囂。光導纖維探頭式分光光度計(opticalfiberprobe-typespectrophotometer)：探頭是由兩根互相隔離的光導纖維構成，鎢燈發(fā)射的光由其中一根光纖傳導至試樣溶液，再經鍍鋁反射鏡反射后，由另一根光纖傳導，通過干涉濾光片后，由光敏器件接受為電信號。這類儀器不需吸取池，直接將探頭插入試樣溶液中，在原位進行測定。這種類型光度計慣用于環(huán)境和過程監(jiān)測。2.分光光度法根據(jù)朗伯-比耳定律，當吸光物質光程一定時，吸光度與吸光物質的濃度成線性關系，因此能夠根據(jù)直接比較法和原則曲線法測定試樣溶液中待測物質的濃度。原則曲線法是先用純試劑或與被測試樣有相似組分的物質配制不同濃度的原則溶液，以不含試樣的空白溶液作參比，測量原則溶液的吸光度，繪制吸光度—濃度曲線，以下圖所示，此曲線稱原則曲線或工作曲線。然后在同樣條件下測定試樣溶液的吸光度，再由原則曲線上求出被測元素的含量。需要注意的是：在某些狀況下，A～c并不嚴格恪守比爾定律,這種現(xiàn)象稱為偏離朗伯-比耳定律。引發(fā)偏離朗伯-比耳定律的重要因素在背面的章節(jié)中討論。普通說來，朗伯-比耳定律只合用于稀溶液。9.3分光光度法的設計9.3.1理論上講，全部對紫外光、可見光有吸取的有機物、無機物都能夠用紫外－可見分光光度法進行測定。但在實際工作中，普通使弱吸取物質發(fā)生化學反映生成含有強吸取性質的吸光物質，以提高光度測量的精確性和分析辦法的敏捷度。此反映稱為顯色反映，所用的試劑稱為顯色劑。1．顯色反映顯色反映普通應滿足下列規(guī)定：(1)形成的吸光物質的摩爾吸光系數(shù)大，辦法敏捷。(2)選擇性好，干擾少或干擾容易消除；顯色劑在測量波優(yōu)點的無吸取或光吸取小，即測量的吸光物質與顯色劑的顏色差別要大。普通規(guī)定吸光物質與顯色劑的最大吸取波長有關較遠。，式中R為顯色劑，MR為待測物質與顯色劑形成的產物。普通將稱作顯色反映的對比度。

(3)顯色反映產物穩(wěn)定，在測量過程中吸光度基本保持恒定。(4)顯色反映的條件便于控制。2．顯色劑顯色劑的種類諸多，但無機顯色劑在光度分析中應用不多，重要由于敏捷度和選擇性不高。例如鉬酸銨可作為測硅、磷和釩的顯色劑，雙氧水可作為鈦的顯色劑。應用較多的是有機顯色劑。有機顯色劑及其產物的顏色與它們的分子構造有親密關系。有機顯色劑分子中普通都含有生色團(chromophore)和助色團(auxochrome)。分子中能吸取紫外或可見光的基團稱為生色團，生色團中含有不飽和鍵的基團，如偶氮基、對醌基和羰基等。這此基團中的電子被激發(fā)時所需的能量較小，能夠吸取可見光而體現(xiàn)出顏色。助色團是含有非鍵電子對的基團。如氨基、羥基和鹵代基等。它們本身并不吸取不不大于200nm的光，但它們可與生色團中電子互相作用，形成非鍵電子與電子的共軛，即p-共軛，減少了躍遷的能量，引發(fā)吸取峰向長波方向移動，使吸取強度增加。3．顯色條件的選擇顯色條件涉及：溶液酸度，顯色劑用量，試劑加入次序，顯色時間，顯色溫度，有機絡合物的穩(wěn)定性及共存離子的干擾等。(1)酸度的選擇溶液的酸度會影響顯色劑的平衡濃度和顏色，也會影響被測金屬離子的存在狀態(tài)和影響絡合物的形成反映，是顯色反映重要的條件之一。適宜的酸度需通過實驗擬定。在實際工作中，普通是固定其它實驗條件，變化反映體系的pH值，測量體系的吸光度A，作A~pH曲線，從實驗曲線中選擇A值大，且隨pH值變化平緩的pH值范疇作為酸度控制范疇。(2)顯色劑的用量為使顯色反映進行完全，需加入過量的顯色劑。但有些顯色反映，顯色劑加入太多，反而會引發(fā)副反映，對測定不利。顯色劑濃度與吸光度的關系有下列三種狀況，要根據(jù)實驗成果來擬定顯色劑的用量。(3)顯色反映時間有些顯色反映瞬間完畢，溶液顏色很快達成穩(wěn)定狀態(tài)，并在較長時間內保持不變；有些顯色反映雖能快速完畢，但有色絡合物的顏色很快開始褪色;有些顯色反映進行緩慢，溶液顏色需經一段時間后才穩(wěn)定。擬定顯色反映時間的實驗辦法，配制好顯色溶液，每隔一定時間測量一次吸光度，制作吸光度-時間曲線，以擬定適宜的顯色時間和穩(wěn)定時間。(4)顯色反映溫度顯色反映大多在室溫下進行。但是，有些顯色反映必需加熱至一定溫度完畢。但要注意某些有色化合物在高溫時分解。(5）溶劑某些有機溶劑能減少有色化合物的解離度，提高顯色反映的敏捷度。如在Fe(SCN)3的溶液中加入丙酮，可使顏色加深。還可能提高顯色反映的速率，影響有色絡合物的溶解度和構成等。(6)干擾及其消除辦法試樣中存在干擾物質會影響被測組分的測定，可采用下列某些方法。a.控制溶液酸度b.加入掩蔽劑c.運用氧化還原反映，變化干擾離子的價態(tài)d.運用校正系數(shù)e.用參比溶液消除顯色劑和某些共存有色離子的干擾。f.選擇適宜的波長g.當溶液中存在有消耗顯色劑的干擾離子時，可通過增加顯色劑的用量來消除干擾。h.預先分離的辦法。9.3.2為了使測定成果有較高的敏捷度，應選擇被測物質的最大吸取波長的光作為入射光，這稱為“最大吸取原則”。選用這種波長的光進行分析，不僅敏捷度高，且能減少或消除由非單色光引發(fā)的對朗伯-比爾定律的偏離。但是，在最大吸取波優(yōu)點有其它吸光物質干擾測定時，則應根據(jù)“吸取最大，干擾最小”的原則來選擇入射光波長。例如丁二酮肟光度法測鋼中鎳，絡合物丁二酮肟鎳的最大吸取波長為470nm，但試樣中大量的鐵用酒石酸鈉掩蔽后，在470nm處也有一定吸取，干擾鎳的測定。為避免鐵的干擾，能夠選擇波長520nm進行測定，即使測鎳的敏捷度有所減少，但酒石酸鐵不干擾鎳的測定。從儀器測量誤差的角度來看，為使測量成果得到較高的精確度，普通應控制原則溶液和被測試液的吸光度在0.2~0.8范疇內。可通過控制溶液的濃度或選擇不同厚度的吸取池來達成此目的。9.3.3運用參比溶液來調節(jié)儀器的零點，可消除由吸取池壁及溶劑對入射光的反射和吸取帶來的誤差，扣除干擾的影響。參比溶液選擇原則：a試液及顯色劑均無色，蒸餾水作參比溶液。b顯色劑為無色，被測試液中存在其它有色離子，用不加顯色劑的被測試液作參比溶液。c顯色劑有顏色，可選擇不加試樣溶液的試劑空白作參比溶液。d顯色劑和試液都有顏色，可將一份試液加入適宜掩蔽劑，將被測組分掩蔽起來，使之不再與顯色劑作用，而顯色劑及其它試劑均按試液測定辦法加入，以此作為參比溶液，這樣就能夠消除顯色劑和某些共存組分的干擾。e變化加入試劑的次序，使被測組分不發(fā)生顯色反映，能夠此溶液作為參比溶液消除干擾。9.4誤差

吸光光度法的精確度較高。普通相對誤差2～5％。

影響精確度的重要因素有儀器測量誤差、非單色光引發(fā)的吸光定律的偏離與化學反映平衡移動引發(fā)的對吸光定律的偏離等。9.4.1儀器測量誤差

任何儀器都有一定的測量誤差，對于分光光度計來說，這是由于光源不穩(wěn)定、電源波動、讀數(shù)誤差等因素造成，屬隨機誤差。根據(jù)Lambert-Beer定律能夠推導出測量誤差的影響因素。若在測定吸光度A時產生了一種微小的絕對誤差dA，則測量A的相對誤差為：,根據(jù)Lambert-Beer定律可得，,微分后得，因此可得：。從Er對T的關系圖可知，當A=0.434時，測量的相對誤差最小，在A為0.2~0.7范疇內，相對誤差較小，因此實際測量時吸光值最佳在此范疇內。6.4.2非單色光引發(fā)的誤差嚴格說來，Lambert-Beer定律只合用于單色光，但事實上用多個分光辦法所得的入射光都含有一定的帶寬，因而造成實際測量值與Lambert-Beer定律偏離。

為盡量避免由于非單色光引發(fā)的對吸取定律的偏離，普通選擇峰值波長進行測量。6.4.3溶液化學反映引發(fā)的誤差溶液對光的吸取程度決定于吸光物質的性質和數(shù)目，溶液中的吸光物質常因解離、締合、形成新的化合物或互變異構體等化學變化而變化溶液中吸光物的濃度，因而造成偏離Lambert-Beer定律。6.4.4其它影響因素其它影響測量的因素尚有：1.介質不均勻：被測溶液若不均勻，入射光除被吸取外，還可能因散射而損失，使吸光度增加，使原則曲線發(fā)生彎曲。2.濃度效應：濃度高時，吸光質點間的靜電作用加大，其吸光行為發(fā)生變化。3.溫度效應：溫度變化時，顯色反映的平衡常數(shù)，吸光質點的摩爾吸光系數(shù)均會發(fā)生變化。4.酸度效應：

酸度變化時，酸堿性吸光質點或電離、或質子化，造成吸光質點濃度變化。5.溶劑效應：

不同種類的溶劑，性質不同，對不同種類的電子躍遷(如、、躍遷)含有不同的影響，使同一物質在不同溶劑中含有不同的吸取光譜特性。6.5紫外可見吸光光度法的應用比色法、可見分光光度法重要應用于試樣中微量組分的測定，也可用于常量組分的測定。它的特點重要有：（1）敏捷度高，這類辦法慣用于測定試樣中1%～10-3%的微量組分，甚至可測定低至10-4～10-6%的痕量組分。（2）精確度較高。（3）操作簡便、快速，儀器構造比較簡樸，成本低。分光光度法應用十分廣泛，幾乎全部的無機離子和許多有機化合物都能夠直接或間接地用分光光度法進行測定。隨著新的、敏捷度高、選擇性好的有機顯色劑和掩蔽劑的不停開發(fā)，只要通過適宜的化學解決，絕大多數(shù)元素都可用分光光度法進行定量測定。另外，分光光度法在對多組分分析以及研究化學平衡、絡合物的構成等方面都有廣泛的應用。紫外分光光度法與可見分光光度法同樣，同屬分子吸取光譜，它重要是指波長范疇為200～400nm的近紫外區(qū)吸取光譜。紫外分光光度計與可見分光光度計的基本構造大致相似，只是光源多為氣體放電光源，如氫燈、氘燈等，其發(fā)射光譜約在180～400nm。也可使用激光作光源，激光含有高強度和高單色性，可提高辦法的敏捷度和精確度。紫外分光光度計所使用的單色器是能透過紫外光的石英棱鏡或光柵。吸取池也必須采用能透